EC n viljely, valmistelu ja käyttö

Hän EC -liemi tai liemi Escherichia coli Se on selektiivinen nestemäinen viljelyalusta. Tätä väliainetta suositellaan standardimenetelmillä kokonais- ja fekaalisten koliformien lukumäärään, todennäköisimmällä numerotekniikalla (NMP) vesi- ja elintarvikkeiden näytteissä, missä pääaine on Escherichia coli.

EC -liemi koostuu kolmoista, laktoosista, sappisuoloista, pipotaasifosfaatista, monopotaasisesta fosfaatista, natriumkloridista ja vedestä. Sen kaava on strategisesti suunniteltu suosimaan kokonais- ja fekaalisten koliformien kasvua ja estämään muiden mukana olevien mikro -organismien kehitystä.

Figuratiivinen esitys EY -liemen valmistelusta. Lähde: Pixabay.com

Bakteerit Escherichia coli Se on tärkein fekaalinen koliform, joka on läsnä saastusaa vedessä ja ruokalähteissä, mikä on tärkeiden maha -suolikanavan vaikutuksia.

On huomattava, että serotyyppejä on monia Escherchia coli; Niistä enteroHemorrágica (EHEC), enteroinvasiivinen (EIEC), enteopatogeeninen (EPEC), enterotoksigeeninen (ETEC) ja Enteroagregrative (EAC) voidaan mainita.

Tällä väliaineella on kyky sallia niiden kehitys, mutta ei pysty erottamaan niitä toisistaan. Tätä varten lisätestit on suoritettava.

Veden ja ruoan mikrobiologinen tutkimus todennäköisimmän määrän (NMP) kokonais- ja fekaalisten koliformien etsimiseksi on protokolla, joka koostuu useista vaiheista; oletettu vaihe, vahvistusvaihe ja valmistumisvaihe. EC -liemeä käytetään vahvistusvaiheessa.

[TOC]

Perusta

EC -liemi

EC -väliaine perustuu välttämättömien ravitsemuselementtien tarjoamiseen kokonais- ja ulosteen koliformien optimaaliseen kehitykseen, johon bakteerit sisällytetään Escherichia coli.

Nämä ravitsemuselementit saavat Tripteinin, joka on erinomainen peptidien ja aminohappojen lähde. Lisäksi se sisältää myös laktoosia, käymiskelpoista hiilihydraattia, joka tarjoaa energiaa ja antaa sinun osoittaa, tuottaako bakteeri kaasua.

Toisaalta väliaine sisältää sappisuoloja, jotka tarjoavat selektiivisen luonteen, koska se estää näytteessä olevien grampositiivisten mikro -organismien kasvua.

Se voi palvella sinua: Nuevo Leónin kasvisto ja eläimistö

Samoin dipotasy fosfaatti. Tämä järjestelmä on välttämätön, koska liemessä oleva laktoosi pyrkii happamaan väliaineen, kun mikro -organismit käyvät sitä, mutta tämä kompensoi fosfaattisuolat.

Siksi nämä elementit ovat välttämättömiä, koska happamuus ilman kontrollia voi vaikuttaa haluttujen mikro -organismien hyvään kehitykseen.

Natriumkloridi stabiloi puolestaan ​​ympäristön, kun taas vesi on liuenneiden aineiden liuotin ja tarjoaa nestemäisen konsistenssin ympäristölle.

EC -liemi, joka on muokattu novobiosiinilla

Okrend ja Rose loivat erilaisia ​​EY -liemiä, nimeltään EC Modified EC -liemi. Modifikaatio koostui sappisuolojen pitoisuuden vähenemisestä ja Novobiocinan 20 mg/dl: n aggregaatista.

Tämä muutos suosii kantojen palautumista Escherichia coli Enterohemorrágica (O157: H7).

Tämä bakteeri -serotyyppi aiheuttaa vakavaa verenvuotopaketin, joka voi aiheuttaa hemolyyttisen ureemisen oireyhtymän (SUH); joka puolestaan ​​voi tuottaa akuutin munuaisten vajaatoiminnan, korkealla kuolleisuusasteella, joka voi nousta jopa 50% vanhuksilla.

Tämän bakteerien aiheuttamat sairastuneesti saastuneiden elintarvikkeiden kulutuksen vuoksi Yhdysvaltain maatalousministeriö (USDA) suosittelee voimakkaasti tämän väliaineen käyttöä.

Valmistautuminen

EC -liemi

Punnitse 37,4 g dehydratoitua väliainetta ja liukene 1 litraan tislattua vettä. Seos on sallittu 5 minuutin ajan. Seuraavaksi lämmönlähteessä se lopulta liukenee heiluttaen usein.

Kun se on liuennut. Steriloi autoklaavissa 121 ° C: ssa 15 minuutin ajan.

Voi palvella sinua: Sphingomyeline: Mikä on, rakenne, toiminnot, synteesi

Keskipitkän pH: n on oltava 6,9 ± 0,2.  Dehydratoidun väliaineen väri on beige ja valmistettu on kirkas keltainen.

Liemit tallennetaan jääkaapissa, kunnes se käytetään. Käyttöhetkellä liemien on oltava huoneenlämpötilassa.

Toisaalta EC -liemi voidaan myös valmistaa kaksinkertaisesti.

EC -liemi, joka on muokattu novobiosiinilla

Punnitse 36,7 g dehydratoitua väliainetta ja liukene 1 litraan vettä. Loput valmistelusta on yhtä suuri kuin edellä kuvaus.

Käyttää

Kokonais- ja ulosteen koliformisianalyysi

EC -liemi on ihanteellinen koliformistutkimuksen vahvistusvaiheeseen NMP -menetelmällä, sekä vesinäytteissä, kuten lääke- ja elintarvikkeissa.

Oletetussa vaiheessa saadut tiukemmat ja kaasuntuotantoliemit tulisi palauttaa kirkkaan vihreissä liemeissä 2 prosentilla ja EY -liemessä.

Kokonaisten koliformien EC -liemiä inkubidaan aerobioosissa 24 - 48 tuntia 37 ° C: ssa, ja fekaalisten koliformien kohdalla niitä inkuboitiin aerobioosissa 24 - 48 tuntia 44 ° C: ssa.

Molemmissa tapauksissa se tulkitaan seuraavasti: kaasuntuotannon hämärät putket pidetään positiivisina. Jos 24 tunnissa ei ole kaasuntuotantoa, inkubointia jatkuu enintään 48 tunniksi.

Positiiviset EC -liemet menevät täydelliseen vahvistusvaiheeseen, joka koostuu palkitsemisesta valikoivissa välineissä, kuten Mac Conkey, EMB tai Endo Endo Agar.

Jos käytettyä liemiä muokataan novobiosiinilla, positiivisia putkia suositellaan muistuttamaan MAC Conkey -agarissa sorbitolin kanssa.

QA

Laadunvalvonta on suoritettava jokaisesta valmistetusta väliaineesta. Ensinnäkin ympäristön steriiliyden on. Tässä mielessä yksi tai kaksi liemiä inokuloimalla aerobioosia 24 tunnin ajan 37 ° C: ssa inkuboitiin. Odotettu tulos on läpinäkyvä liemi, ilman sameutta tai värimuutosta.

Voi palvella sinua: erityinen pätevyys: Ominaisuudet ja esimerkit

Toiseksi tunnettujen kantojen kasvu on arvioitava, jotta voit käyttää seuraavia bakteereja: Escherichia coli, ATCC 8739, Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella typhimurium ATCC 14028.

Kaikissa tapauksissa odotetaan tyydyttävää mikrobikehitystä, joka tarkkailee pilvistä liemiä kaasuntuotannolla JA. koli ja ilman kaasua salmonellaan.

Muita kantoja, jotka voidaan sisällyttää hallintaan, ovat: Staphylococcus aureus ATCC 25923, Enterococcus faecalis ATCC 29212. Nämä kannat on estettävä täysin.

suositukset

-Durham -putkien sijoittaminen on välttämätöntä koliformien tutkimiseksi.

-Levitä väliaine koeputkiin ennen sterilointia, koskaan sen jälkeen.

-Älä käytä, jos väliaineessa on yli 3 kuukautta valmistettu.

-Älä käytä, jos väliaineen tavanomaisten ominaisuuksien muutoksia havaitaan.

Viitteet

1. Britannia Laboratories. Keski -EY. 2015. Saatavana osoitteessa: Britanialab.com
2. JA. koli Enterohemorrhaginen. Elintarviketurvan ja kansanterveyden keskus. 2010. Saatavana osoitteessa: cfsph.horjuttaa.Edu
3. Corporation Neogen. Keskipitkä EC. Saatavana osoitteessa: FoodSefety.Neogen.com
4. Neogen. MOTIFILD EC MUUTETTU NOVOBIOCINA. Saatavana osoitteessa: FoodSefety.Neogen.com
5. Jure M, Condorí S, Leotta G, China I, Miliwebsky E, Allori C, Aulet O, kirjoittanut Castillo M. Havaitseminen, eristäminen ja karakterisointi Escherichia coli Shiga Toksiinin tuottaja tuoreesta jauhetusta lihasta Concepciónin teurastajista, Tucumánin maakunnasta. Mikrobiolin rev -arg; 2010, 42 (4): 284-287.  Saatavana osoitteessa: www.Scielo.org.