Malonaattiliemi, valmistelu ja käyttö

Hän Malonatoliemi Se on diagnostiseen testiin käytetty nestemäinen viljelmäväliaine (malonatotesti), jota käytetään eräiden enterobacteriace -perheen tyylilajeihin. Sen loi Leifson 1.933 ja myöhemmin muokattu Ewingillä, joka lisäsi pienen määrän dekstroosia ja hiivauuttoa alkuperäiseen kaavaan.

Elatusaine koostuu tällä hetkellä hiivauutetta, ammoniumsulfaatista, dipotassiumfosfaatista, monopotonisesta fosfaatista, natriumkloridista, natriummalonaatista, dekstroosista ja bromotimolin sinisestä. Tämä testi sisältyy yleensä enterobakteerien biokemialliseen tunnistusakkuun, joka auttaa erottamaan tiettyjä suvut ja lajit.

Malonato -testin graafinen esitys. -Lla. Negatiivinen testi, b. (Happamoituminen) negatiivinen testi, c. (Keskimmäinen alcalinisaatio) positiivinen testi. Lähde: Public Domainpicures -väriset putket.netto

Malonato -testi perustuu pääasiassa joidenkin mikro -organismien kykyyn käyttää natriummalonatoa yhtenä hiililähteenä ja typen lähteenä ammoniumsulfaattiin.

Malonato -testi antaa yleensä positiivisen tietyissä genrejen lajeissa Enterobacter, Klebsiella ja Citrobacter. Kun taas suurin osa genreistä Escherichia, Salmonella, Shigella, Edwardsiella, Yersinia, Serratia, Morganella, Proteus ja Providencia, antaa negatiivisen reaktion.

[TOC]

Perusta

Malonaattikoe koostuu todisteista.

Useimmat enterobakteerit, jotka eivät käytä malonatoa.

Tässä tapauksessa peptonien käytöstä johtuvat alkalisointiyritykset torjuvat tuottamalla happoja, jotka on syntynyt dekstroosin käymisellä. Samoin dipotassuium ja monopotaasiset fosfaatit toimivat puskurina, joka pitää pH: n 6,7: ssä.

Se voi palvella sinua: Donaxin ympärillä

Siksi, kun testi on negatiivinen, liemi on sama alkuperäinen väri (vihreä). Harvoin väliaine voitiin happea dekstroosin käymisen vuoksi; Ilman peptonien käyttöä ja pH -indikaattori kääntäisi värin keskipitkästä keltaiseksi. Tätä varten pH: n on mentävä 6: een.

Nyt kun tämä testi on positiivinen, mikro -organismissa käytettiin malonatoa ja ammoniumsulfaattia hiili- ja typpilähteinä käyttämättä muita komponentteja.

Tässä tapauksessa väliaine alkalisoituu natriumin vapautumisen ja siitä johtuvan NaOH: n muodostumisen vuoksi. Tässä mielessä PH. Sininen voi olla kirkasta tai intensiivistä (Preussin sininen).

Lopuksi natriumkloridi ylläpitää väliaineen osmolaarisuutta ja vesi on kaikkien komponenttien laimennus.

Tulkinta

Samanvärinen liemi (vihreä): negatiivinen testi

Keltainen liemi: negatiivinen testi

Kirkas tai voimakas sininen liemi: positiivinen testi

Siellä on variantti, nimeltään malonatofenyylialaniiniliemi, nimeltään myös Shaw ja Clarke väliaine. Tässä tapauksessa voidaan analysoida kaksi testiä, malonaton käyttö hiililähteenä ja pyruvihapon tuotanto fenyylialaniinista.

Valmistautuminen

Malonatoliemi

Valittujen kaupallisen talon insertin määrittämät grammat punnitsevat (se voi vaihdella yhdestä toiseen). Raskaat grammat suspendoituu litralla tislattua vettä. Kuumenna hieman sen täydelliseen liukenemiseen asti. Jakele 3 ml väliainetta 13/100 testiputkissa puuvillakansilla.

Steriloi autoklaavissa 121 ° C: ssa 15 tai 20 minuutin ajan.

Viileä. Jos niitä ei käytetä heti, tallenna jääkaapissa ennen käyttöä. Karkaisee liemiä huoneenlämpötilassa ennen niiden inokulointia.

Voi palvella sinua: Giptodon

Keskipitkän pH: n on oltava 6,7 ​​± 0,2. Valmistetun väliaineen väri on pullonvihreä.

Malonatofenyylialaniiniliemi

Punnitse 11 g dehydratoitua väliainetta ja liukene 1 litraan tislattua vettä. Loput valmistelusta on yhtä suuri kuin yllä kuvatulla.

Se voidaan myös valmistaa lisäämällä 2 gr/l fenyylialaniinia malonatoliemilaitteeseen ennen steriloinnin.

Käyttää

Sitä käytetään osana biokemiallista testiparistoa, joka on asennettu Enterobacteriaceae -perheen bakteerien tunnistamiseen.

Auta erota:

-Escherichia ja Serratia (-)-suku Klebsiella ja Enterobacter (+) (-).

-Laji SSP Arizonae Entrico Salsonella SSP, SSP SSP Salame Salmonella Salmonella Enterica SSP Diarizonae (+), lajista Salmonella enterica ssp enterica (-).

-Actinobacillus (-)-suvun Klebsiella-suvusta (-+) (-).

-Joskus se voi auttaa enterobacteriaceae -perheeseen kuuluvien bakteerilajien erilaistumista, kuten ei -fermentoimattomia gram -negatiivisia bakteereja Alcaligenes faecalis (+) Acinetobacter sp (-).

Lähde: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologinen diagnoosi. 5. ed. Pan -American toimitus.-Lla. Argentiina.

Menettely

Kevyemmän alla otetaan osa puhdasta pesäkestä, käyttämällä oikein steriloitua ja jäähdytettyä platinakahvaa. Otettu näyte (kevyt siirros) liukenee malonato -liemeen. Sitä inkuboidaan laiskojen kannen kanssa aerobioosissa lämpötilassa 35 ° C ± 0,2 24 - 48 tunnin ajan.

Voit myös inokuloida malonatoliemettä 18 - 24 tunnin sadosta triptysi -soijaliemessä. Tässä tapauksessa 0,01 ml otetaan steriilillä pipetillä ja malonatolieme on inokuloitu. Sitä inkuboidaan laiskojen kannen kanssa aerobioosissa lämpötilassa 35 ° C ± 0,2 24 - 48 tunnin ajan.

Voi palvella sinua: toissijaiset kuluttajat

Valmis tulokset tulkitaan. Kaikkia sinisen värin jäännöksiä 48 tuntia inkubointia tulisi pitää positiivisina. Testiä ei tule tulkita negatiiviseksi, ennen kuin 48 tunnin inkubaatioaika on toteutettu.

Malonatofenyylialaniinilieme -variantin käytöstä malonato tulkitaan ensin ja sitten lisätään 5 tippaa HCl 1N: tä ja 3-5 tippaa 8-prosenttista ferrikloridia. Tummanvihreä väri tulkitaan fenyylialaniinin positiivisena testinä. Jos päinvastoin, väliaine muuttuu vaaleansiniseksi, testi on negatiivinen fenyylialaniinille.

QA

Väliaineen steriiliyden hallinnan suorittamiseksi yksi tai kaksi liemiä on inkuboitava lämpötilassa 35 ° C ± 0,2 24 tunnin inkubaatiota. Tämän ajan jälkeen ei pitäisi olla sameutta tai värinmuutosta.

Laadunvalvonnassa voit käyttää tunnettuja tai sertifioituja kantoja, kuten: Enterobacter Aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 33945, SSP Arizonae Entrico Salsonella SSP ATCC 13314 ja Escherichia coli ATCC 25922.

Odotetut tulokset ovat:

• Enterobacter Aerogenes, Klebsiella pneumoniae ja SSP Arizonae Entrico Salsonella SSP Ne antavat positiivisen reaktion (puoliksi sininen).
• Puolesta Escherichia coli Tuloksen on annettava negatiivinen, ts. On odotettavissa, että värimuutosta ei ole (vihreä) tai että se muuttuu keltaiseksi glukoosin käymisen vuoksi.

Rajoitukset

Älä käytä liemiä, jotka osoittavat sameutta, saostumia, värimuutoksia tai mitään merkkejä heikkenemisestä.

Viitteet

1. Pedraza J, Sanandres N, Varela Z, Aguirre E, Camacho J. Mikrobiologinen eristys Salmonella spp. ja molekyylityökalut havaitsemiseen. Terveys. Barranquilla (col.) 2014; 30 (1): 73-94. Saatavana osoitteessa: Scielo.org.yhteistyö
2. Bbl. Malonaattiliemi, Ewing Modified. 2007. Saatavana osoitteessa: BD.com
3. Senna Laboratories. Malonatoliemi. Saatavana osoitteessa: tieteellinen.com
4. Renylab. Malonatoliemi. 2013. Saatavana: Tämä.Renylab.Ind.Br
5. Mbiologian diagnostiikka. Malonatoliemi. Saatavana osoitteessa: mbiologia.com
6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologinen diagnoosi. 5. ed. Pan -American toimitus.-Lla. Argentiina.
7. Conda pronadisa -laboratoriot. Malonatofenyylialaniiniliemi. Saatavana osoitteessa: Condalab.com