Sytokemian historia, opinto -esine, hyödyllisyys ja tekniikat

Se Sytokemia Se sisältää sarjan tekniikoita, jotka perustuvat tiettyjen spesifisten aineiden tunnistamiseen ja luovuttamiseen solun sisällä. Solu -biologian haarana pidetään solun morfologian kemialliseen rakenteeseen.

Nykyaikaisen sytologian perustajan Bensleyn mukaan se ilmaisee, että sytokemian tarkoituksena on löytää solujen kemiallinen organisaatio elämän mysteerien ymmärtämiseksi. Samoin kuin dynaamisten muutosten tutkiminen, jotka tapahtuvat eri funktionaalisten vaiheiden aikana.

1: Paget Extramamamaria -tauti. (Hematoksyliini-eosiini) 2: Aivokuoressa havaitut seniiliset levyt Alzheimerin taudin potilaalla. (Hopea impregnointi) 3: Kanin kieli, kollageenikuidut (sininen). Lihaskuidut (violetti nauhat). (Massonin trikrominen). 4: Maksan kudos rasvan rappeutumisella. (Sudan III) 5: Salatussa maksassa. Nekroosi. (Toluidiinin sininen) Lähteet: Wikipedia. com/Useer: KGH [CC BY-SA 3.0 (http: // creativecommons.Org/lisenssit/by-SA/3.0/)]/julkisen verkkotunnuksen tiedostot/Mohit Lalwani [CC BY-SA 4.0 (https: // creativecommons.Org/lisenssit/by-SA/4.0)]

Tällä tavoin on mahdollista määrittää näiden aineiden tapaamisen aineenvaihdunnan rooli.

Sytokemia käyttää kahta päämenetelmää. Ensimmäinen perustuu kemiallisiin ja fysikaalisiin toimenpiteisiin. Nämä tekniikat turvautuvat mikroskoopin käyttöön välttämättömänä instrumenttina kemiallisten reaktioiden visualisoimiseksi, jotka tapahtuivat solun erityisissä aineissa.

Esimerkki: sytochimic -väriaineiden käyttö, kuten ferexgen- tai PAS -reaktio, muun muassa.

Toinen menetelmä perustuu biokemiaan ja mikrokemiaan. Tällä menetelmällä on mahdollista määrittää kvantitatiivisesti solunsisäisten kemikaalien läsnäolo.

Aineista, jotka voidaan todistaa solukudoksessa tai rakenteessa, ovat seuraavat: proteiinit, nukleiinihappot, polysakkaridit ja lipidit.

[TOC]

Sytokemian historia

Sytokemialliset tekniikat keksintöjen jälkeen ovat auttaneet ymmärtämään solujen koostumusta ja ajan myötä erilaisia ​​tekniikoita, joissa käytetään erityyppisiä väriaineita, joilla on affiniteetit ja erilaiset perustat, ovat syntyneet.

Myöhemmin sytokemia avasi uusia näköaloja käyttämällä tiettyjä substraatteja värien tai muiden solun sisällä olevien molekyylien läsnäolon värjäytymiseen.

Samoin muut tekniikat, kuten immunosytocyys. Immunosytokemia perustuu antigeeni-vasta-aineen reaktioihin.

Toisaalta sytokemia on käyttänyt myös fluoresoivia aineita, joita kutsutaan fluorokromiksi, jotka ovat erinomaisia ​​markkereita tiettyjen solurakenteiden havaitsemiseksi. Fluorokromin ominaisuuksien vuoksi se korostaa rakenteita, joihin se on asetettu.

Mitä sinä opiskelet?

Biologisessa näytteessä käytetyillä erilaisilla sytokemiallisilla tekniikoilla on jotain yhteistä: korostavat tietyn tyyppisen aineen esiintymistä ja sen sijainnin tunteminen arvioitaessa biologisessa rakenteessa riippumatta siitä, onko se solutyyppi vai kudos.

Nämä aineet voivat olla entsyymejä, raskasmetalleja, lipidejä, glykogeeniä ja määriteltyjä kemiallisia ryhmiä (aldehydit, tyrosiini jne.-A.

Näiden tekniikoiden toimittamat tiedot voivat ohjata paitsi solujen tunnistamista myös erilaisten patologioiden diagnoosiin.

Esimerkiksi sytokemiallinen värjäys on erittäin hyödyllistä erottaa erityyppiset leukemiat, koska jotkut solut ekspressoivat tiettyjä keskeisiä entsyymejä tai aineita ja toisia ei.

Toisaalta on huomattava, että sytokemian käytön mahdollistamiseksi on otettava huomioon seuraavat näkökohdat:

Voi palvella sinua: Gram -tahra

1) Aine on immobilisoitava paikassa, jossa se on luonnollisesti.

2) Aine on tunnistettava käyttämällä substraatteja, jotka reagoivat erityisesti sen kanssa, ei muiden yhdisteiden kanssa.

Apuohjelma

Näytteet, joita voidaan tutkia sytokemiallisten tekniikoiden avulla, ovat:

- Pidennetty perifeerinen veri.

- Luuydin pidennetty.

- Histokemian tekniikoille asetettu Fabrices.

- Sytokosentrifugointisolut.

Sytokemialliset tekniikat ovat suurta tukea hematologian alueella, koska niitä käytetään laajasti auttamaan tietyntyyppisten leukemian diagnosointia ja erilaistumista.

Esimerkiksi: Matting -reaktiot eroavat myelomonosyyttisen leukemian välillä akuutista monosyyttisestä leukemiasta.

Näiden potilaiden luuytimen levitykset ja perifeerinen veri ovat samanlaisia, koska joitain soluja on vaikea tunnistaa vain morfologisesta näkökulmasta. Tätä varten kiinteistötesti suoritetaan.

Ensimmäisessä he antavat positiiviset spesifiset matot, kun taas toisessa epäspesifiset asiat antavat positiivisia.

Ne ovat myös erittäin hyödyllisiä histologiassa, koska esimerkiksi raskasmetallin väritystekniikan (arkaluontoisen kyllästymisen) käyttö värjää voimakkaita ruskeita retikulaarisia kuituja sydänlihaksen kudoksessa.

Sytokemian tekniikat

Eniten käytettyjä tekniikoita selitetään alla:

- Väriaineen käyttö

Käytetyt väriaineet ovat hyvin monimuotoisia sytokemiallisissa tekniikoissa, ja ne voidaan luokitella useiden näkemysten mukaan:

Radikaalin mukaan, jolle heillä on affiniteetti

Ne on jaettu: hapoihin, emäksisiin tai neutraaleihin. Ne ovat yksinkertaisimpia ja eniten käytettyjä historian ajan, mikä mahdollistaa happofiilien basofiilisten komponenttien erottamisen. Esimerkki: hematoksyliini-eosiinin väritys.

Tässä tapauksessa solujen keskukset on värjätty sinisiksi (ne ottavat hematoksyliinin, joka on emäksinen väriaine) ja punaiset sytoplasmat (ne ottavat eosiinin, joka on hapon väritys).

Niiden tarjoaman värin mukaan

Ne voivat olla ortokromaattisia tai metakromaattisia. Ortokromaattiset ovat ne, jotka värjäävät samanväriset rakenteet, jotka väriaineella on. Esimerkiksi Eosinan tapaus, jonka väri on punainen ja värjätty punaiseksi.

Metakromaattinen sen sijaan värjäys eri värien rakenteet kuin niiden väristä, kuten toluidiini, jonka väri on sininen ja silti väriaine violetti.

Elintärkeä tai supravital väritys

Ne ovat vaarattomia värityksiä, ts. Ne värittävät solut ja pysyvät hengissä. Näitä väriaineita kutsutaan elintärkeiksi (esim. Tripánin sininen väriaineiksi) tai supravitaliksi (esim. Januksen vihreä väriaineen mitokondrioihin tai neutraaliksi punaisiksi, jotka värjäävät lysosomeja)).

- Lipidien havaitseminen rasvan liukoisten väriaineiden kautta

Osmiumtetroksidi

Värjäys lipidit (tyydyttymättömät rasvahapot) mustat. Tätä reaktiota voidaan havaita optisella mikroskoopilla, mutta koska tämä väriaine on korkea tiheys, voidaan myös näyttää elektronisella mikroskoopilla.

Sudan III

On yksi käytetyistä. Tämä väriaine leviää ja liuotettu kudoksiin, kertyen lipidipisaroihin. Väri on scarlet punainen.

Musta Sudanin värjäys b

Se tuottaa parempaa kontrastia kuin aikaisemmat, koska se kykenee myös liukenemaan fosfolipideihin ja kolesteroliin. Se on hyödyllinen atsurofiilisten ja spesifisten rakeiden havaitsemiseksi kypsien granulosyyttien ja niiden esiasteiden havaitsemiseksi. Siksi tunnistaa myeloidiset leukemiat.

Se voi palvella sinua: metyylipunainen: Ominaisuudet, valmistelu ja sovellukset

- Aldehydien tinion (Schiffin perchyiinihappovärjäys)

Schiffin periódiinihappovärjäys voi havaita kolmen tyyppiset kyläryhmät. He ovat:

- Vapaat aldehydit, luonnollisesti kudoksissa (plasmireaktio).

- Selektiivisen hapettumisen tuottamat aldehydit (PAS -reaktio).

- Selektiivisellä hydrolyysillä (Faulgen -reaktio) syntyneet aldehydot (Faulgen -reaktio).

PAS -reaktio

Tämä värjäys perustuu tietyntyyppisten hiilihydraattien, kuten glykogeenin, havaitsemiseen. Schiffin periódiinihappo rikkoo hiilihydraattien C-C-sidoksia 1-2 glykoliryhmän hapettumisen vuoksi, vapauttaen aldehydiryhmät.

Vapaat aldehydiryhmät reagoivat Schiff -reagenssin kanssa ja muodostavat violetin punaisen yhdisteen. Violetin punaisen värin ulkonäkö osoittaa positiivisen reaktion.

Tämä testi antaa positiivisesti kasvisoluissa, havaitsee tärkkelystä, selluloosaa, hemiselluloosia ja peptiineja. Eläinsoluissa se havaitsee muciinit, mukoproteiinit, hyaluronihappo ja kitiini.

Lisäksi se on hyödyllinen lymfoblastisten leukemioiden tai erytroleukemian diagnoosissa muun muassa myelodisplastisen tyypin patologioiden joukossa.

Happohiilihydraattien tapauksessa sinisen alciánin kimppu voidaan käyttää. Testi on positiivinen, jos havaitaan vaaleansininen/turkoosi väri.

Plasmaleaktio

Plasmaleaktio korostaa tiettyjen pitkien ketjujen alifaattisten aldehydien, kuten palmitaalin ja stearalin, läsnäoloa. Tämä tekniikka koskee jäädytettyjä histologisia leikkauksia. Se on suoraan Schiff -reagenssin kanssa.

Feregen -reaktio

Tämä tekniikka havaitsee DNA: n läsnäolon. Tekniikka koostuu kudoksen alistamisesta, joka on kiinnitetty heikkoon happohydrolyysiin myöhemmin reagoida Schiff -reagenssin kanssa.

Hydrolyysi jättää paljastamaan deoksiriboosin aldehydit deoksiribose-puuriiniyhdistyksen tasolla. Sitten Schiff -reagenssi reagoi ilmaisia ​​aldehydien kanssa.

Tämä reaktio on positiivinen ytimissä ja negatiivinen solujen sytoplaseissa. Positiivisuus todistaa punaisen värin läsnäolosta.

Jos tämä tekniikka yhdistetään vihreän pyroniinivihreään, on mahdollista havaita samanaikaisesti DNA ja RNA.

- Proteiinirakenteiden sytochimic -värjäys

Tätä varten voidaan käyttää Milloon -reaktiota, jota elohopea -nitraattia käytetään reagenssina. Aromaattisia aminohappoja sisältävät rakenteet värjätään punaisiksi.

- Sytokemiallinen värjäys, joka käyttää substraatteja entsyymien esiintymisen osoittamiseksi

Nämä värjäys perustuu biologisen näytteen inkubointiin tietyllä substraatilla ja reaktiotuote reagoi myöhemmin diatsoisten suolojen kanssa värillisen kompleksin muodostamiseksi.

Esterasat

Näitä entsyymejä on läsnä joidenkin verisolujen lysosomeissa ja ne kykenevät hydrolysoimaan orgaanisia estereitä vapauttaen naftolia. Tämä viimeksi muodostaa liukenemattoman sokerin, kun se liittyy dialyyrisuolaan, värjäämällä paikka, jossa reaktio tapahtuu.

Substraatteja on useita ja riippuen siitä, mitä voidaan käyttää. Ensimmäiset ovat läsnä myeloidisarjan epäkypsissä soluissa ja toinen monosyyttisen alkuperän soluissa.

Voi palvella sinua: Peruskangas: Mikä on, ominaisuudet ja toiminnot

Tiettyjen mattojen määrittämiseen käytetty substraatti on: NAFTOL-AS-D-KLOROASEATIA. Vaikka epäspesifisten mattojen määrittämiseksi, useita substraatteja, kuten asetaatti -naftolia, nafyyli -aph -konferettia asetaatti ja butyraatin nafyylialfa.

Molemmissa tapauksissa solut värjätään punaiseksi voimakkaassa punaisessa, kun reaktio on positiivinen.

Myeloperoksidaasi

Tätä entsyymiä löytyy granulosyyttisten ja monosyyttisolujen atsurofiilisistä rakeista.

Sen havaitsemista käytetään myeloidisen alkuperän leukemian erottamiseen imusolmukkeiden suhteen. Solut, jotka sisältävät myeloperoksidaasien kolon ocher keltaisesta.

Fosfataasit

Nämä entsyymit vapauttavat fosforihappoja eri substraateista. Ne eroavat toisistaan ​​substraatin, pH: n ja estäjien ja inaktivoreiden vaikutuksen mukaan.

Tunnetuimpia ovat fosfomonosterae, jotka hydrolysoivat yksinkertaisia ​​estereitä (P-O). Esimerkki: alkalinen fosfataasi ja happama fosfataasi, samoin kuin fosfamidaasit, jotka hydrolysoivat ammattiliitot (P-N). Näitä käytetään lymfoproliferatiivisten oireyhtymien erottamiseen ja tricholeucemian diagnosointiin.

- Trikromiset värit

Mallary-Azan-trikrominen

Ne ovat hyödyllisiä sytoplasman erottamiseksi solukuitusoluista. Solut on värjätty punaiseksi ja sinisen kollageenikuidut.

Massonin trikrominen

Tällä on sama hyödyllisyys kuin edellinen, mutta tässä tapauksessa solut ovat värjätty punaisiksi ja vihreän kollageenikuidut.

- Väriaine, joka tahrattiin spesifisiä organeleja

Janus Green

Tämä värjää selektiivisesti mitokondrioihin.

Hopea- ja osmihapposuolat

Tahra Golgi -laitteeseen.

Toluidiininsininen

Nissin ruumiit tahra

Hopea- ja pas -suolat

Retikulaariset kuidut ja pohjalevyn tahra.

Orcein- ja Fuchsin Resorcin

Värjätä joustavat kuidut. Ensimmäisen kanssa ne on värjätty ruskeiksi ja toisen sinisen tai voimakkaan violetin kanssa.

- Muut sytokemiassa käytetyt tekniikat

Fluoresoivien tai fluorokromien käyttö

On tekniikoita, jotka käyttävät fluoresoivia aineita tutkimaan rakenteen sijaintia solussa. Nämä reaktiot visualisoidaan erityisellä mikroskoopilla, jota kutsutaan fluoresenssiksi. Esimerkki: IFI -tekniikka (epäsuora immunofluoresenssi).

Solukomponenttien havaitseminen immunosytokemialla

Nämä tekniikat ovat erittäin hyödyllisiä lääketieteessä, koska ne auttavat havaitsemaan tietyn solurakenteen ja myös kvantifioimaan sen. Tämä reaktio perustuu antigeeni-vasta-aineen reaktioon. Esimerkiksi: Elisan tekniikat (entsyymi -immuno -essee).

suositukset

- Väriaineen asianmukaisen toiminnan arvioimiseksi on tarpeen käyttää levitysohjauksia.

- Tuorekastea tulisi käyttää sytokemiallisille väreille. Jos ne eivät ole mahdollista, ne on suojattava valolta ja säilytettävä 4 ° C: ssa.

- On huolehdittava siitä, että käytetty kiinnitin ei vaikuta negatiivisesti aineeseen tutkimaan. Eli on vältettävä, että se pystyy purkamaan tai estämään sen.

- Fiittien käyttöaikaa on kunnioitettava, koska sen pitäisi yleensä vain viimeisen sekunnin ajan, koska levityksen alistaminen enemmän aikaa kiinnitys voi vahingoittaa joitain entsyymejä.

Viitteet

1. ”Sytohymics." Wikipedia, ilmainen tietosanakirja. 30. kesäkuuta 2018, 17:34 UTC. 9. heinäkuuta 2019, 02:53 Saatavana osoitteessa: Wikipedia.org
2. Villarroel P, Suárez C: stä. Metalli -kyllästysmenetelmät sydänlihaksen retikulaaristen kuitujen tutkimiseksi: vertaileva tutkimus. RFM 2002; 25 (2): 224-230. Saatavana osoitteessa: Scielo.org
3. Santana A, Lemes A, Bolaños B, Parra A, Martín M, Molero T. Happofosfataasin sytokemia: metodologiset näkökohdat. REV Diagniabioli. 200; 50 (2): 89-92. Saatavana osoitteessa: Scielo.org
4. Kirjoittanut Robertis e, kirjoittanut Robertis M. (1986). Solu- ja molekyylibiologia. 11 menee painos. Ateneo -toimitus. Buenos Aires, Argentiina.
5. Klassiset työkalut solusbiologian opiskeluun. TP 1 (komplementaarinen materiaali) - Solu -biologia. Saatavana osoitteessa: DBBE.viiva.Uba.AR