Czapek -pää, valmistelu, käyttö ja rajoitukset

Hän Czapek -agar (CZA) on selektiivinen kiinteä viljelyväliaine, joka on erityisesti suunniteltu bakteerien ja saprofyyttien sienten viljelyyn. Sen on luonut kasvitieteilijä Friedrich Johann Franz Czapek, Puolan alkuperä ja amerikkalainen kemisti Arthur Wayland Dox; Siksi tämä agar tunnetaan myös nimellä czapek-dox puoli.

Alkuperäinen väliaine oli nestemäinen, mutta myöhemmin agar lisättiin kiinteän väliaineen tekemiseen. Czapek -väliaine koostuu natriumnitraatista, bipotaasiasta, magnesiumsulfaatista, kaliumkloridista, rautasulfaatista, sakkaroosista, agarista ja tislattua vettä.

Czapek a. Aspergillus parasiticus b. Aspergillus fumigatus Lähde: A. Medmyco [CC BY-SA 4.0 (https: // creativecommons.Org/lisenssit/by-SA/4.0)]/ B. Kuva: Dr. David Midgley. Wikipedia.com

Czapek -agar on 7.3, mutta on olemassa variantti, johon lisätään 10% maitohappoa, jonka pH on 3,5. Tätä happamaa väliainetta käytetään happofiilisten mikro -organismien viljelyyn.

Toisaalta jotkut kaupalliset talot modifioivat Czapek -agarin koostumusta muuttamalla magnesiumsulfaattia ja bipotaasista fosfaattia glykefosfaatilla; Tämä modifikaatio estää tavanomaisella kaavalla havaitun magnesiumfosfaatin sakan. Samoin on toinen variantti, johon hiivauutetta lisätään.

Lopuksi, American Public Health Association APHA suosittelee Czapek -agaria Actinomycetes SP, Aspergillus SP, Paecilomyces SP ja Penicillium Sp. Näille lajille on ominaista ympäristömikro -organismeja ja opportunistisia taudinaiheuttajia.

[TOC]

Perusta

Tämä väliaine sisältää sakkaroosia; Tämä hiilihydraatti toimii hiililähteenä, kun taas natriumnitraatti on typen lähde, mutta toisin kuin muut keinot, typpi on epäorgaaninen tyyppi.

Tästä syystä CzaPek -väliainetta pidetään selektiivisinä, koska se voi kehittää vain mikro -organismeja, jotka kykenevät käyttämään epäorgaanisia yhdisteitä ainoana typen lähteenä.

Keskipitkän osmolaarisuuden säätelyaineena on bipotaasinen fosfaatti. Toisaalta magnesiumsulfaatti, kaliumkloridi ja rautasulfaatti tarjoavat välttämättömiä mineraaleja saprophyyttien mikro -organismien kasvulle (vapaa elämä). Tällä kaavalla muodostuu magnesiumfosfaatin sakka.

Se voi palvella sinua: Agar -standarditili: perusta, valmistelu ja käyttö

Lopuksi, agar-lisäys on yhdiste, joka tarjoaa kiinteän konsistenssin ympäristölle ja vesi on kaikkien komponenttien liuotin.

Modifioidun Czapek -agar -kaavan kanssa saostumisen muodostumista ei ole ja parantaa joidenkin sienten kasvun kasvua.

Czapek -happaman agarin äärimmäinen happamuus tekee tästä selektiivisemmän keinon, mikä mahdollistaa vain happofiilisten mikro -organismien kasvun, jotka kykenevät käyttämään epäorgaanista typpeä. Kun taas Czapek-Levadura Agar parantaa tiettyjen sienten suorituskykyä.

Valmistautuminen

Puoli CzaPek-Dox

Punnitse 49 g dehydratoitua viljelmää ja liukene tislatuun veteen. Levitä lämpöä kiehua. Ravista seosta usein, kunnes se on täysin liuennut.

-Czapek -agar

Jakelee seos liuenneen putkiin ja autoklavaatti 121 ° C: ssa 15 minuutin ajan. Kun poistetaan autoklaavesta, homogenisoi ennen nukkumaanmenoa ja anna kiinteyttää.

-CzaPek Agar -levyt

Autoklavoi seos, joka on liuennettu 121 ° C: seen 15 minuutin ajan ja kun annat jäähtyä 50 ° C: ssa, homogenisoi ja kaata 20 ml steriiliin Petriin. Anna jähmettyä, sijoittaa ja säästää jääkaappiin, kunnes käyttö.

PH: n on oltava 7,3 ± 0,2. Dehydratoidun väliaineen väri on valkoinen ja valmistettu on kevyt meripihka, hieman pilvinen flokkulantin sakan läsnäolon vuoksi.

Puoli czapek ph -happo

Valmista kuvatulla tavalla, mutta lisää 10 ml steriiliä steriilihappoa 10%: iin jokaiselle litralle valmistettua väliainetta. Modifioidun CzaPek -väliaineen on oltava pH: ssa 3,5 ± 0,2.

Puoli muokattu Czapek

Punnitse 45,4 g dehydratoitua väliainetta ja liukene 1 litraan vettä. Loput valmistelusta on yhtä suuri kuin edellä kuvaus. Dehydratoidun väliaineen väri on valkoinen ja valmistettu on valkeahko väri. Väliaineen lopullinen pH on 6,8 ± 0,2.

Se voi palvella sinua: Vimentin: Ominaisuudet, rakenne, toiminnot ja käyttötarkoitukset

Puoli czapek-levadura

Kutsutaan myös hiivan czapek-extract (CYA). Sisältää klassisen Czapek Agar Plus -hiivauutteen elementit.

Käyttää

CzaPek -väliainetta käytetään etsimään saprofyyttejä mikro -organismeja maaperän näytteissä, vihanneksissa, jyvissä, ilmassa, hyönteissä, muun muassa.

Czapek A -happamaa agaria käytetään happofiilisten mikro -organismien kasvuun, kun taas modifioitu CzaPek -agar on erityisen hyödyllinen klamidosporien muodostumisessa kompleksisissa lajeissa Candida albicans.

Lopuksi, Czapek -levadura -agar on erittäin hyödyllinen Aspergilluksen ja Penicilliumin eristämisessä.

Kylvää

-Czapek -agar

Actinomycetes -ohjelman etsimiseksi maassa, jatka seuraavasti: Näyte, jolla on vesifenolisoitu 30 minuuttia, käsitellään ja sitten 1 ml suspensiota Czapek -agarissa istutetaan. Inkuboi 28 ° C: ssa 5 - 7 päivää.

Vihannes-, vilja- ja hyönteisnäytteille ne sijoitetaan suoraan agariin. Laimennukset voidaan myös tehdä ja kylvää 0,1 ml agarin pinnalla.

-Muokattu Czapek -agar

Kylvölle käytetään suoraa kättä tai neulaa, se läpäisee tampon kanssa ja inokuloi kauhan, joka tekee puhkaisun, kunnes koskettaa levyn pohjaa. Inkuboi 24 tuntia 28 ° C: ssa ja tutkitaan mikroskoopilla levyn ylä- ja alapuolella tarkkailemaan, onko klamidosporit muodostuneet.

Inkubaatiolämpötila ja aika

Lämpötila- ja inkubaatioaika vaihtelevat riippuen eristämään tarkoitettujen mikro -organismien tyypin mukaan. Yleensä levyjä inkuboidaan yhdellä tai kahdella viikolla lämpötila -alueella 20 - 25 ° C.

Joillekin kanoille on kuitenkin erityisiä olosuhteita. Esimerkiksi useimmilla Aspergilluksen suvun lajeilla on optimaalinen kasvu 30 ° C: ssa; kuitenkin -Lla. fumigatus kasvaa 50 ° C: ssa.

Inkubaatioajalla yksi tai kaksi viikkoa on kuitenkin normaali Candida albicans Se voi kehittyä 24 - 48 tunnissa 25 ° C: ssa.

Voi palvella sinua: lipogeneesi: ominaisuudet, toiminnot ja reaktiot

Joidenkin pesäkkeiden ominaisuudet tässä väliaineessa

-Penicillium atravenetum

Se tapahtuu 12 päivän inkubaatiossa 27 ° C: ssa. Sen pesäkkeet ovat pieniä (25 mm).

Pesäkkeet näyttävät olevan listalta, valkoisella määriteltyllä reunalla ja keskustassa se esittelee vihertävän sinisen sävyn, joka tulee harmaaksi. Pesäkkeen päinvastainen on oranssi, asettamalla samanvärisen keskelle pigmenttituotannon avulla.

-Aspergillus niger

Se kehittyy valkoisesta tai keltaisella sienellä ja mustilla itiöillä.

-Candida albicans

Kermainen beige kevyet pesäkkeet kehittyvät kirkkaasti. Modifioidussa Czapek -agarmuodossa.

-Aspergillus parasiticus

Tummanvihreä sieneeli kehittyy 7 päivässä 25 ° C: ssa.

QA

Viljelmäväliaineen laadun arvioimiseksi voidaan kylvää sertifioidut ohjauskannat, kuten: Aspergillus niger MKTA 16404, Candida albicans MKTA 10231.

Aspergillus niger Kehittää valkoisesta tai keltaisesta sieneelistä ja mustista itiöistä noin viidessä päivässä, kun taas Candida albicans Sillä on tyydyttävä kasvu 24 tunnissa inkubaatiossa 25 ° C: ssa; Pesäkkeet ovat kerman väriä.

Rajoitukset

Jotkut tutkimukset ovat paljastaneet, että aktinomykettien palautumiseksi agar, jolla on paras suorituskyky, on paavin dekstroosi -agar, joka jättää Czapek -agarin toiselle sijalle, mutta Aspergilluksen ja Penicilliumin palautumiseen Czapek Agar on se, joka tarjoaa suurimman palautumisen aste.

Viitteet

1. Dávila M, et ai. Maatalouden tärkeät fytopatogeeniset sienet vastakkaiset aktinomyketit. Rev. Mex. tiede. Maatalous 2013, 4 (8): 1187-1196. Saatavana osoitteessa: Scielo.org.
2. Luna M, Lozada ja vehnä. Eristys Aspergillus niger, Ocratoksiini A -tuottajat, Café Verde (Arabica Coffea). Rev. Mex. Mikrofoni . 2010; 32: 63-68. Saatavilla.Scielo.org.
3. Wikipedian avustajat. Czapek -media. Wikipedia, ilmainen tietosanakirja. 13. tammikuuta 2019, 20:30 UTC. Saatavana osoitteessa: sisään.Wikipedia.org
4. Conda pronadisa -laboratoriot. Modifioitu CzaPek-Dox-agar. Saatavana osoitteessa: Condalab.com
5. Mikrokokin viljelyalusta. Czapek-dox-agar. GoDPONEBLE julkaisussa: mediakulttuuri.com