Alustaa

E lungerangular tahra. Coli EMB -agarilla. Lähde: Eunice Laurent, CC BY-SA 4.0, Wikimedia Commons

Mikä on agar -eMb?

Hän Alustaa Se on selektiivinen ja differentiaalinen kiinteä viljelyväliaine, jota käytetään gram -negatiivisten bakteerien, lähinnä Enterobacteriacee -perheen ja muiden ei -tarvittavien gram -negatiivisten bakteerien eristämiseen. Se tunnetaan myös lyhenteellä EAM, mikä tarkoittaa metyleenin eosina-azulia.

Tämän väliaineen ovat luoneet Holt-Harris ja Teague vuonna 1916. Se sisältää peptonia, laktoosia, sakkaroosia, dipotassiumfosfaattia, agaria, eosiinia, metyleenisinistä ja vettä. Se on hyvin samanlainen kuin MacConkey -agar, varsinkin jos käytetään Levine -agaria, joka ei sisällä sakkaroosia.

Itse asiassa jokainen laboratorio päättää, toimiiko se toisen tai toisen kanssa, koska ne täyttävät saman toiminnon, vaikka biokemiallisesti ne ovat erilaisia.

Se aiheuttaa jopa samoja haittoja kuin klassinen MacConkey Agar Swarmingin sukupuoleen tuotannossa Proteus. Siksi tämän ilmiön välttämiseksi agarin pitoisuutta voidaan lisätä jopa 5%: iin.

Perusta

Valikoiva

EMP -agar on hienovaraisesti selektiivinen, koska se sisältää aniliinisen (eosiinin ja metyleenisinisen) värityksen, joka toimii estäjinä, estäen useimpien gram -positiivisten bakteerien kasvu.

Tällä agarilla on kuitenkin haittaa siitä, että jotkut grampositiiviset bakteerit voivat vastustaa estävän aineen läsnäoloa ja kasvaa pieninä värittöminä, kuten esimerkiksi Enterococcus faecalis ja hieman Staphylococcus.

Tietyt hiivat voivat myös kasvaa, kuten Candida albicans -kompleksi, jotka antavat hyvin pieniä vaaleanpunaisia ​​pesäkkeitä. Klamidosporit voivat jopa kehittyä tästä hiivasta, jos näyte kylvetään syvyyden mukaan.

Ero

Toisaalta EMB -agar on myös differentiaaliväli, koska näillä väriaineilla (eosiini ja metyleenisininen) on ominaisuus muodostaa sakka happamassa pH: ssa, siksi ne toimivat saman tuotannon indikaattoreina.

Voi palvella sinua: allometria

Siksi heikosti käymis- tai sakkaroosibakteerit tuottavat violetteja värejä 24 - 48 tunnissa. Esimerkiksi genrejä Klebsiella, Enterobacter ja Serratia.

Ne bakteerit, jotka käyvät voimakkaasti laktoosia, kuten Escherichia coli, tai sakkaroosi, kuten Enterokoliittinen yersinia jompikumpi Proteus Penneri, Ne muodostavat vihertävän mustan sakan, joka antaa metallisen kirkkauden esiintymisen näissä lajeissa.

On huomattava, että jos Emb Levine -väliainetta käytetään (ilman sakkaroosia), Enterokoliittinen yersinia ja Proteus Penneri He tuottavat läpinäkyviä pesäkkeitä.

Bakteereja, jotka eivät käy laktoosia tai sakkaroosia. Esimerkiksi genrejä Salmonella ja Shigella, muiden joukossa.

On myös tärkeää korostaa sukupuoli Acinetobacter Se voi esitellä sinisiä laventelipesäkkeitä, vaikka se ei olekaan laktoosin fermetriä tai sakkaroosia, mutta niillä on ominaisuus kiinnittää metyleeninsininen sen soluseinämään. Tämä voi tapahtua myös muiden oksidatiivisten bakteerien kanssa.

Valmistautuminen

Alkuperäinen kuivattu väliaine on kevyt beige. Tämän viljelyväliaineen valmistamiseksi 36 grammaa kuivunutta väliainetta on painotettava ja suspendoitava korjaukseen, joka sisältää litran tislattua vettä.

Kun olet jättänyt seoksen 5 minuuttia levossa, vie Fixola lämmönlähteeseen sekoittaen voimakkaalla ja jatkuvalla tavalla, kunnes se kiehuu ja liukenee kokonaan.

Seuraavaksi jo liuennut viljelyalusta on steriloitava käyttämällä autoklaavia 121 ° C: ssa 15 minuutin ajan.

Aika valmis, se poistetaan autoklaavasta ja anna seistä hetkeksi. Sitten on edelleen kuuma (45-50 ° C) välillä 15-20 ml agaria jokaisella Petri-steriilillä levyllä. Mediumin on oltava sininen lakmus.

Voi palvella sinua: Amilase: Ominaisuudet, luokittelu, rakenne, toiminnot

Tarjoilun jälkeen levyt jätetään hieman peittämättömäksi, kunnes agar jäähtyy vähän. Sitten ne katetaan ja annetaan jähmettyä kokonaan. Myöhemmin ne tilataan käänteisissä verihiutaleissa ja ne varastoidaan jääkaapissa (8 ° C), kunnes käyttö.

Tämä toimenpide suoritetaan mieluiten laminaarivirtauskellossa tai Bunsenin kevyemmän edessä saastumisen estämiseksi.

On tärkeää pitää mielessä, että jokainen kaupallinen talo osoittaa sen määrän, joka on punnittava kulttuurivälineen valmistelemiseksi.

Väliaineen lopullinen pH on oltava 7.2 ± 0.2

Sovellukset

• Tätä väliainetta käytetään virtsan ja ulosteiden tai minkä tahansa tyyppisten kliinisten näytteiden kylvöön, varsinkin jos epäillään ei -tarvittavien gram -negatiivisten bacillien läsnäoloa, kuten enterobacteriaceae -perheeseen kuuluva bakilli, joka kasvaa erittäin hyvin tässä väliaineessa.
• Genrejen enteropatogeeniset bakteerit Shigella ja Salmonella Ne erottuvat värittömästä tai hieman meripihkaholauksistaan.
• Muut ei -hallitsemattomat bakteerit kasvavat, kuten Aeromonas, pseudomonas, acinetobacter, muiden joukossa.
• Lisäksi tämä väliaine on erittäin hyödyllinen ruoan ja veden mikrobiologisessa analyysissä, koska se on ihanteellinen koliformien määrittämisen täydelliseen vahvistusvaiheeseen JA. koli Murskalaisista EC -liemeistä, todennäköisimmistä numerotekniikasta (NMP).

QA

Varmistaaksesi, että äskettäin valmistettu viljelyväliaine toimii hyvin, kontrollit voidaan kylvää tarkkailemaan pesäkkeiden ominaisuuksia ja varmistamaan, että ne antavat odotetusti.

Tätä varten voit käyttää ATCC -kantoja tai hyvin tunnistettuja kantoja JA. koli, Enterobacter Aerogenes, Klebsiella sp, Salmonella typhimurium, Shigella flexneri, Pseudomonas aeruginosa ja joitain grampositiivisia bakteereja, kuten S. aureus.

Sen odotetaan JA. koli Luo hyvin kehittynyttä sinertävää mustia pesäkkeitä vihreällä metallisella kiiltolla. Sillä aikaa Enterobacter Aerogenes ja Klebsiella sp Niiden on annettava hyvin kehittyneitä limakalontoja sinertäviä mustia.

Se voi palvella sinua: Winograsky -sarake

Omalta osaltaan, Salmonella Typhimurium ja Shigella flexneri Niiden on kehitettävä suuria, värittömiä pesäkkeitä tai vaalealla keltaisella värillä.

Lopuksi genre Pseudomonas aeruginosa Se kasvaa värittöminä pesäkkeinä, joiden koko on epäsäännöllinen, kun taas grampositiiviset bakteerit tulisi estää kokonaan tai kasvaa hyvin pienten pesäkkeiden kanssa.

Viimeiset näkökohdat

Joskus sterilointi aiheuttaa metyleenin sinisen vähentymisen, tarkkailemalla oranssia väliainetta. Metyleenin sininen oksidin ja purppuran värin palauttamiseksi se on sekoitettava varovasti, kunnes väri palautuu.

Steriloidun jälkeen väriaine voi saostaa, joten se on sekoitettava hyvissä ajoin ennen Petri -levyjen tarjoilua.

Viitteet

1. Eosina ja metyleenin sininen agar. Toipunut Calabista.com.
2. Levine E.M.B -. (Eosinan ja metyleenin sinisen kanssa). Toipunut Britanialabista.com.