Simmons sitraattiagar

Pseudomonas fluorescens Simmons Citraattiagarissa. Lähde: Epäily, CC BY-SA 3.0, Wikimedia Commons

Mikä on Simmons Citrates Apar?

Hän Simmons sitraattiagar Se on kiinteä väliaine, jota käytetään biokemiallisena mikro -organismien tunnistamistestinä, erityisesti gram -negatiivisia bakteereja. Alkuperäisen välineen on luonut Koser vuonna 1923.

Koserin sitraattiväliaine koostui liemestä, joka sisälsi natriumfosfaattia, ammoniumfosfaattia, monopotonista fosfaattia, magnesiumsulfaattia ja natriumsitraattia.

Kuten voidaan nähdä, ainoa hiililähde väliaineessa on sitraatti, ja typpi on ammoniumfosfaatti, jättäen proteiinit ja hiilihydraatit näiden elementtien lähteenä, yleisesti läsnä muissa väliaineissa.

Siksi kyseisen väliaineen inokuloidut bakteerit voivat lisääntyä vain, jos se pystyy ottamaan sitraatin hiilen. Testi oli positiivinen, jos keskellä oli sameus. Minulla oli kuitenkin haittaa siitä, että ei -spesifistä sameutta voi tapahtua.

Simmons ratkaisi tämän ongelman lisäämällä bromotimoliagar Koserin alkuperäiseen kaavaan. Vaikka periaate on sama, se tulkitaan eri tavalla.

Perusta

Joillakin bakteereilla on kyky selviytyä ilman maitohapon käymistä tai tuotantoa, ja sen on saavutettava energiaa muiden substraattien avulla. Tässä testissä ainoa tarjottu hiililähde on sitraatti.

Bakteerit, jotka kykenevät selviytymään näissä olosuhteissa, metaboloivat sitraattia nopeasti vaihtoehtoisella reitillä perinteiseen, trikarboksyylihapposyklin tai sitraatin käymisjakson avulla.

Bakteerien sitraatin katabolismi sisältää entsymaattisen mekanismin ilman koentsyymin puuttumista. Tämä entsyymi tunnetaan nimellä Citrica (sitraatti oksalasetaatti-liasa) tai demolasiitraatti. Reaktio vaatii kaksisuuntaisen kationin esiintymisen, jota tuolloin toimittaa magnesium.

Voi palvella sinua: hengitystyypit ja niiden ominaisuudet

Reaktio tuottaa oksaloasetaatin ja pyruvaattia, jotka sitten aiheuttavat orgaanisia happoja alkalisen pH: n keskellä, joka muodostuu typpilähteen käytöstä. Näitä orgaanisia happoja käytetään hiililähteenä, joka tuottaa karbonaatteja ja bikarbonaatteja, ja alkaloivat väliaineen edelleen.

Kylvötila

Simmons-sitraattiväliaine on liitettävä hiukan kalan hännällä suoraa tai neulaa käyttämällä ja inkuboitettava 24 tuntia-35-37 ° C. Huipentui tulosten havaitsemiseen.

Kylvö tehdään vain agarin pinnalla ilman puhkaisua.

Tulkinta

Jos väliaine on alkuperäinen väri (vihreä) ja näkyvää kasvua ei ole, testi on negatiivinen, mutta jos väliaine muuttuu siniseksi, osoittaa alkalituotteiden läsnäolon, joka havaitaan pH -indikaattorilla. Tässä tapauksessa testi on positiivinen.

Näin tapahtuu, koska jos bakteerit käyttävät sitraatin hiiltä, ​​se pystyy myös ottamaan typen ammoniumfosfaatista, jonka kanssa se vapauttaa ammoniakkia, alkalisoimalla väliaine.

Toisaalta, jos bakteerien kasvua havaitaan keskellä, mutta värinmuutosta ei ole, testiä on myös pidettävä positiivisena, koska jos kasvua on, se tarkoittaa, että bakteerit pystyivät käyttämään sitraattia AS Hiililähde, vaikka pH: ta ei tapahdu tuolloin (joskus se voi viedä).

Jos lopullisen värin tulkinnassa on epäilyksiä, sitä voidaan verrata vapautumattomaan sitraattiputkeen.

Valmistautuminen

Punnitse 24,2 g dehydratoitua väliainetta litran vettä varten. Sekoita ja jätä noin 5 minuutin kohdalla. Viimeistele keskilämmitys 1 tai kaksi minuuttia, heiluttaen usein.

Voi palvella sinua: mikä on makromolekyylitaso?

Tarjoile 4 ml testi- ja autoklaariputkia 121 ° C: ssa 15 minuutin ajan. Kun poistuu autoklaavista, kallistus tuen avulla, niin että agar on jähmettynyt huilun huipun muodossa, jolla.

Keskipitkän sitraatin lopullinen pH on 6,9 (vihreä väri). Tämä väliaine on erittäin herkkä pH -muutokselle.

PH 6 tai alapuolella, väliaine muuttuu keltaiseksi. Tätä väriä ei havaita bakteerikokeissa.

Ja pH: ssa 7,6 tai enemmän, väliaine muuttuu intensiivisen preussin sinisellä.

Käyttää

Simmonsin sitraattiagaria käytetään tiettyjen mikro -organismien, erityisesti Enterobacteriaceae -perheeseen kuuluvien bakteerien ja muiden ei -fermentoimattomien glukoosin bacillien bakteerien tunnistamiseen.

Viimeiset näkökohdat

Simmons -sitraattiväliaine on erittäin herkkä testi, koska vääriä positiivisia voidaan saada, jos joitain virheitä tehdään.

Seuraavat hoito, joka on toteutettava:

Inokulo

Hyvin paksu tai ladattu bakteeri -siirroston ei tule tehdä, koska se voi aiheuttaa kuparisen keltaisen värin kehittymisen kylvyn paikkaan vaikuttamatta muuhun väliaineeseen, mutta voi uskoa, että kasvua on olemassa. Se ei tarkoita todistetta positiivisuutta. 

Samoin paksu siirto voi tuottaa väärän positiivisen, koska esimuodostetut orgaaniset yhdisteet soluseinämien sisällä voivat vapauttaa tarpeeksi hiiltä ja typpeä PH -indikaattorin kääntämiseksi.

Siksi ihanne on kylvää neulaa käyttämällä platinakahvan sijasta ylimääräisen materiaalin ottamisen välttämiseksi.

Voi palvella sinua: viidakon ruokaketju

Kylvää

Toisaalta, kun kyseisen mikro -organismin tunnistamisen biokemiallisten testien akku on kylvö, on tärkeää, että sitraattikoe on ensimmäinen, joka siirtyy, välttääkseen proteiinin tai hiilihydraattien vetämistä toisesta väliaineesta.

Tässä tilanteessa on mahdollista saada väärä positiivinen, koska kaikki näistä virheistä aiheutuvista aineista metaboloituu ja aiheuttaa pH: n muutoksen.

Toinen tapa välttää aineiden vetämistä on polttaa kahva ja ottaa uusi siirros testin välillä.

On myös huolehdittava, kun kosketat siirtomaa siirtämisen toteuttamiseksi, koska sitä tulisi välttää, jotta osa sato -agarista, josta bakteerit tulevat, edellä selitetyn vuoksi.

Tässä mielessä Matsen, Sherris ja Branson suosittelevat inokulumin laimentamista fysiologisessa liuoksessa ennen sitraattitestin inokulointia muiden hiililähteiden siirron välttämiseksi.

Värin voimakkuus

On otettava huomioon.

Lisäksi on mikro -organismeja, jotka ovat positiivisia 24 tunnissa, mutta on muitakin kantoja, jotka vaativat vähintään 48 tuntia pH -muutoksen tuottamiseksi.

Viitteet

1. BBL Simmons Citraatti Agar -viistot. BD toipunut.com.
2. Simmons sitraattiagar. Toipunut Britanialabista.com.