Agar Lia (Iron Lysina) Mikä on, perusta, valmistelu, käyttää

Hän Agar Lia (Iron Lysina) Se on biokemiallinen testi, jota käytetään Enterobacteriaceae -perheen bakteerien tunnistamiseen. Tämän väliaineen on luonut Edwards ja Fife, joka perustuu Falkow -kaavaan.

Alun perin tämä testi oli lieme, joka sisälsi peptonia, hiivauutetta, glukoosia, l-lisiiniä, bromocreshia ja tislattua vettä violetti. Edwards ja Fife lisätty agar-adagar, ammonium- ja natriumitiosulfaatin ferri citratus.

Lysiinin dekarboksylaation positiivinen ja negatiivinen testi. Lähde: MSC -kirjoittajan omistama valokuva ja järjestelmä. Marielsa gil

Testi koostuu pohjimmiltaan entsyymin rudboksylaasin läsnäolon osoittamisesta, joka kykenee reagoimaan L-Lisin-aminohapon karboksyyliryhmän kanssa. Aminohapon deaminaatio voi tapahtua myös entsyymin lysiinin sydämen särkymisen vuoksi.

Lisäksi väliaineen koostumus mahdollistaa joidenkin bakteerien sukupolven kyvyn tuottaa rikkivetyä. Lopuksi on myös mahdollista tarkkailla keskellä olevaa kaasua tai ei kaasua.

Perusta

Peptonas ja hiivauute

Kuten useimmat satoväliaineet, lisien rauta -agar sisältää komponentteja, jotka tarjoavat tarvittavan ravintoaineen lähteen bakteerien kasvulle. Näitä komponentteja edustavat peptonit ja hiivauute.

Glukoosi

Samoin tämä agar sisältää käymiskelpoisena hiilihydraattien glukoosina. On tiedossa, että kaikki Enterobacteriaceae -perheen bakteerit käyvät glukoosissa.

Tämä vaihe on ratkaisevan tärkeä, koska se vastaa ympäristön happamista, välttämätöntä ehtoa lysiinin dekarboksylaasille - jos sitä on olemassa - toimii sen substraattiin.

Joissakin bakteerilajeissa kaasun tuotantoa voidaan havaita glukoosin käymisen vuoksi.

Kaasu näkyy, kun agar -occin siirtymä.

Voi palvella sinua: biomateriaalit

L-Lisina

Kun lysiini on dekarboksyloitu, muodostetaan diamiini (cadaverine) ja hiilihydridi.

Katkaisu tapahtuu pyridoksaalisen fosfaatti -koentsyymin läsnä ollessa. Tämä reaktio on peruuttamaton.

PH -indikaattori (bromokresoli violetti)

Kaikki pH -muutokset tapahtuvat keskellä erilaisia ​​reaktioita, havaitaan bromokresolin pH -indikaattorilla.

Tässä mielessä, kun happama on, väliaine muuttuu keltaiseksi, ja kun alkalisointia on, väliaine palaa alkuperäiseen violetiksi tai violetiksi väriin.

Kun lysiinin sydänsärky tapahtuu entsyymi -lysiinin esiintymisen vuoksi, pinnalle muodostuu punertavan väri, joka on tyypillinen proteuksessa, Providencessa ja joissain Morganella -lajeissa.

Tämä johtuu tosiasiasta, että muodostuu disamointioprosessin aikana alfa-zo-karbonihappoa, joka reagoi ammoniumitraatin kanssa hapen läsnä ollessa, mikä aiheuttaa edellä mainitun värin.

Ammonium- ja natriumitiosulfaatin rautasitraatti

Toisaalta bakteerit, jotka tuottavat rikkiä₂S.

Bakteereilla, joilla on vähentynyt tiosulfaattientsyymi₂S).

Jälkimmäinen on väritön kaasu, mutta reagoidessaan rautasuolan kanssa muodostaa metallisen sulfidin, joka on liukenematon yhdiste (näkyvä musta sakka).

H: n koulutuskyky kuitenkin₂S tällä väliaineella ei ole kovin luotettavaa, koska jotkut negatiiviset dekarboksylaasibakteerit, jotka kykenevät tuottamaan H₂S ei muodosta mustaa sakkaa, koska väliaineen happamuus häiritsee. Siksi on suositeltavaa vahvistaa muita rautaa sisältäviä keinoja.

Voi palvella sinua: Neuronit

Testin tulkinta

Lysiinin pk -boksylointi

Putket tulisi lukea 24 tunnin inkubaation jälkeen, muuten on olemassa riski väärinkäsitys reaktiosta, ilmoittamalla vääristä negatiivisista ilmoituksista.

Muista, että ensimmäinen tapahtuva reaktio on glukoosin käyminen, joten kaikki 10–12 tunnin putket muuttuvat keltaisiksi.

Jos inkubaatioajan lopussa (24 tuntia) on keltainen tausta violetti tai violetti pinta, reaktio on negatiivinen. Pinnan violetti väri vastaa väliaineen alkalisaatiota peptonien avulla.

Positiivinen reaktio on, että missä putken pohja ja pinta ovat täysin violetteja, ts. Se palaa alkuperäiseen väriin.

Siksi, joka määrittelee testin positiivisuuden, on väliaineen pohja tai pohja. Jos epäilet värejä, sitä voidaan verrata ei -koostumattomaan Lia -putkeen.

Lysiini -deaminaatio

Putki, joka näyttää lysiinin sydäntä, on granaatin punertavan pinta ja keltainen tausta (happo) tai koko granaatin punertavan putki.

Tämä reaktio tulkitaan negatiiviseksi lysiinin dekarboksyloinnille, mutta positiivinen Lysina -deaminaatiolle.

Tämä reaktio on määritelty ja tulkittu viisteessä.

Rikkivetytuotanto (H₂S)

Positiivista reaktiota havaitaan mustan sakan esiintyminen koko keskellä tai osalla. Yleensä kehon limlin ja pohjan välillä.

Jos sakka tapahtuu koko putken ajan, ei näe muita keskellä tapahtuvia reaktioita.

Tulosten rekisteröinti

Testiä tulkittaessa tulokset tallennetaan seuraavasti:

Voi palvella sinua: Miller ja Urey -kokeilu

Ensin kehykset luetaan, sitten tausta tai taco, sitten H: n tuotanto₂S ja lopulta kaasun tuotanto.

Esimerkki: K/A + (-). Tämä tarkoittaa:

• K: Alkalinen kehys (violetti väri)
• V: Happo tausta (keltainen), ts. Negatiivinen dekarboksylaatioreaktio ja negatiivinen sydänsärky.
• +: Rikkivetytuotanto
• (-): ilman kaasua.

Valmistautuminen

Punnitse 35 g makaava keskimääräinen rauta kuivunut ja liukenee litraan tislattua vettä.

Kuuma, kunnes liuennut agarin kokonaan, kiehua minuutti heiluttaen usein. Jakele 4 ml väliainetta 13/100 testiputkissa puuvillakansilla.

Steriloi autoklaavissa 121 ° C: ssa 15 minuutin ajan. Poista autoklaavista ja anna olla kalteva niin, että on olemassa syvä pohja ja lyhyt viiste.

Säilytä 2-8 ° C-jääkaapissa. Anna malttin ennen kylvää bakteerikanta.

Dehydratoidun väliaineen väri on beige ja valmistettu punertavan violetti väliaine.

Valmistetun väliaineen lopullinen pH on 6,7 ± 0.2

Väliaine muuttuu keltaiseksi pH: n kanssa, joka on yhtä suuri kuin 5,2, ja se on violetti pH: ssa 6,5 ​​ylöspäin.

Sovellukset

Tätä testiä yhdessä muiden biokemiallisten testien kanssa käytetään Enterobacteriaceae -perheen bakteerien tunnistamiseen.

Elatusaine kylvetään suoralla tai neulalla, yksi tai kaksi puhkaisua tehdään putken pohjalle, ja sitten siksak -väliaineen pinta seisoi.

Se on inkuba 24 tuntia lämpötilassa 35-37 ° C aerobioosissa. Tarvittaessa se jätetään inkuboimaan 24 tuntia enemmän.

Se on pääosin hyödyllinen negatiivisten Citrobacter -lajien erottamisessa Salmonellas Sp.

Viitteet

1. Mac Faddin J. (2003). Biokemialliset testit kliinisen merkityksen bakteerien tunnistamiseksi. 3. ed. Pan -american toimitus. Buenos Aires. Argentiina.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott -mikrobiologinen diagnoosi. 12 Ed. Pan -American toimitus.-Lla. Argentiina.