Müeller Hinton Agar Mikä on, perusta, valmistelu, käyttää

Hän Müeller Hinton Agar Se on kiinteä, ei -selektiivinen ravitsemusväliaine, joka koostuu liha -infuusiosta, kaseiinin peptonihapoista, tärkkelystä, kahvasta ja tislatusta vedestä. Tämä väliaine mahdollistaa erinomaisen mikrobikehityksen nopeimpien kasvubakteerien kanssa.

Sen ovat alun perin luoneet John Howard Müeller ja Jane Hinton eristämään vaativat bakteerit ravitsemuksellisesta näkökulmasta, kuten esimerkiksi Neisseria gonorrhoeae ja Neisseria meningitidis. Ominaisuuksiensa vuoksi se osoittautui kuitenkin ihanteelliseksi antibioottien alttiuden tutkimiseksi tarjoamalla luotettavia ja toistettavia tuloksia.

Siksi Müeller Hinton -agar on kulttuuriaine, jonka hyväksytään kliinisen ja laboratorion standardien instituutti (CLSI) ja antimikrobisen herkkyystestauksen komitea antimikrobisen herkkyystestin suorittamiseksi Kirby -levitysmenetelmällä ja Bauerilla.

Perusta

Koska se on ei -selektiivinen ravitsemusväliaine, se on erinomainen useimpien patogeenisten bakteerien kasvulle.

Toisaalta sen yksinkertainen koostumus aiheuttaa aineiden leviämisen helposti, ja se on olennainen ominaisuus herkkyystestissä levyn levitysmenetelmällä.

Toinen sen ominaisuuksista on, että se sisältää pienen määrän estäjiä, mikä mahdollistaa sulfonamidin, triMeTOprimin ja tetrasykliinien arviointia tehokkaasti.

On kuitenkin pidettävä mielessä, että median on täytettävä tietyt olosuhteet sen asianmukaisen toiminnan takaamiseksi, mukaan lukien:

PH: n istuvuus, agarin syvyys ja Timinan, TiMidina, CA: n oikea pitoisuus⁺⁺, Mg⁺⁺ ja Zn⁺⁺.

Sinun on myös tiedettävä, että metodologia on standardisoitu, ja siksi kaikki parametrit, kuten:

Inokulumin pitoisuus, antibioottilevyjen pitoisuus ja säilyttäminen, levyjen oikean määrän sijoittaminen agariin, yhden levyn ja toisen välinen etäisyys, tiettyjen antibioottien strateginen sijoittaminen, ilmakehän, lämpötila ja aika inkubaatio.

Valmistautuminen

Punnitse 37 g keskipitkän Müeller Hintonin kuivuneet ja liukenevat 1 litraan tislattua vettä. Kuumenna ympäristö sekoittaen liukenemisen auttamiseksi. Kiehua 1 minuutti.

Tuo autoklaveen steriloimaan 121 ° C: ssa 15 minuutin ajan. Kun poistetaan autoklaavesta, Fixola on asetettava kylpyhuoneeseen Maríasta 50 ° C: seen jäähdytykseen. Kaada 25 - 30 ml sterri -steriiliin 10 cm: n halkaisijaltaan levyihin.

Levyille tulisi jättää keskimääräinen paksuus 4 mm (ihanteellinen), 3-5 mm: n alue on sallittu.

Jos haluat valmistaa verta Müeller Hintonilla, 5% steriili lampaanverta kaadetaan pohjana.

Voi palvella sinua: Glyseraldehydi 3-fosfaatti (G3P): rakenne, toiminnot

Väliaineen lopullisen pH: n on oltava välillä 7,2 - 7,4.

Sijoita ja säästä jääkaapissa, kunnes käyttö. Anna levyn ottaa ympäristön lämpötilan ennen käyttöä.

Valmistetun väliaineen väri on kevyt beige.

Sovellukset

Sitä käytetään antibiogrammin tai herkkyystestin suorittamiseen antibiooteille nopeimpiin kasvupatogeeneihin.

Jos agaria täydennetään verellä, palvelee vaativien mikro -organismien antibiogrammin, kuten: Streptococcus pneumoniae, Haemophilus SP, Neisseria meningitidis, muiden joukossa. Sitä on käytetty myös eristämään Legionel pneumophila.

Antibiogrammitekniikka

Ennen antibiogrammin suorittamista on valmistettava 1,5 x 10: tä vastaava bakteeriliuos⁸ Solut.

Tätä varten otetaan 3–4 puhdasta sadon pesäkestävyyttä ja suspendoitua triptyykin soijaliemeeseen tai Müeller Hinton -liemessä, inkuboi 2–6 tuntia ja pitoisuus steriiliin suolaliuokseen on säädetty, vertaamalla sitä Mac Farland -kuvioon 0,5%.

Jos ne vaativat mikro -organismeja, pesäkkeet voidaan keskeyttää suoraan 0,5% Mac Farland -konsentraatioon asti. Myöhemmin Müeller Hinton -levy kylvetään tampouksella, joka on kyllästetty bakteeriliuoksella.

Tätä varten tampo upotetaan liuokseen ja sitten ylimääräinen neste poistetaan paineella putken seiniä vasten. Välittömästi sen jälkeen, kun tamponi kulkee koko pinnan läpi, poistumatta koskettamatta, levy käännetään hieman ja kylvää uudelleen. Operaatio toistetaan 2 kertaa enemmän.

Anna seistä 10 minuuttia ja aseta sitten antibioottilevyt steriilillä puristimella, jättäen 24 mm: n tilan yhden ja toisen väliin. Kun olet asettanut jokaisen albumin agariin, paina jokaista puristimen kanssa varmistaaksesi, että ne ovat hyvin kiinnitettyjä.

Prosessin jälkeen levy on sijoitettu ja 35-37 ° C: ta inkubidaan aerobioosissa 16-18 tunnin ajan. Jos se on vaativa mikro -organisme, se voi ansaita mikroaerofilian ja jos antibiogrammi sisältää oksasilliinilevyjä, se tulisi lukea 24 tunnin kohdalla.

Kunkin halo -säännön halkaisijan mittaamiseksi käytetään. Tulokset on tallennettava MM: ssä. Myöhemmin nykyisen CLSI -käsikirjan julkaisemien leikkauspisteiden taulukoiden kanssa saadut arvot korreloivat.

Raportoi arkaluontoisia (s), välituotteita (i) tai resistenttejä (R) tapauksen mukaan.

Antibiootit valitaan eristetyn mikro -organismin ja tuottavan infektion tyypin mukaan.

Voi palvella sinua: elävien olentojen organisaation tasot

Joskus antibioottien strateginen sijoittaminen on pidettävä mielessä fenotyyppisten resistenssikuvioiden osoittamiseksi.

Levyjen strateginen sijoittaminen Müeller Hinton Agariin

Enterobakteereja varten klavulanihappolevy on asetettava kolmannen ja 4. sukupolven kefalosporiinien eteen. Munan muotoinen leveys osoittaa, että kanta on laajennetun spektrin beeta -lactamaasien (BLE) tuottaja. Tämä tarkoittaa, että potilasta ei pidä hoitaa millään kefalosporiinilla.

Staphylococcus on tärkeää.

Erytromysiinissä oleva halogeeniresistentti ja klindamysiinin halo -arvon tasaisuus osoittaa, että kantaalla on indusoitava vastus klindamysiinille, venymälle (RIC). Tämä tarkoittaa, että klindamysiinihoito ei ole tehokas.

Enterobakteerien indusoitavien vahvistimen C -kantojen etsimiseksi ja joihinkin ei -fermentoimattomiin gram -negatiivisiin baciliin, keftatsidimiin, kefoksiiniin tai piperaciliinilevyihin.

Halo, joka on ruskistunut yhdelle imipeneemille kohdistuvista levyistä, osoittaa indusoitavan vahvistimen läsnäolon.

Konstitutiivisen AMP C: n etsimiseksi 500 ug viemäri kloksasilliinilevyllä. Parannusleveys yhdessä kefalosporiinista osoittaa positiivisuutta.

Voit myös korvata kloksakiinilevyn 9 mm: llä Whatman -suodatinpaperia nro 6, joka on kyllästetty boorihapolla (400 ug) 18 mm: n etäisyydellä. Se tulkitaan yhtä suureksi kuin edellinen.

Lopuksi tutkimaan metallibetahalaktamaasien tuotantoa etenkin Pseudomonas aeruginosa, A disk impregnated with 10 µl of ethylendiaminteraacetic acid (EDTA 750 µg) and thioglycolic acid (SMA 300 µg) is used, which faces the imipenem and meropenem discs, at a distance of 15 mm.

Testi on positiivinen, jos imipeneM- tai meropeneem -haloja laajenee kohti EDTA/SMA -albumia. Tämä tulos on vahvistettava modifioidulla Hodge -testillä.

Tämä menetelmä koostuu kannan inokulointi Escherichia coli ATCC 25922 Müeller Hinton -levyllä. Levyn keskellä oleva imipeneM -levy sijoitetaan ja sitten levyn Stro tehdään reuna -alueelle P. aeruginosa epäilyttävä. Voit kokeilla jopa 4 kantaa levyä kohti.

Testi on positiivinen, jos Stroksen ympärillä on imipeneM -halo.

Se voi palvella sinua: Neolamarckismo: tausta ja ominaisuudet

Virheellisten tulosten syyt

-Huonosti säilyneillä antibioottikieleillä voi tuottaa vääriä resistenssejä. Esimerkiksi oksasilliinilevy on erittäin alttiita lämpötilan muutoksille.

-Ehdotetun (happo) alapuolella olevan väliaineen pH tuottaa pienempiä haloja aminoglykosideissa ja makrolideissa (väärän resistenssin riski) ja suurempien penisilliinin, tetrasykliinin ja novobiosiinin halot (väärän herkkyyden riski).

-Jos pH on ilmoitetun (alkali) yläpuolella, yllä kuvattu vaikutukset on sijoitettu.

-Väliaineet, joilla on korkea tymiini- ja tymidiinipitoisuudet, vaikuttavat merkittävästi sulfonamidi- ja trimetoprim -estämiseen HALS.

-Korkeat kalsium- ja magnesiumpitoisuudet tuottavat aminoglykosidien, polymixin B: n ja tetrasykliinien väärän resistenssin kantojen edessä Pseudomonas aeruginosa.

-Alhaiset kalsium- ja magnesiumpitoisuudet tuottavat aminoglykosidien, polyxin B: n ja tetrasykliinien vääriä tunteita kantojen edessä Pseudomonas aeruginosa.

-Sinkin läsnäolo vaikuttaa karbapenenemien levyjen (imipeneM, meropeneem ja ertapeneM) tuloksiin.

-Alle 3 mm: n väliaineen paksuus tuottaa väärän herkkyyden tuloksia, kun taas yli 5 paksuus tuottaa väärän resistenssin.

-Levyjen mobilisointi antibiogrammissa antaa epämuodostuneita haloja, koska antibioottien purkautuminen on välitöntä.

- Erittäin heikot siirrot vaikuttavat tuloksiin, koska agarissa ei ole yhtenäistä tai lähentyä, tarvittava olosuhde inhibitiohaloiden mittaamiseksi, halojen lisäksi voi antaa normaalia suuremman.

-Liian ladattu inokulos voi antaa pienemmän kuin normaali Hals.

-Älä kunnioita levyjen välistä etäisyyttä saa yhden halo -päällekkäisyyden toisen kanssa, eikä sitä voida lukea oikein.

-Inkuboi CO: n kanssa₂ Lisää tetrasykliini- ja metrilliinilevyjen haloja.

-Inkubaatti alle 35 ° C: n lämpötiloissa tuottaa suurempia haloja.

-Veren aggregaatti pienentää sulfamidihalon kokoa.

Rajoitus

Antibiootin herkkyys osoitti antibiogrammissa mikro -organismia vastaan ​​(In vitro) Se ei ole tae, että se toimii In vivo.

QA

Tietää, sisältääkö väliaine oikean määrän Timinaa, rasitus on kylvää Enterococcus faecalis ATCC 29212 ja todistaa herkkyyden tripaprim -sulfametoksatsolille (SXT), sen on annettava yhtä suuri halo tai> 20 mm tyydyttäväksi.

Viitteet

1. Conaa e. Hyvän herkkyystutkimuksen olosuhteet levitystestillä agarissa. Rev -chil tartuttamaan, 2002; 19 (2): 77-81
2. Britannia Laboratories. Müeller Hinton Agar. Saatavana osoitteessa: Britanialab.com