Sabouraud Agar Mikä on, perusta, valmistelu, käyttää

Hän Sabouraud Agar, Se tunnetaan myös nimellä Sabouraud Dekstroos -agar, se on vankka viljelyväliaine, joka on erityisesti rikastettu sienten, kuten hiivojen, muotien ja dermatofyyttien, eristämiseen ja kehittämiseen.

Siksi tätä väliainetta ei voida puuttua mikrobiologian laboratoriosta tutkimaan patogeenisten tai opportunististen sienten läsnäoloa, joko kliinisiä tai ei -kliinisiä näytteitä. Se on myös ihanteellinen rihmamahdokkaiden bakteerien, kuten streptomien ja nocardian, kasvulle. Sen käyttö on erittäin laajaa, koska sitä voidaan käyttää ihmisen, eläinten, vihannesten ja teollisuuden mykologiassa.

-Lla. Sabouraud Agar ilman kylvää. B -. Sabouraud -agar, joka on istutettu hiivalla. Lähde: Kirjailijan MSC: n ottamat valokuvat. Marielsa gil

Tämän väliaineen perusti vuonna 1896 erinomainen dermatologi Raimond Sabouraud, josta tuli asiantuntija, joka tunnustettiin maailmanlaajuisesti päänahan häiriöissä, pääasiassa dermatofyytteistä aiheuttavat.

Sen luominen oli niin tärkeä, että sitä on sittemmin käytetty ja sitä ylläpidetään tänään, vaikkakin joillakin muutoksilla.

Vaikka se on erityistä sienille, tässä väliaikaisessa bakteerissa voi kasvaa, siksi näytteille, joilla on sekoitettu kasvisto, tarvitaan antibioottien sisällyttäminen sen valmistukseen ja estävät siten läsnä olevan bakteeriflooran kasvua, jota voi olla.

Antibiootin valinta on suoritettava huolellisesti ja ottaen huomioon talteen otetut sienten tyyppi, koska jotkut estetään tiettyjen aineiden läsnäollessa.

Perusta

Sabouraud Dextroose Agar on keino, että sen alkuperäisessä formulaatiossa on heikosti selektiivinen sen viiden happo pH: n vuoksi.6 ± 0.2, bakteereja voidaan kuitenkin kehittää, pääasiassa pitkittyneissä inkubaatioissa.

Elatusaine sisältää eläinkudoksen haiman kaseiinia ja digreatiakudoksen peptonia, jotka tarjoavat hiilen ja typen lähteen mikro -organismien kehittymiseen.

Se sisältää myös korkean glukoosipitoisuuden, joka toimii energian lähteenä, joka suosii sienten kasvua bakteerien yläpuolella. Kaikki tämä sekoitettuna agar -agariin, komponenttiin, joka antaa sinulle sopivan konsistenssin.

Toisaalta Sabouraud Dekstroos -agar voi olla selektiivinen, jos antibiootit lisätään.

Antibioottien kanssa se on erityisen hyödyllinen haavanäytteissä, avoimissa haavoissa tai kaikissa näytteissä, joissa epäillään suurta bakteerikontaminaatiota.

Useimmat käytetyt Sabouraud -dekstroosin yhdistelmät antibiooteihin

-Sabouraud -agar kloramfenikolin kanssa: Ihanteellinen hiivojen ja rihansisienten palauttamiseen.

-Sabouraud -agar gentamysiinin ja kloramfenikolin kanssa: Lähes kaikki rihmamaiset sienet ja hiivat kasvavat tässä väliaineessa ja estävät suurta määrää bakteereja, mukaan lukien enterobakteerit, pseudomonas ja staphylococcus.

-Sabouraud -agar sykloheksimidillä: se on erityisen hyödyllinen ihon tai hengitysteiden näytteille, kunhan epäily on dimorfisia sieniä.

Sykloheksimidiä tulisi käyttää varoen; Vaikka sitä käytetään estämään ei -patogeenisten tai ympäristö sienten ja hiivojen kasvu Cryptococcus neoformans,  Aspergillus fumigatus, Boydii Allescheria, Penicillium SP ja Muut opportunistiset sienet.

-Sabouraud -agar kloramfenikolilla plus sykloheksimidi: sitä käytetään pääasiassa dermatofyyttien ja dimorfisten sienten eristämiseen. On haittaa, joka estää joitain opportunististen sienten lajeja, kuten Candida no albicans, Aspergillus, zigomcetos tai c. Neformans.

-Sabouraud -agar kloramfenikolilla, streptomysiinillä, penisilliini G: llä ja sykloheksimidillä: Se on ihanteellinen erittäin saastuneille näytteille, joissa on bakteereja ja saprofyytejä, mutta sillä on haittaa estää kasvun kasvu Actinomyces ja Nocardias, Edellä mainittujen opportunististen sienten lisäksi.

Voi palvella sinua: hominisointiprosessi: Ominaisuudet ja vaiheet

Valmistautuminen

Jos heillä on erilliset aineosat, se voidaan valmistaa seuraavasti:

Sabouraud dekstroosi 

Punnita:

- 40 grotroseista

- 10 g grpetonia

- 15 g graagaria

- Mittaa 1000 ml tislattua vettä

Kaikki ainesosat sekoitetaan, pH säädetään 5,6: een. Soluttimet liuotetaan kiehumalla, 20 ml väliainetta jakautuvat 25 x 150 mm putkiin, pitämättä ja puuvillassa.

Putket, joissa on puuvillakansi. Lähde: Kuva, jonka on ottanut MSC -kirjoittaja. Marielsa gil

Saavutuksen mukaan voidaan käyttää myös muita putkimittauksia.

He vievät autoklaavin 10 minuutin ajan paineen ilmakehään (121 ° C). Sitä ei pidä ylittää autoklavoidussa ajassa. Autoklaavasta poistuttaessa putket ovat kaltevia tuen avulla, kunnes ne jähmettyy huilun huipulla.

Toinen tapa on liuottaa ainesosat kuumentamalla, kunnes se kiehuu. Samassa autoklavisessa felolassa 10 minuutin ajan ja jaa sitten 20 ml Petri -levyissä.

Jos on saatavana Sabouraud -dekstroosin väliainetta, joka sisältää jo kaikki ainesosat, määritetään kaupallisen talon määrittämä määrä. Loput vaiheet ovat yhtä suuret kuin edellä kuvattu.

Sabouraud Dextrose Agar (Emmons Modification)

Punnita:

-  20 g grostroosia

- 10 g grpetonia

-  17 gr agar -agaria

-  Mittaa 1000 ml tislattua vettä

Kaikki ainesosat ovat sekoitettuja, pH säädetään arvoon 6,9. Edetä samalla tavalla edellisen tapauksen.

On kaupallisia taloja, jotka tarjoavat median kaikilla ainesosilla. Punnitse ja valmistele tässä tapauksessa tapa, jolla insertti kuvaa sitä.

Sabouraud dekstroosiagar (Emmons -modifikaatio) kloramfenikolilla

Klooranfenicol -äiti -liuos

- Punnitse 500 mg kloramfenikolipohjaa

- Mittaa 100 ml 95% etanolia

- Sekoittaa

Sabouraud -dekstroosin väliaine (Emmons) valmistetaan jo kuvattuina ja lisäksi jokaiselle litralle 10 ml: n lisääminen kloorakloranfenikoli -äiti -liuosta ennen autoklaavia.

Sabouraud Emmons sykloheksimidi -dekstroosilla

Sykloheksimidi äidiliuos

- Punnitse 5 g sykloheksimidiä

- Mittaa 100 ml asetonia

- Sekoittaa

Sabouraud dekstrose apoure.

Sabouraud dekstroosiagar (Emmons) kloramfenikolilla ja sykloheksimidillä

Sabouraud -dekstroosiväliaine (Emmons) on valmistettu jo kuvattuina ja lisäksi jokaiselle litralle 10 ml: n lisääminen kloorakalfeenikolin äiti -liuosta ja 10 ml sykloheksimidi -äiti -liuosta ennen autoklavoista.

Voi palvella sinua: biologiaan liittyvät tieteet

Muut antibiootit, joita voidaan lisätä

kaksikymmentä.000 - 60.000 penisilliiniyksikköä litraa kohti.

30 mg streptomysiiniä litraa kohti.

Molemmat on sisällytettävä väliaineen jälkeen, hieman jäähdytetty (50-55 ° C).

0,04 g neomysiiniä litraa kohti.

0 -.04 g gentamysiiniä litraa keskipitkiä.

Erityiset näkökohdat

Turvallisuus on edullista, että kylvä sabouraud dekstroosi agar kiilakuvien putkissa (kalteva huilun piikkiin) eikä petrilalevyillä, itiöiden dispersion ja hengittämisen välttämiseksi.

On tärkeää, että sabouraud -ikäiset putket peitetään puuvillalla eikä lankakansilla, koska on osoitettu, että puolitaerobiset olosuhteet estävät sparoorin muodostumista joissain kannoissa, esimerkiksi esimerkiksi Coccidioides immitis. Lisäksi suurin osa sienistä on Aerobes.

Ketjukannen käytön tapauksessa ei tiukasti suljettu.

QA

Valmistetulle väliaineelle tulisi tehdä laadunvalvonta niiden asianmukaisen toiminnan tarkistamiseksi. Tätä varten tietyt kantot kylvetään.

Sabouraud Dextrose Candida albicans, jonka on oltava erinomainen kasvu. Toinen levy on ympätty kanoilla Escherichia colista, on estettävä kokonaan.

Myös plakkia ilman inokulointia, on myös inkuboitu, jossa mikään mikro -organismien ei pitäisi kasvaa.

Sabouraud -dekstroosiagarille kloramfenikolilla ja sykloheksimidillä  Trichophyton Mentagrophyyt, täytyy kehittyä hyvin. Toinen levy on ympätä kantaan Aspergillus flavus, jossa kasvua on oltava vähäistä kasvua. Lisäksi inkuboidaan ulottumatonta plakkia sen steriiliyden osoittamiseksi.

Sabouraud -dekstroosille sykloheksimidillä, kannalla Candida albicans, Trichophyton rubrum  jompikumpi Canis Microsporum, jonka on osoitettava hyvää kasvua.

Samoin kanta Aspergillus flavus, Osoittaa niukkaa kasvua tai ei -kasvun. Lopuksi inkuboi levyä inokuloimalla steriiliyden hallintaa.

Sovellukset

Ensisijainen viljely

Klassinen Sabouraud -dekstroosi -agar sisältää 4 grroosia ja on erinomainen ensisijaisena eristyksen keinona, koska se osoittaa kunkin sienen ominaisen morfologian.

Se on erinomainen myös pigmenttien tuotannon osoittamiseen. Se ei kuitenkaan ole sopivin keino tarkkailla itiöitä.

Ei myöskään suositella viljelyä Blastomyces dermatititidis, jota estävät nykyisen glukoosin korkea pitoisuus.

Toisaalta tietyt näkökohdat on pidettävä mielessä.

Jotkut sienet kehittyvät paremmin huoneenlämpötilassa, kuten muotit, toiset kehittyvät onnistuneesti 37 ° C: ssa, kuten jotkut hiivat, ja toiset voivat kehittyä molemmissa lämpötiloissa (dimorfiset sienet).

Siksi se on joskus välttämätöntä.

Esimerkiksi, Sporothrix schenckii Se kylvetään kahdelle levylle; Yksi on inkuba huoneenlämpötilassa muottivaiheen saamiseksi ja toista inkuboitaan 37 ° C: ssa uppaduriformisvaiheessa, mutta jälkimmäisessä on tarpeen lisätä 5% veri ympäristöön ympäristöön.

Se voi palvella sinua: oksidaasiglukoosi: Ominaisuudet, rakenne, toiminnot

Muissa tapauksissa, kuten Mythom -näytteissä, kylvetään kaksi Sabouraud -agarlevyä, joista toinen on kloramfenikoli ja toinen sykloheksimidillä. Ensimmäinen mahdollistaa myyttisen alkuperän mytooman (Eumiceetooma) ja bakteerien alkuperän, kuten aktinomoometoomien, toisen syy -aineiden syy -aineiden kasvun.

Itiö

Emmonsin muuttama Sabouraud -dekstroosiagar sisältää 2 grothin dekstroosia eikä palvele vain eristystä, vaan myös sienten itiöitä ja säilyttämistä varten.

Tässä väliaineessa, jos pystyt palauttamaan kantoja Blastomyces dermatititidis.

Suojelu

Sienikasvien säilyttämiseksi niitä voidaan varastoida jääkaapissa (2-8 ° C). Suojeluaika voi vaihdella 2–8 viikkoa. Tämän ajan jälkeen heidän on oltava subjektiivisia toistamaan prosessi.

Jotkut sienet pysyvät paremmin huoneenlämpötilassa, kuten Epidermophyton Foccosum, Trichophyton Schoenleinnii, T. Violaceum ja Microsporum audounii.

Kannan ylläpitoa voidaan pidentää pleomorfismin välttämiseksi, jos agarin dekstroosi poistetaan kokonaan ja jos agarin määrä ympäristöön vähenee kuivuuden välttämiseksi.

Mikrokulttuurit

Joidenkin rihansuiden tunnistamiseksi on välttämätöntä suorittaa mikrokulttuurit käyttämällä Sabouraud -agaria tai muita erityisiä keinoja seurata seksuaalisia ja aseksuaalisia lisääntymisrakenteita.

Ihmisen mykologiassa

Sitä käytetään pääasiassa sienitautien diagnoosiin, etenkin ihoon ja sen liitteisiin vaikuttaviin (hiukset ja kynsit).

Näytteet voivat olla eritteet, eritteet, iho, karvat, kynnet, ysköt, LC tai virtsa. Yleisesti eristetyt taudinaiheuttajat ovat dermatofyyttejä, sieniä, jotka aiheuttavat ihonalaista ja systeemistä mykoosia.

Eläinmykologia

Sieni -infektiot vaikuttavat eläimiin usein, joten Sabouraud -agar on yhtä hyödyllinen eläinten mykologiassa kuin ihmisessä.

Esimerkiksi dermatofyytit voivat vaikuttaa eläimiin. Näin on Canis var Disortum Microsporum, Se tarttuu usein koiriin, kissoihin, hevosiin, sikoihin ja apinoihin. Lisäksi, Microsporum Gypseum tartuttaa koiria, kissoja ja nautakarjaa.

Lintuihin, kuten kanoihin, kukoisiin ja kanoihin Microsporum gallinae.

Muut sienet, kuten Zymonema farciminosum, Ne aiheuttavat myös eläimiä, pääasiassa hevosilla, muulilla ja aasoilla, tuottaen tärkeän tulehduksen imusolmukkeissa.

Sporothrix schenkii ja histoplasma capsulatum Ne vaikuttavat kotieläimiin.

Ympäristömykologia

Monet patogeeniset tai opportunistiset sienet voivat keskittyä tiettyyn aikaan tietyssä ympäristössä, etenkin klinikoiden ja sairaaloiden leikkaussalissa ja tehohoitoyksiköissä (ICU). Siksi on tarpeen hallita samaa.

Muita haavoittuvia tiloja ovat vanhat kirjastot ja rakennukset, joihin ympäristö sienten keskittyminen voi vaikuttaa.

Ympäristötutkimuksissa käytetään Sabouraud Dextrose -agaria sienten eristämistä varten.

Teollisuus mykologia

Sabouraud Dextrose -agaria ei voida puuttua saastuttavien sienten tutkimuksesta kosmetiikan, ruoan, juomien, nahka-, tekstiilien tuotannossa, muun muassa.

Kasvi mykologia

Kasvit kärsivät myös sienitauteista, jotka vaikuttavat kasvin eri osiin, jotka voivat jopa lopettaa sadon, aiheuttaen suuria menetyksiä maataloudessa.

Viitteet

1. Valtek -laboratorio. (2009). Sabouraud dekstroosiagar Cycloheximidan kanssa. Saatavana osoitteessa: Andinamedica.com.
2. Navarro tai. (2013). Eläinlääketieteellinen mykologia. Kansallinen maatalousyliopisto. Nicaragua.