Vismuttisulfiittivirasto, valmistelu ja käyttö

Hän vismuttisulfite -agar Se on vankka, selektiivinen ja differentiaalinen viljelyväline, joka on erityisesti muotoiltu eristämään Salmonella Enterica Subgrupo Enterica Typhi SereTypo, Muun muassa Salmonella. Ympäristö tunnetaan nimellä BSA, joka on yhtä mieltä Englannin vismuttisulfiittiagarista.

Alkuperäisen vismutti -sulfite -agar -kaavan loivat vuonna 1927 Wilson ja Blair (glukoosi -vismuth -sulfite rautaväliaine); Tämä sisälsi natriumsulfiittia, glukoosia, vismuttiliuosta, ammoniumsitraattia, rautasulfaattia ja agar-iskua.

48 -Salmonella SP: n inkubaation kasvu vismuttisulfite -agarissa. Lähde: Pixnio.com kirjoittaja: dr. W -. R -. Erving, USCDCP

Nykyään on modifikaatio alkuperäisestä väliaineesta, joka koostuu lihauudusta, lihan ja kaseiinin peptoneista, vismutti-sulfite-indikaattorista, glukoosista, disodiumfosfaatista, rautasulfaatista, kirkkaanvihreästä ja agar-agarista.

Salmonellalajien eristämiselle on monia keinoja, mutta Typhi -serotyypin talteenottamiseksi vismuttisulfiittiagarilla on huomattava etu niihin nähden, koska enemmistössä tämän mikro -organismin erittäin matala tai nolla toipuminen on saatu erittäin alhainen tai nolla.

Enteropatogeenisen eristämiseen on kuitenkin tarpeen käyttää useampaa kuin yhtä väliainetta, koska vismuttisulfiittiagar on vähemmän tehokas muille Salmonella -lajeille ja Shigella -sukulle, jotka ovat estetty tai kehittyvät erittäin huonosti tässä agarissa.

On huomattava, että kaikista Salmonella -lajeista Typhi -serotyyppi on yksi ihmisen tärkeimmistä enteropatogeeneistä, tämä on ainoa säiliö. Tämä serovarioisuus tuottaa lavantauti, gastroenteritis, bakteremia ja septikemia.

Tästä syystä on merkitystä sisällyttää tämä agar.

[TOC]

Perusta

Useimpien viljelyväliaineiden muodossa vismuttisulfite -agar sisältää ravitsemuksellisia aineita bakteerien kehityksen edistämiseksi, kuten peptonit ja lihauutetta. Samoin glukoosi toimii energian ja hiilen lähteenä.

Voi palvella sinua: biogeneettiset elementit

Nyt kaikki bakteerit eivät kasva tässä väliaineessa, koska vismuttisulfite -agar on selektiivinen väliaine. Tämä sisältää yhdisteitä, jotka estävät Gram -positiivisten mikro -organismien ja tiettyjen gram -negatiivisten bakteerien kasvua. Nämä yhdisteet ovat: vismuttisulfiitin indikaattori ja kirkkaanvihreä.

Toisaalta dinatriumfosfaatti ylläpitää osmolaarisuutta ja väliaineen pH: ta.

Lisäksi vismuttisulfite -agar on differentiaaliväliaine rautasulfaatin läsnäolon ansiosta, joka osoittaa H: n muodostumisen₂S.  H₂Bakteerien muodostamat s reagoi rautasulfaatin kanssa ja muodostaa selvästi näkyvän liukenemattoman sakan.

Lopuksi Agar -Agar tarjoaa vankan konsistenssin ympäristölle.

Valmistautuminen

Punnitse 52,3 g dehydratoitua väliainetta ja liukene litran veteen. Lämmitä seosta keittämään 1 minuutin ajan toistuvasti sekoittaen, kunnes sen kokonaisliukeneminen. Älä ylikuumene liikaa. Tätä väliainetta ei ole steriloitu autoklaavessa, koska äärimmäinen lämpö vahingoittaa viljelyalusta.

Anna jäähtyä 45 ° C: ssa ja ravista ennen tarjoilua Petri -steriileillä levyillä. On suositeltavaa tehdä levyjä, joilla on hyvä paksu. Tätä varten 25 ml on kaadettava jokaiselle levylle. Antaa jähmettyä. Kuten keino, jota ei steriloitu, on normaalia, että sen välittömän käyttöä ehdotetaan.

D'Austin vuonna 1977 tekemä tutkimus osoitti kuitenkin, että parempaa palautumista Salmonella typhimurium ja Salmonella Enteritidis Kismuttisulfiittiaineina ikääntyessä serovarioiden suorituskykyä ei vaikuta Typhi ja Parathyphi b.

D'Aus suosittelee levyjen käyttöä jäähdytyksen päivälle 4, vaikka se varoittaa, että väliaineen ikääntyessä selektiivisyys vähenee, kehittää helpommin kantoja Proteus vulgaris.

Siksi erittäin saastuneille näytteille, kuten ulosteelle, on parempi käyttää vastavalmistettua väliainetta. Muuten käytetään sen valmistelun 4. päivään. Muut kirjoittajat suosittelevat levyjen käyttöä.

Voi palvella sinua: Urasiili: rakenne, toiminnot, ominaisuudet, synteesi

Jäähdytettyjen levyjen tulisi olla malttinsa ennen käyttöä. Keskipitkän pH: n on oltava 7,5 ± 0,2. Maksamattoman väliaineen väri on beige ja valmistettu on opalescente vihertävä harmaa.

Sovellukset

Näytteiden joukossa, jotka voidaan kylvää tässä väliaineessa.

Isolaattien parantamiseksi on suositeltavaa suorittaa edeltävää rikastumista koskevaa käsittelyä laktoosiliemellä ja rikastumisen jälkeen tetraatioliemellä tai Selenito-liemellä kystiinillä, ennen kuin kylvöt vismuttisulfite-agarissa.

Levyjä inkuboidaan lämpötilassa 35 ° C ± 0,2 24 - 48 tunnin ajan, aerobioosissa.

Kismuttisulfiittiagarin pesäkkeiden ominaispiirteet

Siirtokunnat Salmonella typhi Ne nähdään yleensä tässä agarissa 24 tunnissa mustalla keskuksella ja ympäröivät kirkkaanvihreä halo. Kun taas 48 tunnissa musta kääntyy kokonaan rikkivetyjen muodostumisen vuoksi.

Salmonella parathyphi a esittelee siirtokuntia, joilla on muuttuvia ominaisuuksia. 18 tunnin inkubaation jälkeen voidaan havaita mustia, vihreitä tai läpinäkyviä pesäkkeitä, jotka ovat limakalvojen ulkonäköä. Kun taas 48 tunnin kohdalla niitä havaitaan täysin mustina ja joskus selkeällä metallisella kirkkaudella.

S. Parathyphi a Se pyrkii räjäyttämään väliaineen pesäkkeen ympärille.

Salmonella SP Mustat tai harmaasäiset, metallisella kirkkaalla tai ilman sitä, mayingista tulee pinta tai ei.

Koliformikannat ovat yleensä täysin estettyjä, mutta jos ne kasvavat. Älä värjätä väliainetta siirtokunnan ympärillä.

Rajoitus

-Erittäin heikot siirtot voivat aiheuttaa pesäkkeitä Salmonella typhi vaaleanvihreä, jää huomaamatta ja ilmoittamalla kulttuurista negatiivisena.

Voi palvella sinua: fysiologian haarat

- Vismuttisulfiittiagar voi estää joidenkin salmonellalajien, kuten S. Sendai, s. Berta, s. Gallinarum, s. abortus-Equi.

-Tämä väliaine estää suurimman osan Shigella -suvun lajeista.

- S. Typhi ja s. Arizonae Ne voivat antaa hyvin samanlaisia ​​siirtokuntia.

-H: n tuottamat koliformit₂S, kuten Proteus ja Citrobacter, tuottavat samanlaisia ​​pesäkkeitä kuin salmonella, joten on tarpeen suorittaa biokemiallisia tunnistustestejä.

-Eristettyjen pesäkkeiden saamiseksi on tehtävä hyvä estria; Se on ainoa tapa tarkkailla Salmonella -suvun pesäkkeiden tyypillisiä ominaisuuksia.

QA

Steriiliöiden hallintaa varten plakkia inkubidaan ilman inokulointia 37 ° C: ssa, odotetaan, että kasvua tai värinmuutosta ei ole.

Laadunvalvonnan kannalta voit kylvää tunnettuja kantoja, kuten:

Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella Enteritidis ATCC 13076, Salmonella typhi ATCC 19430, Shigella flexneri ATCC 12022, Enterococcus faecalis ATCC 29212.

Sen odotetaan Escherichia coli ja Shigella flexneri ovat osittain estettyjä kehittyviä vihertäviä ja ruskeita ruskeita pesäkkeitä. Vaikka molemmilla salmonglarilla on oltava erinomainen kehitys mustien pesäkkeiden kanssa, joilla on metallinen kirkkaus, ja lopulta Enterococcus faecalis on estettävä täysin.

Viitteet

1. Wilson, W., Ja e. M. MCV. Blair. Glukoosisumutti sulfite -rautaväliaineen käyttö eristämiseen B -. Typhosus ja B -. Proteus. Lehti hygienia, 1927; 26(4), 374-391. Haettu jstk .JSTOR.org
2. D'Aust Jy. Vismuttisulfiittiagarin suorituskyvyn varastointiolosuhteet. J Clin Microbiol. 1977; 5 (2): 122-124. Saatavana: NCBI.Nlm.NIH.Hallitus
3. IVD -laboratoriot. Wilson-Blairin mukaan vismuttisulfiittiagar. 2009. Saatavana osoitteessa: bismuthsulfitagar_span_jan_2009%20 (2).Pdf
4. HIMEDIA -laboratoriot. Vismuttisulfite -agar. 2017. Saatavana osoitteessa: himediabs.com
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott -mikrobiologinen diagnoosi. 12 Ed. Pan -American toimitus.-Lla. Argentiina.
6.  Morales R, La Cruz D, Leyva G ja Ybarra M. Miravallesissa tuotetun raa'an vuohimaiton bakteriologinen laatu, Puebla. Rev Mex of Ing Chem 2012; 11 (1): 45-54