Maissijauho. Perusta, valmistelu ja käyttö

Hän Maissijauho -agar Se on vankka viljelyväliaine, matala ravitsemusteho, hyödyllinen subkulttuurille Candida albicans. Englanniksi se tunnetaan nimellä maissia ateria agar.

Keskipitkällä tavanomaisella maissijauholla on hyvin yksinkertainen koostumus, se sisältää maissijauhoja, agaria ja vettä. Alhaisen ravitsemustasonsa vuoksi on ihanteellista käyttää sitä sienikantojen ylläpitämisessä kohtalaisiksi ajanjaksoiksi, etenkin mustien sienten ajan.

-Lla. Candida albicans -kompleksin graafinen esitys maissijauho -agarissa. B -. Candida albicans -kompleksin Clamidosporat mikroskooppiin, joka on muodostettu maissijauhoksi. Lähde: a. Grahamcolm [CC BY-SA 3.0 (https: // creativecommons.Org/lisenssit/by-SA/3.0)]/ B. Kirjoittaja: CDC/DR. William Kaplan, kohteliaisuus: Kansanterveyden kuvakirjasto.

Monimutkainen itiö Candida albicans Sitä suositaan tässä väliaineessa, jos 1% Tween 80: stä lisätään agarin valmistelun aikana. Klamidosporien muodostuminen on ominaista tälle lajille ja käytännössä ainoa, joka vaikuttaa ihmiseen.

On myös muita lajeja, jotka muodostavat slamidosporia, mutta on epätodennäköistä, että ne vaikuttavat ihmiseen, esimerkiksi Candida australis, läsnä pingviinien ulosteessa tai C. Clausenii, joka on saprofyytti harvoin. Myös poikkeuksellisen laji C. Stellatoidi ja C. tropicalis He voisivat muodostaa heidät.

Toisaalta glukoosin lisääminen keskisuuriin maissijauhoihin suosii pigmenttien muodostumista kanteissa Trichophytom rubrum.

On tärkeää korostaa, että on olemassa sieniä, jotka eivät muodosta hyphaifs, eivätkä pseudohifas Cryptococcus neoformans, eroaa muista genreistä.

Maissijauho -agaria voidaan valmistaa laboratoriossa tai kaupallisessa väliaineessa.

[TOC]

Perusta

Maissijauho on substraatti, agar on jähmettyvä aine ja vesi on liuotin.

Maissijauho -agaria voidaan täydentää 80: n Tweenin (polyesteri 80 sorbita -monoolaatilla tai polysorbaatilla). Tämä yhdiste vähentää ympäristön pintajännitystä emulgoijavoimansa avulla.

Voi palvella sinua: fosfatidyylinositoli: rakenne, harjoittelu, toiminnot

Se luo myös vihamielisen ilmakehän, joka estää liioiteltuja solujen kertolaskua ja stimuloi hyphaen kasvua, suosimalla myös klamidosporien tuotantoa; Jälkimmäinen piti vastusrakenteita. Tämä rakenne auttaa lajien tunnistamisessa Candida albicans.

Glukoosi puolestaan ​​tässä väliaineessa lisää joidenkin sienten pigmentin muodostumiskykyä.

On huomattava, että glukoosin väliaikainen maissijauho ei palvele klamidosporien osoitusta C: ssäOmplejo candida albicans.

Valmistautuminen

Kotitekoinen maissijauho apar

Punnitse 47 g keltaista maissijauhoa ja liukene 500 ml: aan tislattua vettä. Kuumenna 60 ºC: seen, kun taas valmiste on levoton likimääräisessä tunnissa. Suoda sitten sideharsan ja puuvillan läpi, valinnaisesti se voidaan suodattaa uudelleen Whatman -suodatinpaperin nro 2 läpi.

Suorita tilavuus 1000 ml: lla tislatulla vedellä. Lisää 17 g agar-vettä, lämpöä liuottaa. Autoklajari 15 minuutin ajan 121 ° C: ssa.

Palvella Petri -steriileillä levyillä. Pelastaa jääkaapissa.

Valmistetun väliaineen väri on valkeahko, ja se on muodostettu.

Jos haluat valmistaa maissijauhoa glukoosilla yllä kuvattuun valmistukseen lisätäksesi 10 g: tä glukoosia.

Kaupallinen maissijauho -agar

Punnitse 17 g dehydratoitua väliainetta ja liukene 1 litraan tislattua vettä. Seosta voidaan lämmittää, sekoittaen varovasti liukenemiseksi kokonaan. Sterilisoi autoklaavessa nopeudella 121 ºC, 15 lb, 15 minuutin ajan.

Kaada Petri -steriilit levyt. Antaa jähmettyä. Sijoita ja säästä jääkaapissa, kunnes se käytetään. Kaltaa ennen käyttöä.

PH: n on oltava 6,0 ± 0,2 - 25 ºC.

Maissijauho -agar 80: n kanssa

ISO 18416 -standardin noudattamiseksi maissijauho -agar on valmistettava seuraavasti:

Voi palvella sinua: asetyylikoentsyymi

Punnitse 65 g litraa ja lisää 10 ml Tween 80: ta. Kuumenna ja keitä muutama minuutti, kunnes liukenit, huolehtimalla, ettet ylikuumene liikaa. Sterilisoi 121 ºC: n lämpötilassa 15 minuuttia.

Maissijauho -agar glukoosilla

Parantaa pesäkkeiden kromogeenistä voimaa Trichophyton rubrum ja erottaa ne T. Mentagrofyyttit, Alkuperäiseen kaavaan 0,2% glukoosi voidaan lisätä. Sillä ei tarvitse olla Tween 80, koska glukoosi estää klamidosporien muodostumista.

Käyttää

Pääasiassa Candida -kantojen tutkimiseen on tarkoitettu maissijauho -agarin käyttöä, mikä auttaa sen tunnistamista albicans -lajeissa olevien chloidosporien ominaishavainnassa. Toisin sanoen tämän agarin käyttö toimii apumenetelmänä näiden hiivojen tunnistamiseksi.

Tässä agarissa voi kehittyä sekä saprofyyttisiä että patogeenisiä lajeja, mutta jokainen muodostaa ominaisia ​​myseelirakenteita. Esimerkiksi Torulopsis -suvun lajit eivät tuota sieneeliä ja lisääntyvät vain blastokonidialla.

Samoin trichhosporon- ja geotrichum -lajit tuottavat artroconidioita maissijauhoissa ja joskus on vaikea erottaa toisiaan.

Genotrichumin artroconidiat tuottavat hyfaen jatkoa, joka muistuttaa jääkiekkokeppiä.

Myös pigmenttituotanto käyttämällä glukoosia Trichophytom rubrum.

Kylvää

Agar -jauhoja jauhoja rehellisten epäilyttävien siirtokuntien. Väliaine kylvötään ja inkuboituu 22 ºC: n lämpötilassa 24 - 48 tuntia. Inkubaatioaikaa voidaan pidentää tarvittaessa.

Klamidosporien osoittaminen

Tätä tarkoitusta varten maissijauho -agar, jossa on 80 -vuotiaita. Tämä menetelmä koostuu platinan kanssa, joka käsittelee osaa epäilyttävästä pesäkestä ja tehdä kolme rinnakkaista leikkausta keskiarvossa pitämällä kahva 45º: ssa. Leikkaukset on erotettava 1 cm: n etäisyydellä yhden ja toisen välillä.

Voi palvella sinua: Afrikan kasvisto ja eläimistö: edustavat lajit

Myöhemmin sijoitetaan aikaisemmin liekittynyt esine kylvetyjen venytysmerkkien yli, niin että peitetty puoli ja toinen löydetty.

Inkuboi 30 ° C: seen istutettuja levyjä 48-72 tunnin ajan ja tutki sitten mikroskooppia kansien läpi.

Sienikantojen ylläpito

Kantojen ylläpitämiseksi istutetut plakkit ja tulvat varastoidaan jääkaapissa (4 - 8 ºC). Tällä tavoin ne voivat kestää useita viikkoja ja käyttää opetusta tai tutkimusta varten.

QA

Steriiliyshallinnassa, levyä ilman inokulointia huoneenlämpötilassa on inkuboitu, odotetaan, että kasvua tai värinmuutosta ei ole.

Laadunvalvonnan kannalta voit kylvää tunnettuja kantoja, kuten: Staphylococcus aureus, ATCC 6538, Escherichia coli ATCC 25922, Aspergillus niger ATCC 16404, Candida albicans ATCC 1023, Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763.

Odotetut tulokset ovat osittainen estäminen S. aureus ja JA. koli. Vaikka muissa kannoissa odotetaan tyydyttävää kasvua.

Aspergillus niger Se kasvaa mustien pesäkkeiden kanssa ja iti suunnilleen 5 päivän inkubaatioaikana.

Candida albicans Leveaduriform -pesäkkeet, joissa on klamidosporien tuotanto.

Saccharomyces cerevisiae tuottaa suuria hiivasoluja.

Rajoitukset

Levyn pohjaan muodostuu keltainen sakka, jota ei pidä sekoittaa pesäkkeisiin.

Viitteet

1. Neogen -laboratoriot. Maissiateriagari. Saatavana osoitteessa: FoodSefety.Neogen.com.
2. Mikrokokin viljelyalusta. Maissiateriagari. Saatavana: Mediakulttuuri.com.
3. Linares M, Solís F. Hiivojen opastunnistus. Saatavana osoitteessa: http: // www.opas.Elvisin.
4. Urcia F, Guevara M. Rev. Peru med.Exp. Kansanterveys, 2002; 19 (4): 206-208. Saatavana osoitteessa: Scielo.com
5. Talon talo G. Yleinen mykologia. 1994.  2. painos. Venezuelan keskusyliopisto, Library Editions. Venezuela caracas.
6. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott -mikrobiologinen diagnoosi. 12 Ed. Pan -American toimitus.-Lla. Argentiina.
7. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologinen diagnoosi. 5. ed. Pan -American toimitus.-Lla. Argentiina.
8. Linna E. Joidenkin makro- ja mikroskooppisten menetelmien vertaileva tutkimus Candida -suvun eristämiseksi ja tunnistamiseksi. Rev. Kolumbialainen farmaseuttinen kemian tiede. 1970; 3 (1): 33-57. Saatavana: Tieteet.I-kirjain.Edu.yhteistyö