Thayer Martin Agar Mikä on, perusta, valmistelu, käyttää

Hän Thayer Martin Agar Se on erittäin ravitseva ja selektiivinen kiinteä väliaine eristämiseen Neisseria meningitidis ja Neisseria gonorrhoeae; molemmat tunnetaan patogeeniseksi tai kliiniseksi merkille.

Yksi Thayer Martin Agarin esittämistä tärkeimmistä erityispiirteistä on sen korkea sisältö ravitsevissa lisäravinteissa. Tämä ominaisuus on välttämätöntä, koska Neisseries on erittäin vaativia mikro -organismeja ravitsemuksellisesta näkökulmasta, ja siksi ne eivät kasva yhteisiä media.

Toisaalta, koska näitä mikro -organismeja esiintyy yleensä muilla kuin sterioilla, inhibiittorien lisääminen, jotka estävät mukana olevan kasvistoa, on välttämätöntä vaikuttamatta Neisseria -suvun kehitykseen.

Tämä agar koostuu GC -emäksen agarista, hemoglobiinista, lisäravinteet ja estävien aineiden kompleksista (antibiootit ja sienilääkkeet). Kaupalliset talot myyvät jokaista lisäravinteen erikseen.

Tämän väliaineen kylvönä oleva näyte riippuu etsittystä mikro -organismista. Puolesta Neisseria gonorrhoeae Ihanteelliset näytteet ovat emättimen ja virtsaputken eritteet. Kun taas Neisseria meningitidis Eniten käytettyjä näytteitä ovat CSF, erottelee nielun ja nenänielun.

Perusta

Neisseriat ovat mikro -organismeja, jotka on luetteloitu ärsyttäväksi, ja siksi niiden eristyminen on vaikeaa.  Siksi Thayer Martín on monimutkainen väliaine ja jokainen sen komponentti täyttää alla selitetyn funktion:

GC -pohja -agar

GC -agar sisältää peptoniproteiinia, maissitärkkelystä, natriumkloridia, dipotassuiumfosfaattia. Sen komponentit tarjoavat emäksisiä ravintoaineita mikrobien kehitykseen, neutraloivat myrkyllisiä rasvahappoja, edistävät osmoottisen tasapainon ylläpitämistä, määrittelevät pH: n ja tarjoavat kiinteän konsistenssin ympäristölle.

Hemoglobiini

Hemoglobiini tarjoaa tekijät V ja X (nikotiinamidi adeniinin dinukleotidi NAD ja Hemina). Siksi tässä väliaineessa kasvattaa myös lajeja haemophiluksesta. Hemoglobiini voidaan saada kaupallisesti dehydratoituneeksi tai voi lisätä vasta defibroitua naudan ympäristöön.

Voi palvella sinua: biogeneettiset elementit

Rikastuslisä

Toisaalta Thayer-Martin-elatusainetta tulisi myös lisätä rikastumislisäaineen, koska perusagarin sisältämät ravinteet eivät riitä Neisseria-suvun vaatimuksiin.

Yleisimmin käytetty rikastuslisä on nimeltään Isavalex. Tämä sisältää glutamiinia, adeniinia, NAD: tä, kokarboksylaasia, guaniinia, rauta-nitraattia, bentsooista p-aminohappoa, B12-vitamiini, tiamiini ja glukoosi. Kaikki nämä yhdisteet ovat välttämättömiä patogeenisten neisserien hyvän kehityksen kannalta.

Estäjät

Koska se on erittäin ravitseva väliaine -estäjät, jotka estävät mikro -organismien kasvun alueen tavanomaisesta kasvistosta ja suosittelevat siten Neisseria -suvun eristämistä.

Inhibiittorikompleksi koostuu vankomysiinistä, kolistiinista ja nistatiinista. Vankomysiini estää gram -positiivisten bakteerien kasvua, kolistiini estää gram -negatiivisten bakteerien, kuten pseudomonien ja joidenkin saprofyyttisten neisserien, kehittymisen, ja nistatiini toimii hiivoissa hiivoina, kuten kuten hiivoina Candida albicans.

Silloin Thayer Martin Agaria kuitenkin muutettiin; Muutokset koostuivat timetoprimin lisäämisestä, agarin määrän kasvusta ja ylimääräisen glukoosin kokonaismäärästä. Nämä muutokset paransivat merkittävästi lajien palautumista Neisseria gonorrhoeae.

On huomattava, että treMeToprim estää proteiinigenren kasvua ja sen seurauksena. Tässä mielessä antibiootit ovat ne, jotka tarjoavat selektiivisen luonteen keskipitkille Thayer Martinille.

Valmistautuminen

Thayer Martin Original Agar

-GC -agar

Punnitse 8,2 g dehydratoitua GC -elatusainetta ja suspendi 100 ml: n nopeudella. Sekoita ja keitä 1 minuutin ajan usein sekoittumista liukenemiseksi kokonaisuudessaan. Steriloi seos autoklaavessa 121 ° C: ssa 15 minuutin ajan.

Voi palvella sinua: hominisointiprosessi: Ominaisuudet ja vaiheet

-2% hemoglobiini

Suspendi 2 g dehydratoitua hemoglobiinia 2 tai 3 ml kuumaa tislattua vettä tasaisen seoksen muodostamiseksi. Lisää vettä vähitellen 100 ml: n tilavuuden loppuun saattamiseksi. Jousituksen on oltava homogeenista ennen sterilointia.

Steriloi autoklaavissa 15 minuutin ajan.

-Rikastuslisä

Kolenna kaupallinen injektiopullo saman kaupallisen talon tarjoaman laimennelman kanssa. Sekoita hyvin. Käytettävän laimeen määrä määritetään pakkausohjeessa.

-Estämislisä V.C.N (vankomysiini, kolistiini, nistatiini)

Rekisteröidy injektiopullo kaupallisen talon tarjoaman laimennelman kanssa. Sekoita hyvin. Käytettävän laimeen määrä määritetään pakkausohjeessa.

-Valmis

Jokaisesta 100 ml: n GC -agarista etenee seuraavasti:

Kun GC -agar poistuu autoklaavesta, anna jäähtyä likimääräiseen lämpötilaan 50 ° C ja lisää 2 ml valmistettua hemoglobiiniliuosta, 2 ml rikastuslisäainetta (isoobalex tai bralex) ja 2 ml inhibitiolisäainetta. Sekoita ja tarjoile Petri -steriileillä levyillä.

Anna jähmettyä ja säästää jääkaapissa, kunnes käytä.

Valmistetun väliaineen väri on kirsikkapunainen. Väliaineen lopullinen pH on 7,2 ± 0,2

Thayer Martin Agar muokattu

Punnitse 8,2 g dehydratoitua GC -elatusainetta ja suspendi 100 ml: n nopeudella. Lisää 1 g agar-vettä ja lisää 0,3 g glukoosia. Sekoita ja keitä 1 minuutin ajan usein sekoittumista liukenemiseksi kokonaisuudessaan. Steriloi seos autoklaavessa 121 ° C: ssa 15 minuutin ajan.

Valmista hemoglobiini- ja rikastuslisäaine, kuten yllä on kuvattu.

Käytetty estolisä on v.C.N.T (vankomysiini, kolistiini, nistatiini, tripatoprim).

Voi palvella sinua: Evolutionist -teoriat, sen kirjoittajat ja ideat

-Valmis

Jatka Thayer Martinin alkuperäiselle agarille kuvatulla tavalla.

Käyttää

Thayer Martin Agarin tulisi olla malttinsa ennen näytteiden kylvää. Yleisesti käytettyjä näytteitä ovat nielun erikseen, nenän eritteet, emättimen, virtsaputken ja/tai peräsuolen ja CSF.

Käytä vasta otettuja näytteitä ja tee vahvoja siirroksia agarista. Näytteet kylvetään suoraan materiaalin purkamisen takia ja erottuvat sitten pinnan uupumuksen vuoksi.

Levyjä inkuboidaan 35-37 ° C: ssa 24-48 tuntia mikroaerofiliakannassa (5% Co₂-A. Inkubaatioajan jälkeen levyt tutkitaan etsimällä pieniä pesäkkeitä, harmaata ja joskus limakalvoa.

Suorita gramma ja vahvistavat biokemialliset testit epäilyttäville siirtokunnille.

QA

Laadunvalvonnan suorittaminen Thayer Martin voi käyttää seuraavia mikrobikantoja.

Neisseria gonorrhoeae ATCC 49226 ja Neisseria meningitidis ATCC 13090; Molemmissa kannoissa odotetaan tyydyttävää kehitystä.

Seuraavat kannot on myös sisällytettävä: Staphylococcus epidermidis ATCC 14990, Escherichia coli ATCC 25922, Proteus mirabilis ATCC 43071 ja Candida albicans ATCC 10231. Kaikissa heissä on odotettavissa täydellistä tai osittaista estoa tässä väliaineessa.

Rajoitukset

-Muista.

-On kantoja Neisseria gonorrhoeae joka voi olla herkkä käytetyn vankomysiinin pitoisuudelle. Tästä syystä on suositeltavaa käyttää rinnakkaista suklaa -agaria, jota on täydennetty IsovalX: llä, mutta ilman estäjiä.

-On olemassa nistatiiniresistenttejä hiivakannoja, jotka voivat kasvaa tässä väliaineessa ja häiritä patogeenisten neisserien, erityisesti gonokokkien eristämistä.

Viitteet

1. Britannia Laboratories. Thayer Martin Media muokattu. Saatavana osoitteessa: Britanialab.com