Tetrakaatti lieme, mikä on, perusta, valmistelu, käyttää

Hän Tetraktioliemi O TT -lieme on selektiivinen nestemäinen viljelyalusta Salmonella. Sen on luonut Müeller ja myöhemmin Kauffmann muokannut, joten on niitä, jotka kutsuvat häntä Müeller-Kauffmann-liemeeksi.

Alkuperäinen väliaine sisälsi Peptonas -proteiinia, kalsiumkarbonaattia ja natriumitiosulfaattia. Kauffmann lisäsi sappisuolat ja loi uuden modaalisuuden kirkkaanvihreällä. Nämä aineet estävät koliformien kasvua jättäen vapaan väliaineen patogeenisten bakteerien, tässä tapauksessa Salmonella.

Jodure -joduuriliuoksen yhdistelmä tetrakato -liemeen. Lähde: Manuel Almagro Rivas [CC BY-SA 4.0 (https: // creativecommons.Org/lisenssit/by-SA/4.0)]

Muutos oli erittäin onnistunut, koska väliaineen herkkyys kasvoi merkittävästi. Siksi se on tällä hetkellä hyödyllinen salmonellien etsinnässä minkä tahansa tyyppisissä näytteissä, mutta erityisesti kiinteissä tai nestemäisessä ulosteessa ja ruoassa.

Sen valmistelu koostuu kahdesta vaiheesta; Kaupallinen väliaine on perusta tetraati -liemen valmistukseen ja myöhemmin niin, että tetrakato voidaan muodostaa joduuriliuoksen, joka täydentää väliainetta.

American Public Health Association (APHA) suosittelee tetraatioliemin käyttöä, jota on täydennetty kirkkaanvihreällä näytteiden rikastuttamiseen salmonellaa etsimään, koska se on selektiivisempi kuin tetraatioliemi ja Selenito -liemi.

Yleensä tetrakato -liemi on ihanteellinen, kun salmonella -suvun bakteerien läsnäoloa epäillään pieninä määrinä tai joita kohdellaan väärin altistumisella estäville aineille tai teollisuusprosesseille, jotka minimoivat niiden elinkelpoisuuden.

Perusta

Läsnä olevat peptonit vastaavat digreatia kaseiinia ja digreted digreal -peptisen kudoksen peptistä. Ne tarjoavat hiilen, typen ja ravinteiden lähteen yleensä bakteerien kasvulle.

Voi palvella sinua: Mastozoolologia: Alkuperä, mitä tutkimuksia, esimerkki tutkimuksesta

Natriumtiosulfaatti reagoi puolestaan ​​jodidiliuoksen kanssa tetrakato -muodossa. Tämä estää koliformien kasvua ja suosii bakteerien kehitystä, jotka sisältävät entsyymittetrato -reduktaasin, niiden joukossa on sukupuolen salmonello, mutta myös proteus.

Sappisuolat toimivat myös useimpien positiivisten gram -bakteerien ja joidenkin gram -negatiivisten (koliformien) estävänä aineena (koliformit).

Kalsiumkarbonaatti absorboi myrkylliset aineet, jotka syntyvät tetrakaation hajoamisella, joka muodostaa rikkihappoa. Tässä mielessä kalsiumkarbonaatti neutraloi happamuuden pitäen stabiilin väliaineen pH: n.

Loistavan vihreän modaalisuuden tapauksessa tämä aine lisää tetrawatiaatin liemen selektiivistä voimaa estämällä muita muita mikro -organismeja kuin sukupuolen Salmonella.

Valmistautuminen

-Tetraktioliemi

Joduradan jodiliuos

Punnita:

• 6 gr jodia.
• 5 g gr kaliumjodidia.

Kaliumjodidi liukenee noin 5 ml: aan steriiliä tislattua vettä, sitten jodia lisätään vähitellen, kun seosta lämmitetään. Kun se on täysin liuennut, se on huuhtelua steriilillä tislatulla vedellä, kunnes se saavuttaa lopullisen tilavuuden 20 ml.

Puoli pohja tetrakato -liemi

Punnitse 46 grammaa kuivunut väliaine ja suspendoi 1 litrassa steriiliä tislattua vettä. Sekoita ja lämmitä sen kokonaisliukenemiseen, voi johtaa vain muutaman minuutin ajan. Älä steriloi autoklaavia. Elatusaineen pohjan annetaan jäähtyä 45 ° C: seen suunnilleen ja tuolloin lisätään 20 ml jodure -liuosta.

Kun se on lisätty joduroidun liuoksen väliaineeseen, sitä on käytettävä välittömästi. Jos et halua käyttää koko seosta, jatka seuraavasti:

Voi palvella sinua: Sisäinen erityinen kilpailu: Ominaisuudet, tyypit ja esimerkit

10 ml perusväliainetta jakautuu putkiin, ja vain niille, jotka tulevat ympätä näytteillä, lisätään 0,2 ml joduroitua liuosta.

Ne, joita ei tule käyttää.

Keskipitkän väri ennen jodidijodidiliuoksen lisäämistä on maitomainen valkoinen, valkoisella sateella ja aggregaatin jälkeen on ruskea tiheällä sateella. Havaittu sakka on normaali ja vastaa kalsiumkarbonaattia, jota ei ole liuennut. Väliaineen lopullinen pH on 8,4 ± 0,2.

-Tetrakaatti liemevariantti kirkkaanvihreällä

Tetrationato -liemen valmistamiseksi kirkkaanvihreällä, kaikki yllä kuvattuja vaiheita suoritetaan, mutta lisäksi se lisätään valmistetun 0,1%: n kirkkaan vihreän liuoksen seokseen.

Vihreä

Tämä ratkaisu valmistetaan seuraavasti:

Punnitse 0,1 g kirkkaan vihreää ja suspendoi 100 ml tislattua vettä. Kuumenna kiehumiseen sen kokonaisliikennön saavuttamiseksi. Säästä keltainen pullo.

Käyttää

Ulkonäytteille (Coproulture) protokolla on seuraava:

Inokuloi 1 g kiinteitä ulosteita tai 1 ml nestemäisiä ulosteita putkessa, jossa on 10 ml tetraatioliemiä. Venytä voimakkaasti ja inkuboi aerobioosia 43 ° C: ssa 6-24 tunnin ajan.

Myöhemmin ota 10-20 ui lieme ja nouse valikoivassa väliaineessa salmonellalle, kuten SS -agar, XLD -agar, kirkkaanvihreä agar, Hektoenin enteerinen agar, muun muassa.

Samanaikaisesti selektiiviset salmonella -keinot on ympätä suoralla näytteellä (uloste) ilman rikastuttamista. Lataa peräsuolen tamponäytteille putkeen kerätty materiaali ja jatka edellä kuvatulla tavalla.

Voi palvella sinua: lipogeneesi: ominaisuudet, toiminnot ja reaktiot

Elintarvikkeiden näytteille paina 10 g kiinteää ruokaa tai 10 ml nestemäistä ruokaa ja siirrä pullo, jossa on 100 ml tetraati -liemiä, joka on valmis käytettäväksi. Jatka samalla tavalla kuin yllä kuvatulla, mutta inkuboi 37 ° C.

Kuten voidaan nähdä näytteen ja liemen välinen suhde on aina 1:10.

QA

Viljelysalustan testaamiseksi voit käyttää kantoja tunnettuja ohjaimia. Eniten käytettyjä ATCC -sertifioituja kantoja.

Käytettävät kannat ovat Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella -aukio DSM 4224, Salmonella Enteritidis ATCC 13076, Escherichia coli ATCC 25922, Enterococcus faecalis ATCC 19433 ja Staphylococcus aureus ATCC 25923.

Salmonella -kantoihin odotetaan erinomaista kehitystä, kun taas Escherichia coli Sillä voi olla heikko tai säännöllinen kehitys, ja GRAM -positiiviset kannat (enterococcus ja staphylococcus) ovat osittain tai kokonaan estettyjä.

suositukset

-Koska tämä väliaine ei estä proteuksen kasvua, jotkut laboratoriot asettavat yleensä 40 mg/l novobiosiinia tämän mikrobikannan kehittymisen välttämiseksi. Antibiootti on lisättävä ennen jodure -jodiliuosta.

-Väliaineen valmistelun jälkeen, mukaan lukien jodjodiliuos, sen ei pitäisi viettää yli 2 tuntia inokuloimaan.

-Putkien väliaineen jakautumishetkellä seos on homogenisoitava jatkuvasti muodostuneen sakan suspendoimiseksi uudelleen.

-Vähemmän saastuneissa näytteissä 35-37 ° C: näytteitä inkubidaan ja erittäin saastuneissa näytteissä suositellaan inkubaatiota 43 ° C: ssa.

Viitteet

1. BBL -media. 2005. Valmistettu putkessa Salmonella -lajien viljelyyn.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott -mikrobiologinen diagnoosi. 12 Ed. Pan -American toimitus.-Lla. Argentiina.