Biuret -säätiö, reagenssit, menettely, käyttö

Hän Biuretti Se on reagenssi, jota käytetään pitkän ketjun ja lyhyen ketjun proteiinien määrittämiseen. Sitä käytetään erityisesti analyyttisen kemian ja uroanalyysin alueella seerumin, plasman ja virtsan proteiinien kokonaispitoisuuden tutkimiseksi.

Proteiiniarvoja voidaan nostaa tai laskea tietyissä patologioissa. Hipoproteinemias -kuvia esitetään yleensä munuaissairauspotilailla, aliravittuissa ja kroonisia infektioita sairastavilla potilailla.

Biuret -reaktiopositiivisessa biurettikokeessa muodostetun kompleksin kemiallinen rakenne. Lähde: Yikrazuul [julkinen alue]/Flickr

Vaikka hyperproteinemiaa havaitaan patologioissa, kuten multippeli myelooma, systeeminen lupus erythematosus, bakteerien endokardiitti, bakteerien meningiitti, Waldenstrom -makroglobulinemia.

Toisaalta proteiinien esiintyminen virtsassa johtuu munuaisten albumiinisuodatuksesta. Tämä on patologinen käyttäytyminen, jota on tutkittava.

Tässä mielessä Biuret on erittäin hyödyllinen, koska se mahdollistaa seerumin proteiinien, plasman, virtsan läsnäolon kvantifioinnin monien muiden näytteiden joukossa.

Jopa biurettia voidaan käyttää tutkimaan proteiinien esiintymistä ja konsentraatiota tuntemattomista tai tuntemattomista koostumusnäytteistä. Siksi sitä käytetään laajasti tutkimusalueella.

Biuret -testi perustuu peptidilinkkien havaitsemiseen. Testi annetaan alkalisella väliaineella. Näytteen on sisällettävä vähintään kaksi peptidilinkkiä, jotta violettivoiman värikompleksi voidaan muodostaa. Kompleksin muodostuu linkkien liitto ja kuparin ioni.

[TOC]

Perusta

Biuret -reagenssi koostuu kaliumhydroksidista, kuplisulfaatista ja natriumista ja kaliumestratosta. Natriumhydroksidia käytetään ympäristön alkaloimiseksi, koska tämä tila on välttämätön reaktion tapahtumiseksi.

Aineet, jotka reagoivat proteiinien kanssa.

Voi palvella sinua: käyminen: historia, prosessi, tyypit, esimerkit

Jos näytteessä on aineita, joissa on peptidisidoksia (polypeptidit tai proteiinit), testi antaa positiivisesti.

Reaktio tulkitaan positiiviseksi, kun liuoksesta tulee violetti. Väri tuotetaan muodostumalla kompleksi vähintään kahden peptidisidoksen välillä, joissa on CO-NH-ryhmä ja nykyiset kupikationit.

Violettikompleksi voidaan muodostaa kahdella tavalla: toinen johtuu metalli -ryhmien (karkeuttamisesta) sitovien ryhmien protonien menetyksestä ja toisesta happi- ja typpielektronien liitoksella, jotka ovat vapaat ja sitovat kuparin kanssa.

Tämä reaktio voi vaihdella intensiteetin ja värin mukaan proteiinityypistä riippuen.

Testi voidaan suorittaa laadullisesti tai kvantitatiivisesti. Laadullisessa muodossa se ilmoitetaan positiivisena tai negatiivisena. Kvantitatiivisessa muodossa pitoisuus voidaan mitata spektrofotometrisellä menetelmällä.

Reaktio luetaan välillä 540-560 nm. Värin voimakkuus on suoraan verrannollinen peptidilinkkien pitoisuuteen näytteessä.

Reagenssit

-Natriumhydroksidi (NaOH) 20%: lla

-1% Pentahydraatt -kupri -sulfaatti (CuO₄. 5H₂JOMPIKUMPI)

-Sekoitettu natrium- ja tetrahydraattien kaliumtarrato (Knac₄H₄JOMPIKUMPI₆· 4H₂JOMPIKUMPI)

Biuret -reagenssin vakaus

-Se on pidettävä jäähdytyksessä.

Menettely

Tekniikka

-Aseta 100 ui näytettä tai koeputkeen analysoitava kuvio.

-Lisää 2 ml natriumhydroksidia.

-Sekoita.

-Lisää 5 ml Biuret -reagenssia.

-Sekoita ja jätä 25 minuuttia huoneenlämpötilaan, peitä ja suojaa valolta.

-Tarkkaile muodostumista tai ei väriä ja mittaa spektifotometrisesti.

Kalibrointikäyrä

Kalibrointikäyrän suorittamiseksi voit käyttää seerumin naudan albumiinia kuviona. Siitä valmistetaan useita pitoisuuksia. Esimerkiksi 25, 50, 75, 100, 125 ja 150%.

Reaktio on asennettu kaikilla näillä tunnetuilla pitoisuuksilla ja absorbanssi luetaan aallonpituuteen 540 nm. Tiedossa olevien pitoisuuksien ja absorboivien lukemien kanssa kalibrointikäyrä suoritetaan.

Se voi palvella sinua: Kiinan kasvisto ja eläimistö: edustavat lajit

Jokaisessa määrityksessä tai paljon jalostettuja näytteitä se on suositeltavaa. Kalibrointimallina voit käyttää seerumin naudan albumiinia 0,1-2 mg/ml.

Mittaukset tehdään 540 nm: n spektrofotometrillä.

Lineaarisuus toteutuu pitoisuuteen 12 g/dl.

Puuttuminen

Aineet, jotka häiritsevät Biuret -testiä

Vaikka se ei ole kovin usein, on huomattava, että tämän testin suorittamisen aikana jotkut aineet voivat häiritä. Esimerkiksi ammoniumin läsnäolo voi estää värin muodostumista.

Samoin muut aineet voivat absorboida saman aallonpituuden, kuten tietyt pigmentit.

Toisaalta häiriöt voidaan luoda, kun toinen muu aine kuin peptidilinkki muodostaa kompleksin metallisuolalla. Esimerkki: Jotkut hiilihydraatit ja tietyt lipidit.

Jos se osoittaa sen analysoimaan jonkin tyyppistä sakkaa, se on suodatettava tai sentrifugoitava ennen testin asettamista.

Aineet, jotka eivät häiritse Biuret -testiä

Testiin ei vaikuta:

-Bilirubiini pitoisuuteen 20 mg/dl.

-Hemoglobiini pitoisuuteen 750 mg/dl.

-Dekstraani pitoisuuteen 30 g/l.

-Triglyseridit pitoisuuteen 4000 mg/dl.

Edut

-Se on yksinkertainen menetelmä suorittaa.

-Se on taloudellinen testi.

-Sillä on korkea proteiinispesifisyys.

-Harva häiriö.

Haitat

Sillä ei ole juurikaan herkkyyttä havaita pieniä määriä proteiineja. Fuentesin ja yhteistyökumppaneiden tekemä työ vakuuttaa, että Biuret -testimenetelmässä on 1 mg/ml proteiinin havaitsemisraja ja kvantifiointiraja 3 mg/ml.

Toinen Amazonin yliopistossa tehty tutkimus raportoi kuitenkin paljon alhaisemmat arvot. Tutkimuksen ilmoittama havaitsemisraja on 0,020 mg/ml ja kvantifiointiraja 1.33 mg/ml.

Sovellukset

Biuret -reagenssia tai testiä käytetään proteiinin määrittämiseen kliinisissä ja ei -kliinisissä näytteissä rutiinissa ja tutkimuslaboratorioissa.

Voi palvella sinua: elävien olentojen ominaisuudet

Patologiat, jotka tutkivat tai vähensivät Proteiinit

Monissa patologioissa on tärkeää määrittää kokonaisproteiinien konsentraatio kliinisissä näytteissä, jotta ne voivat olla korkea tai vähentynyt.

Ne ovat kohonneet:

-Multippeli myelooma,

-Systeeminen lupus erythematosus,

-Bakteerien endokardiitti,

-Bakteeri -meningiitti,

Waldestrom makroglobulinemia, muun muassa.

Se on vähentynyt:

-Munuaisten vajaatoiminta,

-Ihmiset, joilla on vaikea aliravitsemus,

-Potilaat, joilla on kroonisia infektioita, muun muassa.

Kliiniset näytteet

Yleisimmät kliiniset näytteet ovat seerumi, plasma ja virtsa. Seerumin tai plasmaproteiinien normaali arvo on 6.0-8.8 gr/dl.

Aikuisten aikuisten proteiinipitoisuus ei ylitä 150 mg/24 -tunnista lukua.

Virtsan/kreatiniiniproteiinihakemiston normaali arvo virtsassa

Vauvat: < a 0,50 mg

2 -vuotiaat lapset: hakemisto: 0,20 mg

Aikuiset: < 0,2 mg

Ei -kliiniset näytteet

Biuret -reaktiota voidaan käyttää monen tyyppisiin ei -kliinisiin näytteisiin, kuten maitotuotteisiin, antifiderumiin tai mihin tahansa tuntemattomaan aineeseen, johon proteiinien läsnäolo on halunnut tutkia.

Viitteet

1. Vázquez J, Guerra L, Quintana J, Ramírez J, Fernando Ry Vázquez ja. (2014). Mangrove-ostrionin fysikaalisen kemiallinen karakterisointi ja proteiinipitoisuus (crassostrearizophorae). Kuuban Journal of Chemistry, 26 (1), 66-74. Haettu 26. kesäkuuta 2019, http: // scielo.SLD
2. Chaparro S, Lara A, Sandoval A, Sosa S, Martínez J, Gil J. Mango -siementen mantelin funktionaalinen karakterisointi (Mangifera osoittaa l.-A Kehitystieteellinen aikakauslehti. 2015; 6 (1): 67-75
3. "Biuret." Wikipedia, ilmainen tietosanakirja. 19. kesäkuuta 2019, 16:37 UTC. 26. kesäkuuta 2019, 22:18
4.  Fuentes f, quispe i, garcía j. Biuret -menetelmän standardointi kokonaisproteiinin kvantifioimiseksi monen kulkuetibotrooppisessa seerumissa, joka on tuotettu kansallisessa biologisessa tuotekeskuksessa. Bol - Inst NAC Health 2012; 18 (11-12).  Saatavana osoitteessa: arkisto.Noste.Hölynpöly.PE -PE
5. Viinitilalaboratoriot. Kokonaisproteiinit. Kolorimetrinen menetelmä seerumin ja plasmaproteiinien kokonaismäärän määrittämiseksi. Saatavana osoitteessa: wiener-lab.com.AR