Neubauer -kamerahistoria, ominaisuudet, käyttää

Se Neubauer -kamera, Lämpömittari tai Hechosytometri on laboratorioväline, joka koostuu erityisestä lasiltasta. Tämän kammion avulla suoritetaan joitain solutyyppejä, kuten punasoluja, valkosoluja ja verihiutaleita, vaikka sitä voidaan käyttää itiöiden, siittiöiden, loisten jne. Laskemalla jne.

Siinä on erittäin erikoiset ominaisuudet, koska se koostuu kolmesta vyöhykkeestä, keskeinen kreivi ja kaksi tukivyöhykettä. Jokaisessa kamerassa on kaksi laskenta -aluetta tai hiiret, yksi yläosassa ja toinen alareunassa.

Neubauer -kamera. Lähde: Santibadia [CC BY-SA 4.0 (https: // creativecommons.Org/lisenssit/by-SA/4.0)]. Muokattu kuva.

Näillä on useita jakoja ruudukossa. Laskenta -alueet ovat keskikokoisia laatikoita, jotka löytyvät molempien retiklien 4 kulmasta, sekä keskusaukiosta.

Kamerakokoonpano tulisi tehdä erittäin huolellisesti, koska mikä tahansa yksityiskohta vaikuttaa solun määrään. Voidaan tehdä monia virheitä, mutta jos jokin niistä tapahtuu, kamera on purettava, puhdas ja uudelleenkokoonpano. Päävirheiden joukossa voidaan mainita:

Rebosar kamera tai tee riittämätöntä täyttö, anna kameran kuivua, yritä poistaa ylimääräinen neste sideharsolla, kallista kameraa kuljettamalla sitä, täyttämällä likaisen tai märän kameran, sekoittamatta laimennusta tai näytettä, muun muassa, mm. Kaikki nämä virheet johtavat epätodelliseen arvoon.

[TOC]

Historia

Neubauerin kamera on tarkkuuslaite, ja valmistusprosessissa se kulkee tiukan laadunvalvonnan läpi. Se on luotu tarkkoihin hiukkasiin tai muotoihin MM: llä³, kuten solut eri nesteissä. Sen herkkä grafiikka on kaiverrettu timanttikynällä.

Neubauer -kammion ominaisuudet

Koko kamera on normaalin liukumäen kokoinen, jotta se voidaan asettaa mikroskooppilevylle.

Kamera koostuu kolmesta keskimmäisestä suorakulmaisesta pinnasta (A, B, C). Vyöhykkeellä “B” R- tai COUNT -vyöhyke sijaitsee, nimeltään myös reticulum. Yksi kameran molemmilla puolilla, erotettuna D -vyöhykkeellä.

Neubauer -kameran graafinen kaavio. Lähde: Käytännöllinen hematologiaopas. Carabobon yliopiston bioanalyysikoulu, Venezuela.

Jokainen retikulum on kiillotettu alue, joka sisältää kaiverrettujen panosalueen. Se koostuu neliöstä, jonka pinta -ala on 9 mm² Ja se on jaettu sisäisesti 9 kuvaan 1 mm² pinta. Neljä kulmaa on jaettu 16 pienempiin ruudukkoihin (0.0625 mm² Pinta).

Nämä ruudukot muodostuvat sarjasta millimetrilinjoja, jotka leikkaavat keskenään, muodostaen täydellisesti graafiset ruudukot ja rajattu määriteltyihin toimenpiteisiin. Nämä viivat on tallennettu timanttikärkillä.

Parannettu Neubauer -retikulum. Lähde: Karabobon yliopiston bioanalyysikoulun käytännöllinen hematologiaopas, Venezuela.

Neljä puolta vastaa laskenta -aluetta. Näillä puolilla tai kulmissa suoritetaan useimpien solujen (punasolut ja leukosyytit) kuvaus, kun taas verihiutaleet lasketaan keskialueella.

Voi palvella sinua: Malachite Green: Ominaisuudet, valmistelu, sovellukset, myrkyllisyys

Keskusvyöhykkeellä on enemmän jakoja, se koostuu 1 mm: n neliöstä² jaettu 25 maalaukseen, joiden pinta -ala on 0,04 mm² jokainen. Nämä puolestaan ​​jaetaan 16 ruudukkoon, joiden pinta -ala on 0,0025 mm².

Kuvaus parannetusta Neubauer -retikulumista. a) Kulmien neliö, b) Keski -neliö, c) Keski -neliön keskiosainen neliö. Lähde: Karabobon yliopiston bioanalyysikoulun käytännöllinen hematologiaopas, Venezuela.

"A" ja "C" -alue toimii tukena erityisten esineiden kansien sijoittamiselle, jota kutsutaan hematimetriseksi lamella- tai hematimetripeitteiksi.

Lamellin ja laskentapinnan välinen korkeus on 0,1 mm. Laskentalaatikoiden pintamittaukset, samoin kuin kameran korkeus ja näytteen laimennus ovat välttämättömiä tietoja lopullisten laskelmien suorittamiseksi.

Sovellukset

Sitä käytetään solujen määrään. Erityisesti se on erittäin hyödyllinen hematologia -alueella, koska se sallii 3 verisolujen valmistuksen; eli punasolut, valkosolut ja verihiutaleet.

Sitä voidaan kuitenkin käyttää muilla alueilla, esimerkiksi siittiöiden, itiöiden, bakteerien tai muiden tärkeiden elementtien laskemiseksi näytetyypistä riippuen.

Kuinka käytetään?

näytteen valmistus

Solun määrän suorittamiseksi yleensä se alkaa edellisestä laimennuksesta. Esimerkki: Valkosolujen laskemiseksi laimennus on 1:20 Turk -nesteellä. Laimennus on hyvin sekoitettu ennen pipetin lataamista ja Neubauer -kameran asettamista.

On tilanteita, joissa laimennus 1:20 ei riitä laskemiseen. Esimerkiksi potilailla, jotka kärsivät tietyntyyppisistä kroonisista leukemioista. Näissä tapauksissa korkeammat laimennukset tulisi tehdä 1: 100.

Jos päinvastoin, tili on erittäin alhainen, kuten vakavissa leukopenioissa, voidaan tehdä pienempiä laimennoksia näytteen keskittymiseksi. Esimerkki: Voit tehdä laimennuksen 1:10.

Muutokset, jotka tehdään, vaikuttavat laskelmiin.

Neubauer -kammion kokoonpano

Neubauerin kammio kootaan asettamalla hematimetrinen lamelli keskusvyöhykkeelle. Molempien on oltava erittäin puhtaita ja kuivia. Lamellan asettamiseksi reunat ja putoaavat kameraan varovasti.

Tämä täytetään asettamalla automaattisen pipetin tai thoma -pipetin kärki 35 °: n kulmassa lastin alueen reunalle. Neste puretaan varovasti ja lastausvyöhyke täytetään kapillaarisuudella. Tämä tehdään molemmilla puolilla ladataksesi kaksi hiilihoitoa.

Mitään retikoita ei pidä ylikuormittaa, eikä nestettä pidä evätä. Kuorman on oltava tarkka. On tärkeää, että täyte tehdään homogeenisesti, ts. Kuplia ei pitäisi olla.

Kun kamera on asetettu levossa 2 minuutin ajan, solujen saostuminen taustalla ja sen visualisointi ja laskenta on helpompaa.

Sen jälkeen kun lepoaika on asennettu valomikroskoopin valoon tarkkailua varten. Ensin se keskittyy 10 -kertaisella tavoitteella ja tarvittaessa se siirretään 40X: iin.

Voi palvella sinua: Gap Anion

Visualisoinnin parantamiseksi mikroskoopin valo vähenee. Tätä varten lauhdutin lasketaan ja kalvo sulkeutuu vähän.

Tili

Valkosolujen tai leukosyyttien huomioon ottamiseksi on laskettava kulmien neljän keskipitkän neliön koko pinta,.

Luku alkaa vasemman yläkulman neliöstä. Se alkaa eturivin ensimmäisestä neliöstä, toisin sanoen vasemmalta oikealle päästäkseen vastakkaiseen päähän.

Siellä se on laskettu ja ulkonäkö palautetaan oikealta vasemmalle, kunnes se saavuttaa toisen pään ja niin kussakin ruudukon soluissa siksagin muodossa. Kunkin keskipitkän neliön 16 ruudukkoa lasketaan.

Solun laskemisen välttämiseksi kahdesti on sääntöjä, jotka sijaitsevat kunkin ruudukon rajaviivoilla. Solut, jotka sijaitsevat vasemmalla ja yläviivat, lasketaan ja solut, jotka sijaitsevat oikealla ja alemmat viivat, jätetään huomiotta.

Manuaalinen soluskurin tulisi olla saatavana siten, että operaattori sortaa laiteavain niin monta kertaa kuin tarkkailevat soluja. Kirjanpitäjän käytön avulla operaattori voi laskea ilman tarvetta etsiä mikroskooppisesta kentästä. Tilin lopussa havaitset laskettujen solujen kokonaismäärän.

Laskelmat

Laskelmissa voit edetä monin tavoin. Voit laskea yhden retikulumin tai molemmat voidaan laskea ja molempien keskimäärin. Näissä kahdessa tilanteessa lasketut solut on kerrottava tekijällä, mikä tässä tapauksessa olisi 40. Ja niin saadaan kokonaismäärä mm /³.

Mutta jos kaksi hiiret lasketaan ja keskimääräistä ei ole, se on kerrottava eri tekijällä, tässä tapauksessa 20.

-Kertolaskukerroin

Seuraavaksi kertolaskukerroin lasketaan.

Laskelmia varten otetaan huomioon useita tietoja, mukaan lukien laimennuksen otsikko, kammion korkeus ja kerrottu pinta.

Laimennus

Laimennus, jota käytetään tavanomaisella tavalla, on 1:20 leukosyyttien määrään.

Kammion korkeus

Kameran ja hematimetrisen laminaa välinen korkeus on 0,1 mm.

Laskettu pinta

Jos 5 mm: n neliötä lasketaan² Pinta, se tarkoittaa, että laskennan kokonaistili on 5 mm². Nämä tiedot on kerrottava kameran korkeudella kerrottu kokonaistilavuus. Eli 5 mm² x 0,1 mm = 0,5 mm³.

Kaavat ja laskelmat

Sanottua tietoa sanotaan:

Jos nopeudella 0,5 mm³ -Soluja on laskettu

1 mm³ --Solujen lukumäärä on - x

X -solu n ° = (nro solujen keltainen x 1) /0,5 mm³

Mutta myös laimennus on otettava huomioon. Siksi kaava on seuraava:

(Laskettujen solujen nro x 1) x 20/0,5 mm³

Lopuksi, yhteenvedon mukaan voit kertoa 40: llä laskettujen solujen lukumäärän. Siten saadaan leukosyyttien arvo mm³.

Voi palvella sinua: Osmoosi: Prosessi, tyypit, erot diffuusion ja esimerkkien kanssa

Jos nämä kaksi hiekkaa lasketaan, datatiedot muuttuvat, että tässä tapauksessa olisi 10 neliötä, ts. 10 mm². Ja kokonaistilavuus, joka on kerrottu 1 mm3. Kaava säilyy:

(Solujen nro Lasketaan x 1) x 20/1 mm³

Siksi tässä tapauksessa kertolaskukerroin olisi 20.

Virheet

-Jos kameraa ladataan se ylitetään tai ylitetään nesteellä, kameran korkeus vaihtelee. Tämä johtaa todellisen laskemiseen. Jos yrität poistaa ylimääräistä sideharsolla tai puuvillalla, tämä edustaa karafaalivirhettä. Tämä vaikutus saa solut keskittymään, lisäämällä laskua.

-Jos se veloitetaan huonosti, kreivi tulee todellisen alle.

-Jos kamera on asennettu ja vapautetaan, ei ole enää mahdollista tehdä laskua, koska se lähettää virheellisiä tuloksia.

-Jos näytteen laimentaminen ei ole sekoitettu ennen kameran lataamista, lukuvirheen riski on, koska solut eivät jaa homogeenisesti. Siksi solujen pitoisuus on vähemmän tai suurempi, riippuen siitä, otetaanko näyte nesteen pinnalta vai putken pohjasta vastaavasti.  

-Kuplien läsnäolo vähentää nesteen määrää, jonka on siirryttävä hiuskierrokseen, häiritsemällä solujen oikeaa visualisointia ja jakautumista. Kaikki tämä vaikuttaa merkittävästi tuloksiin.

-Älä nosta mikroskooppia, ennen kuin jokainen suuri neliö on valmis, jotta katoaminen.

-Virheen syy on kumartaa kamera asennettuna. Siksi sinun on ladattava huolellisesti mikroskooppilevy.

Suositus

Jos jostain syystä havaitset epänormaalisuuden kameran arkistoinnissa, on suositeltavaa, että puristat kyseisen valmistelun, puhdista kamera ja koota uudelleen tyhjästä.

Ole erittäin varovainen puhdistaessasi kameraa välttääksesi hieronta naarmuuntumista. Toisaalta muista, että hematimetrinen lamel on herkkä ja hauras. Riittämätön manipulointi voi rikkoa sen.

Varmista ennen laskennan aloittamista, että solut ovat jakautuneet hyvin. Solujen epätasainen jakauma tapahtuu näytteen tai laimennuksen huonolla seoksella. Jos näin tapahtuu, kokoonpano on toistettava.

Tapa tietää, onko solut jakautunut hyvin kunkin suuren neliön tiliä, kunkin neliön laskemien solujen lukumäärän ei pitäisi olla liioiteltuna toisen ja toisen välillä.

-Jos valkosolujen määrä laskee yli 50.000 mm³ On suositeltavaa toistaa tili, mikä tekee suuremman laimennuksen.

-Jos se muuttaa laimennusta, kertolaskukerroin on laskettava uudelleen, koska tämä vaikuttaa kaavaan.

Viitteet

1. Cardona-Maya W, Berdugo J, Cadavid A. Spermapitoisuuden vertailu Maklerin kameran ja Neubauerin kameran avulla. Urol esp 2008; 32 (4): 443-445. Saatavana osoitteessa: Scielo.
2. Neubauer -kamera. (2018, 27. maaliskuuta). Wikipedia, ilmainen tietosanakirja. Kuulemispäivä: 04:10, 23. kesäkuuta 2019 ES: ltä.Wikipedia.org
3. Meneses a, rojas l, sifontes s. Vaihtoehtoisen laskentamenetelmän soveltaminen Neubauerin kammioon vaginalis -trichomonasin pitoisuuden määrittämiseksi. Rev. Cub Med Trop 2001; 53 (3): 180-8. Saatavana osoitteessa: ResearchGate.netto
4. Gómez-Pérez Roald E. Kokeilun analyysi. Rev. Venez. Endokrinoli. Metab.  2007; 5 (2): 19-20. Saatavana osoitteessa: ve.Scielo
5. Carabobon yliopiston bioanalyysikoulun käytännöllinen hematologinen opas. Venezuela.1998