Kulttuurimedia, toiminto, tyypit, valmistelu

Se kulttuurimedia Ne ovat erityisiä ravitsemusvalmisteita bakteeri- ja sienimikro -organismien palautumiseen, eristämiseen ja ylläpitämiseen. Nämä väliaineet voivat olla kiinteitä, nestemäisiä tai puoliksi.

Louis Pasteur osoitti ensimmäisenä, että keitetyn lihan paloissa valmistetussa liemessä se tarjosi siten, että bakteerit toistetaan suurella määrällä, liemen pilvistämiseen asti. Tässä mielessä Pasteur -lihaliemiä pidetään ensimmäisenä nestemäisenä viljelyalustana, jota käytettiin.

Valmistautumattomat viljelyväliaineet (kiinteät aineet ja nesteet). Lähde: Flickr

Sitten Robert Koch yhteistyökumppaneidensa Julius Richard Petrin ja Walter Hessen ansiosta ansiosta suuria ennakkoja. Ensimmäinen suunnitteli Petri -levyn, jota käytetään edelleen nykyään; Ja hänelle tapahtui toinen agar-veden gelatiinin korvaamiseksi kiinteiden viljelyvälineiden valmistelemiseksi, mikä oli erittäin merkityksellistä, koska jotkut mikro-organismit halvensivat hyytelöä.

Tällä hetkellä on olemassa monenlaisia ​​kulttuuriväliaineita eri tarkoituksiin, joten nämä luokitellaan niiden toiminnan mukaan: tärkeimpien ravitsemuksellisen viljelyn keinot, selektiivinen, ero, kuljetus, rikastuminen, laskenta, pesäkkeet, ylläpito ja ylläpito ja ylläpito ja ylläpito ja ylläpito ja ylläpito ja ylläpito ja ylläpito ja ylläpito ja ylläpito ja ylläpito ja ylläpito ja ylläpito ja ylläpito ja ylläpito ja ylläpito ja ylläpito ja ylläpito ja ylläpito ja ylläpito ja ylläpito ja ylläpito ja ylläpito ja ylläpito ja ylläpito ja ylläpito ja ylläpito ja ylläpito ja ylläpito ja ylläpito ja ylläpito ja ylläpito ja ylläpito ja ylläpito ja ylläpito ja ylläpito ja ylläpito ja ylläpito ja ylläpito ja ylläpito ja ylläpito ja ylläpito ja ylläpito ja ylläpito ja ylläpito ja ylläpito ja ylläpito ja ylläpito ja ylläpito ja ylläpito ja ylläpito ja ylläpito ja kunnossa herkkyyden todistamiseksi.

Jotkut viljelyväliaineet ovat erityisiä kemiallisten reaktioiden havaitsemiseksi, ja ne ovat erittäin hyödyllisiä kyseisen mikro -organismin tunnistamisessa. Heidän joukossaan ne voidaan mainita: Keskipitkä kigler, mio, lia, sitraatti, muun muassa.

[TOC]

Historia

Ensimmäisen kulttuuriväliaineen valmisti Louis Pasteur yrittäessään.

Hän valmisti liemin lihapalat ja havaitsi, että muutaman päivän kuluttua siitä, kun hän oli altistunut ilmalle, hän kääntyi hämäräksi ja liemessä oli huomattava määrä mikro -organismeja. Samanaikaisesti toinen liemi, jossa oli aikaisemmin keitetyt ja hermeettisesti suljettujen lihapalat, pysyi läpikuultavina päivinä kuluneina päivinä.

Tämä kiinnitti monien tutkijoiden huomion ja huomasi, että nämä mikro -organismit olivat vastuussa lihan hajoamisesta ja joidenkin sairauksien tuottamisen lisäksi.

Tästä syystä oli välttämätöntä luoda tapa toistaa nämä mikro -organismit laboratoriossa tutkiakseen niitä perusteellisemmin.

Tässä mielessä Robert Koch antoi korvaamattoman panoksen tiettyjen laboratoriotekniikoiden, etenkin bakteerien eristämiseen liittyvien, parantamisessa, kun hän esitteli kiinteän viljelyalustan käsitteen.

Aluksi hän käytti perunaviipaleita kiinteänä väliaineena, mutta lisäsi sitten gelatiinia lihaliemeihin parempia tuloksia. Oli kuitenkin aikoja, jolloin hyytelö sulatti ja siitä tuli nestemäinen sato. Nykyään tiedetään, että tämä tapahtuu, koska jotkut bakteerit kykenevät hydrolysoimaan gelatiinia.

Silloin ajatus käyttää agar-lisäystä, yhdistelmä, jota hänen vaimonsa käytti sakeuttamaan makeisiaan yhdelle hänen yhteistyökumppaneilleen.

Tämä alkeellisen kulttuurin väliaine on vähitellen hienostunut, kunnes saavutetaan tänään tunnetut kulttuuriedut.

Sävellys

Jokaisella väliaineella on erilainen koostumus, mutta on välttämätöntä, että se sisältää erityisiä ravintoaineita etsittävän mikro -organismin tyypin hyvään kehitykseen.

Se voi sisältää myös spesifisiä kemikaaleja, jotka auttavat paljastamaan metabolisen reitin, jolla on tietty kanta tai jotka todistivat tiettyjen entsyymien läsnäolon.

Toinen tärkeä elementti on iskunvaimennin aineiden käyttö. Nämä auttavat ylläpitämään median osmoottista tasapainoa sekä pH: ta.

Ne voivat sisältää myös hiilihydraatteja ja pH -indikaattoria lisätyn sokerin käymisen osoittamiseksi. Elatusaineen värinmuutos havaitaan, jos käymisellä syntyy happamoituminen.

Jotkut viljelyväliaineet sisältävät estäjäaineita. Käytetystä aineesta riippuen mikro -organismien kasvua rajoitetaan ja muiden suosimista.

Kulttuurimediatyypit

Viljelysvälineet luokitellaan erilaisten kriteerien mukaisesti. Nämä ovat: heidän johdonmukaisuuden, koostumuksensa ja toiminnan mukaan.

- Johdonmukaisuuden mukaan

Nesteet

Ne eivät sisällä agar -eagoa. Bakteeri- tai sienikasvu osoittaa liemen sameus, joka on alun perin läpikuultava.

Kiintoaine

Ne sisältävät välillä 1,5 -2% agar -agaria. Jähmettyneellä seoksella on pinta, joka vastustaa platinakahvan hienoa siirtymistä, ilman että se rikkoutuu.

Puolijalo

Ne sisältävät noin 0,5% agar -agarista, joten nesteen ja kiinteän aineen välinen välitila. Ihanteellinen tiedotusvälineissä, jotka näkevät liikkuvuuden. Niitä suositellaan myös kantojen säilyttämiseen, koska ne pitävät kosteutta pitkään.

Voi palvella sinua: Saltacionismi: Ominaisuudet, todisteet ja esimerkit

Kaksisuuntainen

Ne ovat keinoja, jotka on valmistettu siten, että on olemassa kiinteä faasi ja tällä nestemäinen väliaine. Laajasti veriviljelmiin.

- Sen koostumuksen mukaan

Luonnonkulttuuriaine

Ne ovat aineita, jotka on otettu suoraan luonnosta viljelemään bakteereja, antaen heille ympäristön lähinnä sitä, miten ne kehittyvät ekosysteemissä normaalisti. Esimerkki, maito, mehut, laimennettu veri, seerumi jne.

Synteettinen viljelyalusta

Ne ovat nykyään eniten käytettyjä, ne ovat kuivuneet keinot, jotka hankimme kaupallisissa taloissa ja joihin heidän kemiallinen koostumuksensa tunnetaan, koska ne on strategisesti suunniteltu eristämään tarkoitettujen mikro -organismien tyypin mukaan.

Puoli -asynteettinen kulttuuriväliaine

Se on synteettisen väliaineen yhdistelmä, johon lisätään luonnollinen elementti väliaineen rikastamiseksi.

Soluviljelmäväliaine

Ne ovat erityisiä keinoja viruksen viljelyyn, kuten nämä mikro -organismit eivät pysty selviytymään solujen ulkopuolella, niiden on sisällettävä kudosta tai eläviä soluja, eläimestä tai kasvista.

Esimerkki: solun apinan munuaiskasveja tai alkion munia.

- Sen hyödyllisyyden mukaan

Ravitseva, selektiivinen, differentiaali, kuljetus, rikastuminen, tunnistaminen, pesäkkeiden kvantifiointi, ylläpito- ja alttiuskokeet. Kuvataan myöhemmin.

Funktio

Kulttuuriväliaineen tyypistä riippumatta jokaisella on jotain yhteistä ja se on, että ne helpottavat tai edistävät tiettyjen mikro -organismien lisääntymistä. Ero on kunkin koostumuksessa, mikä on määräävä tekijä lopulliselle hyödyllisyydelle.

Jokainen nykyinen kulttuurimedia on strategisesti suunniteltu erityiseen toimintoon, jolle se on luotu, toisin sanoen kaikilla on perusta, joka ohjaa niiden erityistoimintojen ohjeita.

On huomattava, että viljelyväliaineen kerran kylvään on suoritettava lämpötila- ja happiolosuhteet, jotka sopivat bakteerien tai sienten tyyppiin, jotka haluat eristää.

Esimerkiksi, jos haluat eristää mesofiiliset anaerobiset bakteerit, veriagarit ja inkuboida anaerobioosin olosuhteissa (ilman happea) 37 ° C: ssa 48 tunnin ajan 48 tunnin ajan 48 tunnin ajan.

Nyt, jos tarvitaan sieniä, eristämiseen. Sitä inkubidaan aerobioosissa, huoneenlämpötilassa useita päiviä, koska jälkimmäiset ovat hitaasti kasvua.

Yksinkertainen ravitseva kulttuurimedia

Kuten nimi viittaa siihen, nämä viljelyväliaineet sisältävät ravitsemuksellisia aineita, kuten vitamiinia, aminohappoja, typpeä ja hiililähteitä, niiden joukossa ne voidaan mainita: lihauutetta tai hiivauutetta, maissitärkkelystä, haiman sulautuneista, peptoneista, glukoosista, mm.

Ne sisältävät myös muita komponentteja, jotka tarjoavat ympäristölle osmoottisen tasapainon, koska useimmat viljelykasvit vaativat pH: n lähellä 7,0. Nämä elementit voivat olla: natriumkloridi, dinatriumfosfaatti muun muassa.

Laimennus on tislattua vettä ja kiinteät väliaineet ovat agar-lisäyksiä.

Näiden viljelmän tarkoituksena on palauttaa tietyssä näytteessä oleva bakteeri- tai sienimikrobiota. Se ei syrjitä mikro -organismeja, koska se pystyy kasvattamaan suurta määrää bakteereja, sekä grampositiivisia että gram -negatiivisia, samoin kuin hiiva- ja myseeli -sieniä.

Niitä suositellaan kylvää näytteitä, jotka tulevat normaalisti steriilistä sivustoista. Ne eivät kuitenkaan palvele mikro -organismien vaatiessa.

Ne ovat hyödyllisiä myös kantojen ylläpitämisessä, kunhan ne eivät sisällä glukoosia.

Rikastuttava kulttuurimedia

Jos veri tai lämmitetty veri yksinkertaisiin ravitsemusväliaineisiin lisätään, niistä tulee rikastettuja väliaineita (veri- ja suklaa -agar).

Nämä keinot ovat erittäin hyödyllisiä normaalisti steriilien steriilejen näytteiden kannalta, pelastamaan heikkoja kantoja ja eristääkseen vaativia mikro -organismeja ravitsemuksellisesta näkökulmasta.

Valikoiva kulttuurimedia

Selektiivisiä viljelyväliaineita, jotka sisältävät välttämättömiä ravintoaineita tiettyjen kiinnostavien mikro -organismien kasvulle.

Inhibiittorien on tarkoitettu vähentämään kasvavien kantojen monimuotoisuutta, mikä suosii erityisen erityisen ryhmän kasvua, joka haluaa pelastaa.

Esimerkki: EC -liemi (erityinen kokonais- ja fekaalikoliformeille) tai Sabouraud -agarin antibiooteilla (spesifiset sienille).

Differentiaalikulttuuriväliaine

Differentiaaliset väliaineet sisältävät ravitsemuksellisia elementtejä, jotka ovat tarpeen tietyn mikro -organismien ryhmän kasvulle ja sisältävät myös aineita, jotka tiettyjen mikro -organismien läsnä ollessa metaboloituu tai hajotetaan.

Toisin sanoen ne tuottavat kemiallisia reaktioita, jotka tavalla tai toisella todistetaan viljelyalustassa.

Se voi palvella sinua: Photovyöhyke: Ominaisuudet, Flora Light, Eluna

Jotkut reaktiot alkalista tai happamassa väliainetta ja pH -indikaattorin läsnäolon ansiosta nämä muutokset voidaan osoittaa värillisellä käännöksellä keskellä ja pesäkkeellä.

Siksi suuressa joukossa bakteereja, jotka voivat kasvaa siinä väliaineessa, ne, jotka metaboloivat tai hajottavat aineen, ja ne, jotka eivät tee niin.

Esimerkiksi veriagar mahdollistaa bakteerien erottamisen, jotka tuottavat beeta -hemolyysiä (läpinäkyvää halo) niistä, jotka tuottavat alfa -hemolyysiä (vihertävän halo), ja niistä, jotka eivät tuota hemolyysiä.

Valikoiva ja erilainen media

Esimerkki tästä on MacConkey -agarissa. Se on selektiivinen, koska se sallii vain gram -negatiivisten bacillien kasvun; Ja se on erilainen, koska se voi erottaa laktoosin (fuksian väripesäkkeiden) fermentoivat bakteerit (vaalea tai väritön vaaleanpunainen väri).

Kuljetuskulttuuriväline

Kuten nimestä voi viitata, ne ovat keinoja, joita käytetään näytteiden kuljettamiseen, jotka on otettu enemmän tai vähemmän kaukaisessa paikassa laboratorioon, joka käsittelee näytettä. Kuljetusvälineet säilyttävät näytteen parhaissa olosuhteissa luotettavien tulosten suhteen.

Näillä viljelyväliaineilla on hyvin erityisiä ominaisuuksia, koska ne eivät voi ylittää ravintoaineita, koska läsnä oleva bakteeripopulaatio on edelleen elinkelpoinen, mutta lukumäärän kasvussa.

Ne ovat yleensä puoliksi hioisia väliaineita, jolloin näytteen hydratoidaan. Sitä ei kuitenkaan pidä hajauttaa näytteen lähettämiseksi mahdollisimman pian laboratorioon. Esimerkkejä kuljetusvälineistä: Medio Stuart, Cary Blair ja Amies.

Puoli ja rikastuskulttuuri

Nämä viljelyväliaineet ovat nestemäisiä. Niitä käytetään pelastamaan spesifisiä patogeenejä, joita milloin tahansa voi olla vähimmäisnäytteessä.

On myös hyödyllistä pelastaa patogeeninen kanta, joka voi olla heikko aikaisemman saadun hoidon vuoksi. Esimerkiksi: Peptonada -vesi, tioglykoliliem ja Selenito -liemi.

Näillä keinoilla on estävää aineita, jotka välttävät mukana olevan mikrobiotan kasvun, ja erityiset ravintoaineet, jotka suosivat kiinnostuksen kohteena olevan mikro -organismin kehitystä.

Viljelyväliaine tunnistamista varten 

Näissä väliaineissa on aineita, joita tietyillä bakteereilla voidaan metaboloida kemiallisesti, mikä tuottaa kemiallisia reaktioita, jotka osoittavat spesifisten entsyymien tai metabolisten reittien läsnäolon.

Siksi niitä käytetään biokemiallisina testeinä, jotka auttavat tunnistamaan genren ja tietyn kantoryhmän lajit. Esimerkki: Keskipitkä Kigler todistaa, jos mikro -organisismi kykenee käymään glukoosia ja laktoosia, jos se tuottaa vety- ja kaasusulfidia.

Tämä väliaine sisältää paljastavia aineita, jotka sallivat reaktion tarkkailun, kuten pH -indikaattorin ja rauta -ionit.

Tämä yksinkertainen testi voi erottaa kaksi suurta bakteerimikro -organismien ryhmää, kuten bakteerien bakteerit, joita kutsutaan bakteerien perheeseen, jota kutsutaan fermentoimiseksi.

Keinot laskea pesäkkeitä

Nämä ovat yksinkertaisia, ei -selektiivisiä keinoja, jotka palvelevat mikrobipopulaation kvantifiointia, kuten vakiotili. Tässä väliaineessa kasvavan mikro -organismin tyyppi riippuu vakiintuneista lämpötila- ja happiolosuhteista.

Viljelymedia herkkyystodistuksista

Tätä tarkoitusta varten standardoitu väliaine on Müeller Hinton -agar, tämä tarkoittaa ihanteellista arvioida eri antibioottien käyttäytymistä eristetyn patogeenisen mikro -organismin kanssa.

Se on erityisen hyödyllinen vähän vaativissa bakteereissa, vaikka sitä vaativat bakteerit vain, jos tätä täydennetään verellä.

Huoltovälineet huolto-

Nämä keinot on tarkoitettu toistamaan mikro -organismeja ja ylläpitää myös bakteerin tai sienen elinkelpoisuutta pidempään mahdollisessa muodossa ja myös niiden fysiologiset toiminnot säilytetään.

Tärkeä ominaisuus on, että tämäntyyppinen väliaine ei saisi sisältää glukoosia, koska vaikka se on elementti, joka tarjoaa nopeaa kasvua, sen käyminen tuottaa hapoja, jotka vähentävät mikro -organismin käyttöikää.

Joidenkin laboratorioiden on pidettävä tiettyjä mikro -organismeja elinkelpoisia käytettäväksi myöhemmin tutkimuksissa, sisäisessä valvonta- tai opetustarkoituksiin.

Valmistautuminen

Tällä hetkellä on monia tavaramerkkejä, jotka jakavat eri kulttuurimediaa. Tiedotusvälineet ovat lyofilisoidussa tai kuivuneessa muodossa, joka sisältyy hermeettisiin ja suojattuihin valopurkkeihin.

Jokainen väliaine tuo etiketin, joka määrittelee väliaineen nimen, sen komponentit, eränumero ja kuinka paljon punnitaan litran kulttuuriväliaineen valmistamiseksi.

Voi palvella sinua: prebioottinen evoluutio: missä se tapahtui ja mikä on tarpeen

Laimenneena käytetään tislattua vettä. Raskas määrä liukenee litrassa tislattua vettä, kunnes seos on homogenisoitu. Suurin osa väliaineista viedään autoklaaviin, 15 kiloa, 121 ° C: n lämpötilaan 15 minuutin ajan.

Nestemäiset väliaineet jakautuvat jo vastaaviin työputkiinsa, kun taas kiinteän väliaineen autoklaatio Erlenmeyer -pulloissa.

Jälkimmäinen päästi seisomaan, kunnes ne saavuttavat 55 ° C: n lämpötilan ja tarjoillaan Petrin levyillä laminaarivirtauskellon sisällä tai lähellä Bunsen -kevyempää. Niiden sallitaan jähmetty ja ne kääntyvät jääkaapissa.

Putkissa jakautuvat myös vankat viljelyväliaineet, jolloin itsensä voivat jähmettyä joko tacosissa (suora) tai huilun piikki (kalteva).

Ennen valmistetun viljelyalustan käyttämistä, olipa se kiinteä tai neste, sen on oltava karkaisu ennen näytteen kylvää.

Merkitys

Kulttuurivälineet ovat epäilemättä erittäin arvokas työkalu mikrobiologeille, koska ne mahdollistavat tarttuvan aineen palautumisen, joka tietyssä vaiheessa voi vaikuttaa yksilöön tai saastuttaa ruokaa, ympäristöä tai pintaa.

Tässä mielessä voidaan sanoa, että mikrobiologialla on erilaisia ​​aloja, muun muassa kliininen, teollisuus-, ympäristö-, elintarvikemikrobiologia, ja kaikissa viljelyvälineissä käytetään.

Kummassakin tapauksessa käytetty väliainetyyppi voi tietysti vaihdella prosessoidun näytteen tarpeiden ja tyypin mukaan. Mikro -organismiryhmä haki myös vaikutteita.

Patogeenisen mikro -organismin eristäminen tai pilaantumisen aiheuttaminen on välttämätöntä, jotta pystytään tekemään tehokkaan hoidon tai ottamaan käyttöön toimenpiteet, jotka auttavat poistamaan kyseisen epäpuhtauden.

Kliinisen mikrobiologian tapauksessa se ei ole vain tärkeä.

Tämä tutkimus, joka käyttää myös viljelyalusta, sallii sanoa, mikä antimikrobinen on herkkä ja joka on resistentti tai pähkinänkuoressa, jota voidaan käyttää hoidona ja jota ei.

Siksi kulttuurivälineitä ei voida puuttua mikrobiologian laboratoriosta riippumatta alueesta.

Lopuksi voidaan sanoa, että kulttuuriväliat ovat antaneet meille mahdollisuuden tutkia eri näkökohtia, sekä bakteereja että sieniä.

Viljelyalustan laadunvalvonta

Kulttuurivälineiden valmistelua ja käyttöä ei tule tehdä kevyesti. Jokaisessa laboratoriossa on oltava asunto, joka soveltaa medialle laadunvalvontaprotokollia, joka kerta kun uudet erät valmistetaan, ja takaa siten, että ne ovat oikein valmistettuja, steriilejä ja toiminnallisia.

Niiden steriiliyden arvioimiseksi jokaisen erän yksi tai kaksi keinoa otetaan satunnaisesti ja inkuboitu 37 ° C: ssa useita päiviä (kasvua ei pitäisi olla). Sen toiminnan ATCC -vertailukantojen tarkistaminen (American Type Culture Collection) on asianmukaisesti viljelty ja elinkelpoinen.

Viljelymedian hävittäminen

Kulttuurivälineiden käytön jälkeen ne on hylättävä siten, että se ei saastuta ympäristöä.

Tätä varten materiaali steriloidaan autoklaavessa ennen kuin se hylätään. Myöhemmin lasitavaroiden materiaali poistetaan. Jälkimmäinen pesee, kuivataan, steriloidaan ja tallennetaan myöhempää käyttöä varten. Kertakäyttöisten levyjen käytön tapauksessa nämä steriloidaan ja myöhemmin hylätään erityisissä laukkuissa.

Viitteet

1. Borregon mikrobiologia leimoilla VIII. Robert Koch: Sinnikkön voitto (i). SEM 2018, 117 (1): 1-18 Malagan yliopisto. Saatavana: päivät.Uab.Kissa/
2. Volcy C. Kochin postulaattien synty ja evoluutio ja niiden suhde fytopatologiaan. Arvostelu Kolumb. 2008; 26 (1): 107-15. Saatavana osoitteessa: Scielo.org.CO/ CO/
3. Burguet Lago Nancy, Castillo Abraham Lourdes. Luokiteltujen tuotantoalueiden ympäristön seurannassa käytettyjen viljelyvälineiden laadunvalvonta. Kuubalainen Rev Hig Epidemiol 2013; 51 (2): 155-160. Saatavana osoitteessa: Scielo.
4. Bonilla M, Pajares S, Vigueras J, Sigala J, Le Borgne S. Mikrobiologiakäytäntöjen didaktinen materiaalikäsikirja. Metropolitan autonominen yliopisto. Luonnontieteet ja tekniikkaosasto. Cuajimalpa -yksikkö. 2016. Saatavana osoitteessa: CUA.Ura.MX/
5. Carbajal a. Soluluojaviljelmäväliaine: Katsaus. Labome laboratorioiden maailma. Pittsburghin yliopiston lääketieteellinen keskus, Yhdysvallat. 2013 saatavana osoitteessa: ES/
6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologinen diagnoosi. 5. ed. Pan -American toimitus.-Lla. Argentiina.
7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott -mikrobiologinen diagnoosi. 12 Ed. Pan -American toimitus.-Lla. Argentiina.