Koagulaasin testisäätiö, menettely ja käyttö

Se Koagulaasitesti Se on laboratoriotekniikka, jota käytetään korostamaan koagulaasientsyymin läsnäoloa. Tällä entsyymillä on kaagulaarisen plasman ominaisuus. Loeb vuonna 1903 kuvasi ensimmäisenä tätä entsyymiä.

Tämä testi suoritetaan grampositiivisille kookospähkinöille, positiiviselle katalaasille, mikä mahdollistaa kantojen Staphylococcus aureus Muista stafylokokkeista, koska hän on ainoa kliinisen merkityksen mikro -organisismi.

Molemmat kuvat paljastavat positiivisen koagulaasitestin. Lähde: Vasen kuva: Philippinjl [CC BY-Sa 3.0 (http: // creativecommons.Org/lisenssit/by-SA/3.0/]]. Oikea kuva: Kirjailijan MSC: n ottama kuva. Marielsa gil.

Tässä mielessä Staphylococaee -perheen jäseniä, jotka antavat tämän negatiivisen testin, kutsutaan usein Staphylococcus -koagulaasin negatiiviseksi.

On joitain kantoja, jotka ovat erilaisia S. aureus  jotka voivat tuottaa koagulaasia, kuten Staphylococcus schleiferi spp coagulans, s. S. S. Intermedius ja s. Delphini.

Kolme ensimmäistä on kuitenkin kliinistä merkitystä eläinlääketieteellisellä tasolla, ja niitä voidaan harvoin löytää ihmisen infektioiden syy -aineena, kun taas S. Delphini Sitä löytyy vain meriympäristöistä.

Lisäksi ne eroavat helposti, koska S. Hyycus ja S. Intermedius He eivät käy mannitolia ja S. Schleiferi spp coagulans ei käytä mallastoa eikä trehalosaa S. aureus Kyllä käy nämä hiilihydraatit.

Kaagulaasientsyymin läsnäolo on liitetty kantojen virulenssiin.  Tämä teoria on kuitenkin pudonnut, kun otetaan huomioon tosiasia, että muita virulentteja negatiivisia koagulaasilajeja havaitaan kykenevän tuottamaan tärkeitä infektioita.

[TOC]

Perusta

Staphylococcus aureus Se tuottaa kahta tyyppiä koagulaasia, toinen, joka pysyy kytkettynä soluseinämään, jota kutsutaan myös agglutinaatiokertoimeksi tai reaktiiviseksi koagulaasin (FRC) ja solunulkoiseksi, joka vapautuu nestemäisissä viljelykasveissa. Siksi heitä kutsutaan yhdistyneeksi koagulaasiksi ja vapaaksi koagulaasiksi.

Koagulaasientsyymi velkaa nimensä tuottamalle toiminnalle. Tällä on kyky muuttaa fibrinogeeni fibriiniksi, mikä luo ilmeisen hyytymän, kun se on plasmassa, ts. Tämä entsyymi simuloi hyytymisvesiputouksen trombiiniaktiivisuutta.

Itse asiassa yksi hyväksyttyimmistä teorioista on, että United -koagulaasi reagoi vapaan koagulaasin kanssa aktivoidakseen hyytymiskertoimet. Tämä aktivointi tuottaa aineen, joka toimii samanlaisena kuin protrombiini, luomalla yhdisteen trombiinitoiminnolla.

Voi palvella sinua: Kilpirauhasen profiili: Hormonin toiminta, merkitys, kvantifiointi

Ero normaalin hyytymisvesiputouksen kanssa on, että tämä reaktio ei tarvitse kalsiumin läsnäoloa, eikä hepariini vaikuta siihen siihen.

Kaagulaasitestin suorittamiseksi riittää kohtaamaan tuoretta stafylokokin satoa edullisesti kanin plasmalla ja tarkkailemaan siten muodostumista tai ei hyytymästä.

United -koagulaasin ja yhtenäisen ja vapaan koagulaasin havaitsemiseksi on erityisiä tekniikoita samanaikaisesti.

Joitain kantoja S. aureus Ne antavat nopeamman positiivisen tuloksen kuin muut. Hilpon muodostumisen nopeus on suoraan verrannollinen nykyiseen koagulaasipitoisuuteen.

Kaagulaasitestin tekniikka liukussa havaitsee United Coagulat.

Menettely

-Koagulaasitesti pidikkeessä

Materiaalit

-Puhdas liukuarkki

-Kanin plasma on mieluiten ihmisen tai hevosplasmaa myös käyttää. Plasma voidaan hankkia kaupallisesti lyofilisoida ja rekonstituoitua, kun sitä käytetään tai sitä voidaan käyttää tuoreena (äskettäin otettu). Toinen elinkelpoinen vaihtoehto on fibrinogeenin käyttö.

-Suolaliuos (0,85%) steriili (SSF).

Tuoreen plasman hankkiminen

Uute ihmisen tai eläimen laskimoveren. Mitä tahansa seuraavista antikoagulantteista voidaan käyttää: EDTA, kalsiumoksalaatti, hepariini tai natriumsitraatti. Sekoita hyvin ja sentrifugit. Poista supernatantti (plasma), ilman punasoluja ja talleta steriiliin putkeen.

Plasmaerottelu. Lähde: Kirjailijan ottama kuva: MSC. Marielsa gil.

Lyofilisoitu plasma

Reconstitute, kuten Commercial Kit -pullo on määritelty.

Tuore fibrinogeeni

Sekoita plasma sitraattista plasmasta tyydyttyneen natriumkloridin liuoksen kanssa. Antaa.

Hävitä supernatantti, rekonstruoi sakka jopa 5 -kertaiseen tilavuuteen steriilillä tislatulla vedellä. Lisää 5 hepariiniyksikköä jokaiselle ml: lle fibrinogeenia. Tallentaa.

Tekniikka

Liukua sijoitetaan tippa suolaliuosta ja tippa plasmaa. Ota platinakahva 1 tai 2 puhdasta mikro -organismin pesäkkeitä.

Sekoita bakteerikuorma plasman pudotukseen ja toista toiminta SSF -pudotuksessa. Huomaa tulokset heti. Positiivinen tulos on se, jossa makroskooppisen agglutinoidun (valkoisen sakan) muodostuminen havaitaan yhden minuutin kuluttua pisarasta plasmalla.

Se voi palvella sinua: Ekofysiologia: Mitä tutkimuksia ja sovelluksia eläimissä ja vihanneksissa

SSF: n pudotus toimii negatiivisena kontrollina. Jos havaitaan agglutinaatiota SSF. Tässä tapauksessa se on vahvistettava putkikokeen kanssa.

On myös suositeltavaa asentaa positiivinen kontrolli tunnetulla venymisellä S. aureus.   

Tulkinta

Agglutinaatio 5 - 20 SEG: n sisällä (vahva positiivinen testi).

Muuttuva agglutinaatio 20 sekunnin ja minuutin välillä (positiivinen viivästynyt testi).

Tietyn asteen agglutinaatio minuutin kuluttua (epäilyttävä testi). On suositeltavaa toistaa testi tai vahvistaa putkimenetelmä.

Ei ole agglutinaatiota (negatiivinen testi).

Tulos SSF: n kanssa. Sen on aina annettava negatiivinen, jos testin tulos on automaattisesti.

-Putken koagulaasitesti

Materiaalit

-Steriili koeputki

-Plasma

-Maria -kylpy 37 ° C: ssa.

Tekniikka

Mittaa steriili 0,5 ml plasman pipettiä ja aseta se 12 x 75 -koeputkeen. Lataa platinakahva 2 - 4 puhdasta pesäkkeellä tutkimaan kiinteästä satosta 18 - 24 tuntia ja erilaisten sen plasmassa varovasti, sekoita ja inkuboidaan 37 ° C: ssa 4 tunnin ajan.

Tutki putki ensimmäisen tunnin kuluttua ravistamatta sitä, vain kallistettu varovasti. Jos hyytymistä ei vielä havaita, voit jatkaa 30 minuutin välein 4 tunnin suorittamista. Jos 4 tunnin kuluttua se on edelleen negatiivinen, se voidaan jättää 24 tuntiin, mutta huoneenlämpötilassa. Tarkkaile ja ilmoita tulosta.

Kokemuksen perusteella jotkut mikrobiologit suosittelevat 500 ui: n käyttämistä bakteerisuspensiota 18 -tunnin satosta nestemäisessä väliaineessa testin suorittamiseksi.

Ilmeisesti se tarjoaa nopeampia ja luotettavampia tuloksia kuin silloin, kun kiinteiden väliaineiden pesäkkeet ovat emulgoituja, varsinkin jos veripankista saatu ihmisen plasma on käytetty.

Liemen kantojen käyttö auttaa vähentämään ihmisen anti-stafylokokkien vasta-aineiden mahdollista läsnäoloa plasmassa, jotka voivat estää koagulaasin vaikutusta.

Tulkinta

Jos hyytymät, joka kattaa kaiken nesteen (täydellinen hyytyminen) tai hyytymät.

Voi palvella sinua: biologian haarat ja mitä he opiskelevat

Jos sitä ei ole muodostettu, eli suspensio on homogeeninen, testi on negatiivinen.

-Koagulaasitesti fibrinogeenin avulla

Fibrinogeenia käytetään aivan kuten plasma ja palvelee sekä pidike- ja putkikokeita varten. Jatka plasman suhteen ja tulkitse samalla tavalla.

Käyttää

Sitä käytetään erottamaan Staphylococcus aureus negatiiviset koagulaasistafylokokit.

QA

On tuoreita viljelykasveja S. aureus Käytettävä positiivisena kontrollina. Sinulla voi olla myös kanta S. epidermidis negatiivisena kontrollina.

Rajoitukset

-Positiivista testiä ei pidä jättää inkubaatioon 24 tunnin ajan, kuten S. aureus tuottaa fibrinolisiini, joka liukenee hyytymään.

-Luotettavaa testiä varten tulisi käyttää tuoretta tai vasta rekonstituoitua plasmaa, samoin kuin on tärkeää käyttää tuoreita bakteerikasveja (18–24 tuntia). Tämä välttää vääriä negatiivisia.

-Testi on suoritettava yhdessä negatiivisen kontrollin ja positiivisen kanssa.

-Jotkut kiinteät väliaineet voivat häiritä koagulaasitestiä. Sitä ei suositella.

-Jos käytetään sitraattia plasmaa, suositellaan sijoittamaan 5 hepariiniyksikköä ml / plasmaa väärien positiivisten välttämiseksi. Tämä johtuu siitä, että jotkut erilaiset mikro -organismit S. aureus Ne voivat hajottaa sitraatin ja tehdä plasman hyytymistä. Tässä tapauksessa on suositeltavaa tehdä gramma ja katalaasitesti.

-Putkikokeessa on tärkeää seurata reaktiota 30 minuutin välein, koska on kantoja S. aureus jotka tuottavat korkeat fibrinolisiinen pitoisuudet ja laimentavat vasta muodostetun hyytymän. Vältä vääriä negatiivisia.

-Kun testiä seurataan, putkea on vältettävä äkillisesti, tämä voi tuhota hyytymän muodostumisen alkamisen.

Viitteet

1. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologinen diagnoosi. 5. ed. Pan -American toimitus.-Lla. Argentiina.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott -mikrobiologinen diagnoosi. 12 Ed. Pan -American toimitus.-Lla. Argentiina.
3. Mac Faddin J. (2003). Biokemialliset testit kliinisen merkityksen bakteerien tunnistamiseksi. 3. ed. Pan -american toimitus. Buenos Aires. Argentiina.
4. Pro-laboratoriot. Kanin koaguloiva plasma. Saatavana osoitteessa: Pro-lab.com
5. "Koagulaasi." Wikipedia, ilmainen tietosanakirja. Helmikuu 2019, 04:23 UTC. ABR 2019, 15:50 Wikipedia.org.