Voges-Proskauer testaa mikä on, perusta, valmistelu, käyttää

Hän Voges-Proskauer-testi Se on biokemiallinen testi, jota käytetään Enterobacteriaceae -perheelle kuuluvien bakteerien tunnistamiseen. Erityisesti on hyödyllistä kantojen erottamiseksi Escherichia coli - Klebsiella ja Enterobacter, muun muassa.

Testi suoritetaan nestemäisessä viljelyalustassa, jota kutsutaan punaiseksi metyyli-voges Proskaueriksi, tunnetaan paremmin lyhenteellä RM/VP. Tämä väliaine koostuu puskuroituneesta polypeptonista, glukoosista, dipotassumfosfaatista ja tislatusta vedestä.

Metilo-Voges Proskauer (RM/ VP)/ positiivinen ja negatiivinen VP-testi. Lähde: Kuva, jonka on ottanut MSC -kirjoittaja. Marielsa Gil/ Sudipta.Marraskuu 15 [cc by-Sa 3.0 (https: // creativecommons.Org/lisenssit/by-SA/3.0)], Wikimedia Commons

Virta RM/VP -väliaine on Clark and Lubs -väliaineen modifikaatio, joka alun perin sisälsi vähemmän pitoisuutta peptonien ja glukoosin pitoisuuksia. Siksi vety-ionia oli vähemmän, jota tarvitaan Voges-Poskauerin positiiviseen reaktioon.

Testi perustuu butyylén-glykolisen reitin glukoosin käyttämisen mikro-organismin kapasiteettiin ja muodostaa neutraalin lopputuotteen nimeltä asetoiini hapen läsnä ollessa ja emäksinen pH.

RM/VP-väliaineessa sen lisäksi, että pystyt paljastamaan Voges-Poskauer-testin, voit myös paljastaa Metilian Red Test.

Perusta

Voges-Poskauer-testin perusta

Keskellä olevat pluripeptonit tarjoavat välttämättömät ravitsemukselliset vaatimukset bakteerien kasvulle. Glukoosi puolestaan ​​on pääyhdiste. Monilla bakteereilla on kyky metaboloida glukoosia ja muodostaa pyruvihapoa.

Pyruvihappo on keskipiste glukoosin aineenvaihdunnassa ja sieltä jokainen mikro -organismi voi kulkea erilaisia ​​reittejä. Jotkut muodostavat sekoitettuja happoja, kuten maitohappoa, etikkahappoa, muurahaishappoa ja suppinihappoa, ja toiset muodostavat neutraaleja tuotteita, kuten 2,3-butnediali.

Se voi palvella sinua: kasvisto ja eläimistö Meksikosta

Voges-Proskauer-testi paljastaa asetyylimetyylikarbinolin (asetoiini) muodostamisen mikro-organismin kapasiteetin, joka on 2,3-butnediolin välituote aerobioosiolosuhteissa.

Asetoiini vähenee ja 2,3-butnediolin muoto, mutta tämä reaktio on palautuva, joten jos 2,3-butnedioli hapettuu. Siksi happi on välttämätöntä.

Dipotassiumfosfaatti on puskuri, joka tyyntää seoksen pH: een 6,9 ± 0,2.

Säätiö todisteiden ja tulkinnan kehittämiselle

Reaktion osoittamiseksi ilmoituksen on suoritettava käyttämällä kahta reagenssia (Barrit Reagents), joka tunnetaan nimellä Voges A ja Voges B.

Voges A on 5% a-naftoliliuos, ja Voges B on 40% kaliumhydroksidin valmistus. Jos kaliumhydroksidia ei ole saatavana, se voidaan korvata 40% natriumhydroksidilla.

Α-naftoli on katalyytti, joka lisää reaktion värin voimakkuutta, mikä tekee herkimmän testin. Α-naftoli on aina lisättävä ensin, sekoittaen putkea siten, että väliaine tulee kosketukseen hapen kanssa. Tällä tavoin nykyinen asetoiini hapetetaan diasetyyliin ja 2,3-butioli hapetetaan asetoiinin muodostamiseksi, siirtämällä se diasetyyliin.

Näin α-naftol liittyy diasetyyliin, joka puolestaan ​​on liittynyt arginiinin aminohapossa olevaan guanidiinin ytimeen, jälkimmäiset monipertonit.

Kalium- tai natriumhydroksidi on puolestaan ​​vastuussa CO: n imeytymisestä₂ Ja reagoida peptonien kanssa. Tämä reaktio on peräisin vaaleanpunaisen suolamonin värin muodostumisesta, selvästi näkyvää putken sekoittamisen jälkeen erittäin hyvin.

Voi palvella sinua: Kudoksen organisaation taso: Ominaisuudet ja esimerkit

Värityksen esiintymiseksi heti, diasetyylin, peptonin ja a-naftolin määrät on sekoitettava. Jos näin ei tapahdu, putken annetaan levätä 15 minuuttia ennen tulkintaa.

Testi on yleensä positiivinen 2–5 minuutin kuluttua, kun näet heikon vaaleanpunaisen värin. Jos se jätetään levossa 30 minuutin ajan 1 tunnissa, värin voimakkuus on maksimi (voimakas punainen).

Negatiivinen testi käy ilmi, kun liemi on keltainen. Yhden tunnin kuluttua, jos testi on negatiivinen, kaliumhydroksidin reaktion kuparinen värituote a-naftolissa voidaan muodostaa.

Valmistautuminen

Keskimmäinen RM/VP

Punnitse 17 g dehydratoitua viljelmää ja liukene litraan tislattua vettä. Anna seistä 5 minuuttia. Kuumenna kiehumiseen liukenemiseksi kokonaan. Tarjoile 3-4 ml putkissa ja steriloi autoklaavissa 121 ° C: ssa 15 minuutin ajan.

Dehydratoitu viljelyalusta on beige ja valmistettu väliaine on kevyt keltainen.

Väliaineen lopullinen pH on 6,9 ± 0,2.

Voges Reagenssi a

Punnitse 5 g a-naftolia ja liukene 50 ml: aan etyylialkoholia (absoluuttinen). Myöhemmin lisäämällä etyylialkoholia jopa Enrrasaria 100 ml: n kohdalla.

Voges Reagenssi B

Punnitse 40 g kaliumhydroksidia ja liukene 50 ml: aan tislattua vettä dekantterilasiin. Lasi on asetettava kylmään vesihauteeseen lämpötilan hallitsemiseksi, koska valmistuksen liuottamisen aikana se nousee lämpötilan voimakkaasti.

Kun liuos on kylmä, se siirretään hienonnettuun palloon ja huuhtelee 100 ml: lla tislatulla vedellä.

Se voi palvella sinua: veriagar

Voges-Proskauer-testimenetelmä

Voges-Poskauer-testin suorittamiseksi RM/VP-liemi on inokuloinut tutkitun mikro-organismin kanssa puhtaasta satosta 18-24 tuntia.

Inokulumin ei pitäisi olla kovin tiheää. 35-37 ° C on inkubaa 24-48 tuntia, vaikka inkubointi useita päiviä on joskus välttämätöntä. Cowan ja Steel uskovat, että viisi päivää on minimi inkubaatioaika, joka on tarpeen kaikkien Voges-Poskauer (VP) -positiivisten lajien havaitsemiseksi Enterobacteere-perheen havaitsemiseksi.

Testi paljastui

Erota 1 ml: n alikvootti putkessa ja tee kehitys seuraavasti: Aseta 12 tippaa (0,6 ml) Voges A: n ja 4 tippaa (0,2 ml) Voges B: stä. Sekoita ilmaan ja anna seistä 5 - 10 minuuttia ennen tulkintaa. Jos testi on edelleen negatiivinen, anna seistä ja tarkkaile putkea 30 minuutin - 1 tunnin kuluttua.

Vaaleanpunaisen punaisen värin ulkonäkö osoittaa, että Voges-Poskauer-reaktio on positiivinen. Jos väliaine pysyy keltaisena, reaktio on negatiivinen.

Ilmoitettujen paljastamisen lisääminen ilmoitetussa järjestyksessä on välttämätöntä väärien negatiivisten välttämiseksi.

Käyttää

Voges-Poskauer-testi on hyödyllinen kantojen erottamisessa JA. koli jotka ovat muun muassa Klebsiella -tyylilajien, Enterobacter, Serratian negatiivinen VP, jotka ovat positiivisia VP: tä.

Lähde: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologinen diagnoosi. 5. ed. Pan -American toimitus.-Lla. Argentiina.

QA

Valmistetun väliaineen laadun testaamiseksi voit käyttää säätimiä, mukaan lukien Escherichia coli ATCC 25922, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Proteus mirabilis ATCC 43071, Salmonella typhimurium ja Enterobacter -viemäri ATCC 13047.

Odotetut tulokset ovat positiivisia Voges-Poskauer-reaktioita vain K -k -. pneumoniae ja JA. Cloacae. Loput antavat negatiivisia reaktioita.

Viitteet

1. Britannia Laboratories. MR-VP: n keskiarvo. Saatavana osoitteessa: www.Britanialab.com