Kinyounin värjäys

Kryptosporidium parvum, joka on värjätty Kinyounin värjäyksellä. Lähde: Punlop AnusonPornperm, Wiikimedia Commons

Mikä on Kinyounin värjäys?

Se Kinyounin värjäys Se on väritekniikka, jota käytetään bakteerien ja happojen alkoholiresistenttien loisten värjäytymiseen. Hän syntyi Ziehl-Neelsenin värityksen muokkaamisesta. Molemmat tekniikat tulkitaan samalla tavalla, mutta ne eroavat kahdesta elementistä: pääreagenssin valmistelussa ja jossa Kinyoun -tekniikka ei käytä lämpöä.

Tästä syystä se tunnetaan myös nimellä Ziehl-Neelsen kylmässä muokattuna tai Kinyounin kylmävärjäys. On osoitettu värille Mycobacterium tuberkuloosi, Leprae Mycobacterium, Epätyypilliset mykobakteerit, Nocardias sp, Cryptosporidium Parvum, Cryptosporidium meleagridis, Cryptosporidium felis, Cryptosporidium Muris ja Syklorparras cayetanensis.

On syytä huomata, että Nocardias Ne ovat värjätty heikosti tämän tekniikan kanssa, koska ne ovat osittain happamaa alkoholia, joten tässä genrissä menetelmää muokkaa.

Kinyounin tekniikka puolestaan ​​on yhdistetty trikromiseen tekniikkaan, jonka Didier on muokattu Coccidiosin havaitsemiseksi (Cryptosporidium parvum ja Isospora belli) ja mikrosporidary -itiöt (Enterosytozoon bieneusi ja Enchelitozoon intestibinis-A.

Perusta

Tärkein värjäytymisreagenssi on karbolfucsiini tai fenicada fuchsiini, jolla on ominaisuus liittyä ritarin soluseinän sisällä oleviin karbolihappoihin, runsaasti mykobakteerien lipidejä (mykolihappoja) ja tiettyjä loisia.

Hapon dekolunantti ei torjuta tätä unionia, joten mikro -organismit määritellään resistentteiksi alkoholihapoiksi.

Toisin kuin Ziehl-Neelsen-tekniikka-joka kiinnittää väriaineen lämmön läpi, Kinyoun-tekniikassa tämä vaihe ei ole välttämätön, koska valmistettu Fenicada Fuchsiin-liuos sisältää korkean fenolipitoisuuden.

Se voi palvella sinua: Salmonella-Shigella-agar

Fenoli liuottaa soluseinämän lipidimateriaalin, joka mahdollistaa Carbolfucsin -väriaineen pääsyn. Väriaineen tunkeutumisen jälkeen se on kiinnitetty huolimatta alkoholia happea.

Tällä tavoin resistentit alkoholihappojen mikro -organismit ottavat ominaisen punaisen värin, kun taas kaikki, mikä ei ole happama alkoholi, on värjätty ja värjätty sininen.

Tekniikka

Materiaalit

• Modifioidut fuchsiini.
• Alkoholihammas.
• Metyleenisininen.

Kinyoun Phoeened Fuchsinan valmistelu

• Perusfuchsina: 4 gr.
• Fenoli: 8 ml.
• Alkoholi (95%): 20 ml.
• Tislattu vesi: 100 ml.

Alkoholin perusfuchsiini tulisi hitaasti liuentaa, sekoittaa jatkuvasti. Seuraavaksi kiteytynyt fenoli sulaa kylpyhuoneessa 56 ° C: ssa. Kun liuennut, 8 ml lisätään aiemmin valmistettuun fuchsiiniliuokseen.

Alkoholihapon valmistus

• Konsentroidut suolahappo: 3 ml.
• Etanoli (95%): 97 ml.

Sinun on mitattava, liitettävä ja sekoitettava.

Metyleeninsininen kontrastiväriaineen valmistus

• Metyleeninsininen: 0.3 g.
• Tislattu vesi: 100 ml.

Se painaa ja liukenee.

Kinyounin värjäystekniikka

• Valmistele näytteestä suoraan näytteestä, joka voi olla yskö, keuhkojen neste, virtsan sedimentti, aivo -selkäydinneste tai uloste tai uloste tai ulostusten suspensio, joka on saatu väliaineissa kehitettyistä puhtaista pesäkkeistä.
• Kiinnitä levitys lämmöllä.
• Aseta levitys värisiltaan ja peitä Kinyounin Fenicada Fuchsiin -reagenssi. Anna seistä 3 tai 5 minuuttia.
• Pese tislatulla vedellä.
• Koristele hapan alkoholilla 3 minuutin ajan ja pese uudelleen tislatulla vedellä.
• Koristele uudelleen happomalla alkoholilla 1 tai 2 minuuttia, kunnes se on enemmän väriä.
• Pese tislatulla vedellä ja anna valua, asettamalla liuku pystysuoraan asentoon.
• Peitä valmiste metyleenisillä ja jätä 4 minuutiksi.
• Pese tislatulla vedellä ja anna ilman kuivua.
• Tutki 40x ja sitten 100x.

Voi palvella sinua: Tyhjennä kenttämikroskooppi: Ominaisuudet, osat, toiminnot

Jos haluat parantaa ja kiihdyttää resistenttien alkoholihappojen mikro -organismien värjäystä, lisätään 1 tippa kosteuttavaa ainetta (kuten sammakko nro 7) 30 tai 40 ml: n fuchsiinista Kinyounista.

Jotkut laboratoriot muuttavat sinistä metyleenin kontrastiväriainetta kirkkaanvihreän tai pikarihappo. Ensimmäinen antaa vihreän värin taustalle ja toinen tuottaa keltaisen värin.

Erityinen Kinyoun -tekniikka Nocardias

Sukupuolibakteerien värjäytymisen parantamiseksi Nocardia Kinyounin värjäytymistä käytetään. Tekniikka on seuraava:

• Peitä sade Fenicada Fuchsina Kinyounista 3 minuutin ajan.
• Pese tislatulla vedellä.
• Välitä lyhyesti 3%: lla valmistettua alkoholia, kunnes se on enemmän väriä.
• Pese uudelleen tislatulla vedellä.
• Peitä valmiste metyleenisinisellä ja jätä toimi 30 sekuntia.
• Pese tislatulla vedellä ja anna ilman kuivua.

Didier modifioi fenikoituneiden ja trikromisten fuchsinan yhdistetty tekniikka

Tätä tekniikkaa suositellaan jakkaranäytteiden analysoimiseksi koccidios- ja itiöiden etsimiseksi Mikrosporidium SP samaan aikaan. Seuraava menettely on seuraava:

• Peitä sade Fenicada Fuchsina Kinyounista 10 minuutin ajan.
• Poista väriaine ja pese tislatulla vedellä.
• Koristele 30 sekunnin ajan suolahappo -alkoholilla.
• Pese uudelleen tislatulla vedellä.
• Peitä sade trikromisella liuoksella 30 minuutin ajan 37 ° C: ssa.
• Pese tislatulla vedellä.
• Koristele 10 sekunnin ajan etikkahappohappo -alkoholilla.
• Pese haju 30 sekunnin ajan käyttämällä 95 -prosenttista etanolia.

QA

Positiivisena kontrollina sadetta valmistetaan kantojen kanssa Mycobacterium tuberkuloosi Ja ne on värjätty reagensseilla, jotka on valmis varmistamaan, että bakteerit ottavat oikean värin (punainen fucsia).

Se voi palvella sinua: gametogeneesi

Negatiivisia kontrolleja voidaan käyttää myös valmistelemalla millä tahansa venymisellä, joka ei ole resistentti alkoholihappo, tarkistaen siten, että koko näyte ottaa kontrastin värin.

Kinyoun-tekniikka verrattuna Ziehl-Neelsen-tekniikkaan

Kinyounin tekniikka on yksinkertaisempi, koska hän eliminoi lämmityksen kulku, mutta sen tärkein etu on, että se välttää höyryjen päästöjä, erittäin myrkyllisiä ja aiheuttaen pitkäaikaisen syövän. Siksi Kinyounin värjäys on turvallisempaa värjäytymisen suorittamisesta vastaavalle henkilöstölle.

On tärkeää ottaa huomioon.

Haittojen suhteen negatiivinen levitys ei välttämättä tarkoita, että mikro -organismia ei ole. Lisäksi solujen detrituksen läsnäolo voi aiheuttaa vääriä positiivisia, mikä aiheuttaa sekaannusta diagnoosissa.

Viite

1. Käytetty kliininen kemia. BK Kinyoun -sarja. Cromakitit toipui.On.
2. Orozco-Rrico, M. Kinyoun -värjäys ja kaksi koccidiota HIV: ssä. MD Medical Magazine. 
3. Forbes, b., Sahm, D., Weissfeld, a. Bailey & Scott -mikrobiologinen diagnoosi. Pan -American toimitus.-Lla.