May Grünwald-Giemsa tahra

Krooninen myeloidileukemianäyte, jossa värjäys May Grünwald-Giemsa. Lähde: Paulo Henrique Orlandi Mourao, CC BY-SA 3.0, Wikimedia Commons

Mikä on Grünwald-Giemsa värjäys?

Se May Grünwald-Giemsa tahra, o Pappenheim, on differentiaalinen väritystekniikka, joka sekoittaa reagenssit Giemsa ja voi Grünwald. Sitä käytetään normaalien ja epänormaalien verisolujen erilaistumiseen perifeerisessä verenkierroksessa ja luuytimessä, samoin kuin histologisten leikkausten ja sytologisten näytteiden värjäytymiseen.

Molemmat reagenssit -Giemsa ja May Grünwald- on johdettu Romanowsky -värjäyksestä, tekniikasta, joka perustuu happo- ja emäksisten väriaineiden yhdistelmään.

Giemsa paransi tekniikkaa stabiloimalla eosiinin, metyleenisinisen ja sen johdannaisten seosta glyserolilla. Sen sijaan May Grünwald käytti eosiinia ja metyleeninsinistä käyttämällä metanolia liuottimena. Tämä strateginen yhdistelmä on antanut erinomaisia ​​tuloksia.

Vaikka solujen morfologian havainnointi toimii samanlaisena kuin Giemsa ja Wrightin värit, tämä tekniikka parantaa edellä mainittua malariaa aiheuttavien loisten väritystä, Chagasin pahaa, leishmaniaasia ja trichomoniaa.

Lisäksi se on osoittanut olevan erittäin hyödyllinen siittiöiden nesteen sytologisessa tutkimuksessa. Sen lisäksi, että sitä on korostettu osoittamalla siittiöiden morfologisia ominaisuuksia, mutta myös sallii leukosyyttien, epiteelisolujen ja spermatogeneesisolujen erottamisen.

Perusta

Tekniikka seuraa Romanowskyn värjäyksen perustaa, jossa happamilla väriaineilla on selektiivinen affiniteetti emäksisiin solukomponentteihin ja happamat komponentit houkuttelevat emäksisiä väriaineita.

Toisin sanoen, sekä solurakenteilla että väriaineilla on positiivisia tai negatiivisia sähkökuormia, yhtä suuret kuormat hylätään ja erilaiset kuormat houkuttelevat.

Esimerkiksi emäksiset väriaineet, kuten metyleenisininen, ladataan positiivisesti ja houkuttelevat negatiivisesti ladattuja rakenteita. Siksi tämä väriaine värjää ytimet, joissa on runsaasti DNA: ta ja RNA: ta, jotka ovat negatiivisesti ladattuja fosfaattiryhmiä.

Myös Basofiilisen segmentoitujen basofiilisten segmentoitujen rakeiden rakeet ja ARN: tä sisältävien mononukleaaristen valkosolujen sytoplasmat ovat myös värjätty.

Se voi palvella sinua: Jaliscon kasvisto ja eläimistö: edustavat lajit

Myös happamassa väriaineessa on negatiivinen kuorma, joten se sitoutuu positiivisesti kuormitettuihin rakenteisiin, kuten segmentoitujen eosinofiilien punasoluihin ja rakeisiin. Segmentoitujen neutrofiilien rakeiden suhteen molemmat väriaineet asettavat.

Väriaineita

Tässä tekniikassa reaktioiden yhdistelmä ortokromaattisen ja metakromaattisen värityksen välillä on rinnakkain. Ortokromaattinen (eosiini ja metyleenisininen) on kiinnitetty solurakenteeseen, johon ne liittyvät ja tarjoavat vakaan värin, joka ei vaihtele.

Toisaalta metakromaattiset (metyleenin sinisestä, Azure ja Azure B: n johdetut niiden alkuperäinen väri vaihtelevat kerran yhdistyneinä erityiseen rakenteeseen, jopa erilaisia ​​vivahteita voi olla erilaisia.

Lopuksi, askel, joka vie Grünwald -liuoksen, tarvitsee veden läsnäolon, koska ilman tätä väriaine tunkeutuu rakenteisiin, mutta sitä ei kiinnitetä. Väriaineen on tapahduttava polaarinen tai ionisoitu, ja siten kyettävä saostamaan ja tarkastelemaan niihin liittyviä rakenteita.

Tekniikka

Materiaalit

• Liukumäki.
• Värisiltot.
• May Grünwald -ratkaisu.
• Giemsa -värjäys.
• Tislattu vesi.

Keskittynyt Grünwald väriaineen

0,25 g metyleeni-eosiininsinistä (väriaine May Grünwaldin mukaan) ja liuottaa 100 ml metanolia tulisi painottaa. Sitten valmiste sekoitetaan 1 tunniksi ja anna seistä 24 tuntia. Ajan jälkeen se suodatetaan.

Tekniikan levittämiseksi May Grünwald -väriaine laimennetaan seuraavasti: 200 ml laimeaa väriainetta mitataan 30 ml konsentroitua liuosta, 20 ml puskuriliuosta ja 150 ml tislattua vettä, joka on säädetty pH: han 7.2-7.3. Myöhemmin se sekoitetaan ja suodatetaan.

Keskittynyt giemsa väritys

0,5 grumia azur-eosiinihuuhkaa metyleeniä (Giemsa mukaan väriaine) liukenee 50 ml: aan metanolia ja lisää 50 ml glyseriiniä.

Tekniikan suorittamiseksi 1:10 laimennetaan puskuriliuoksella ja anna seistä 10 minuuttia. Se voidaan suodattaa tarvittaessa.

Voi palvella sinua: Mesénquima

Puskuriliuoksen valmistus pH: ssa 7,2

Ne tulisi punnita:

• 40 mg di-vetykaliumfosfaattia (KH2PO4).
• 151 mg vety-di-syfoottista fosfaattia 12-hydraattia (Na2HPO4).

Molemmat yhdisteet liuotetaan 100 ml vettä.

Sanguine- tai luumedol -srols -tincion -menettelytapa

Tapauksia on kaksi: klassinen ja nopea.

Klassinen modaalisuus

• Peitä haju 2 tai 3 minuutin ajan, kun Grünwald -liuos laimennettiin.
• Pese puskuroidulla tislatulla vedellä edellisen liuoksen poistamiseksi.
• Peitä samalla puskuroidulla pesuuutteella ja jätä 1 minuutti. Ajatuksena on, että etuväri on kiinnitetty rakenteisiin ja että samalla solut ovat hydratoituneita.
• Lisää 12 laimennettua Giemsa -tinktuuria puskuroituun veteen ja puhalta sekoittaaksesi ja homogenisoidaksesi. Anna seistä 15 tai 20 minuuttia.
• Pese levitys puskuroidulla tislatulla vedellä ja aseta se kuivumaan ilmassa.
• Keskity ja tarkkaile optisessa mikroskooppissa värjäysverisolut käyttämällä 40x -kohdetta. Tarvittaessa voidaan käyttää 100x.

Nopea tila

• Peitä levitys May Grünwald -väriaineella, joka on laimennettu 1 minuutiksi.
• Pese puskuroitulla tislatulla vedellä.
• Peitä puskuroitulla vedellä ja anna seistä 1 minuutti.
• Aseta laimennettu Giemsa väriaine ja jätä 5 minuutiksi.
• Pese puskuroidulla tislatulla vedellä ja anna ilman kuivua.

Tässä kuvatut tekniikat ovat opasopas, mutta on otettava huomioon, että reagensseja myyvän kaupallisen talon mukaan menettelyt ja väriajat vaihtelevat. On suositeltavaa noudattaa kunkin kaupallisen talon tiukasti ilmoittamia vaiheita.

Laajennettu siittiöiden nesteen väritystekniikka

• Peitä pidennetty hienolla kerroksella May Grünwald -liuoksesta 4 minuutin ajan.
• Poista väriaine ja pese tislatulla vedellä.
• Aseta laimennettu Giessa -kerros (1:10) tislatuun veteen 15 minuutin ajan.
• Poista väriaine ja pese tislatulla vedellä.
• Anna kuivua ja tarkkailla mikroskooppissa.

Voi palvella sinua: butiarginen käyminen

Tärkeät tekniset tiedot

Tekniikassa todetaan, että reagenssien ja pesuratkaisujen pH on säädetty 7: ksi.2-7.3, niin että väriaineiden sukulaisuudet solurakenteilla ei vääristy ja odotettu lopullinen väri ei vaihtele.

Sovellukset

• Tätä tekniikkaa käyttävät kliiniset laboratoriot perifeerisen veren hankaamisen ja luuytimen, kudosleikkausten ja sytologioiden värjäytymiseen.
• Hematologisella kentällä tämä tekniikka on elintärkeää solujen poikkeavuuksien tutkimuksessa muodon, koon ja lukumäärän suhteen. Se on erittäin arvokas työkalu tiettyjen sairauksien, kuten leukemian ja anemioiden diagnosoimiseksi.
• Se esittelee erinomaisen hyödyllisyyden, kun haet loisia hematologisella kentällä (Plasmodium SP ja Cruzi Tripaosoma) tai histologinen (Leishmanias sp-A.
• Emättimen sytologian suhteen tämä tekniikka on erityisen edullinen havainnoinnissa Trichomonas vaginalis. Tämä on tärkeä havainto, koska sen läsnäolo simuloi karsinoomamaalauksia In situ Se sitten katoaa, kun loinen poistetaan.
• Se on ollut ihanteellinen työkalu siittiöiden näytteiden tutkimiseen, koska se tarjoaa arvokasta tietoa siittiöiden laadusta. Sen tarjoamien tietojen on tehtävä pääasiassa lukumäärän ja morfologian kanssa, samoin kuin samanaikaisten solujen kanssa, joita voi olla läsnä ja joilla on elintärkeää, kuten sukusolut, leukosyytit ja epiteelisolut. Tämän analyysin avulla on mahdollista kuvata pään, kaulan, keskimmäisen kappaleen ja pääkappaleen siittiöissä havaittuja poikkeavuuksia. Lisäksi ne voivat auttaa myös osoittamaan Hosospermia (punasolujen läsnäolo) ja leukospermiaa tai piospermiaa (siemennesteen leukosyyttien lukumäärän lisääntyminen).

Viitteet

1. Merck KGAA -laboratorio. Voi Grünwald eosina sininen mikroskopia metyleeni.
2. May-grünwald-giemsa värjäys. ES: stä palautettu.Wikipedia.org.
3. Lasikemikaalit Panreac -laboratorio. Histologisten tekniikoiden, hematologian ja mikrobiologian reagenssit. Laskemikaalien talteenoton.com.