Wright -värjäys

Erilaiset perifeerinen veren smess, joka on värjätty Wright -värjäyksellä. -Lla. Akuutti leukemia b. Plasmodium vivax punasoluissa. C. Plasmodium falciparum, makrogametosito. D -d. Lymfosyytti

Mikä on Wrightin värjäys?

Se Wright -värjäys Se on amerikkalaisen patologi James Homer Wrightin vuonna 1902 luoman väritekniikka Romanowskyn värjäytymiseen, jotta erityyppiset verisolut paremmin erottavat. 

Tämä väri on monikromaattinen, mikä tarkoittaa, että se tuottaa useita värejä riippuen rakenteesta, joka absorboi väriaineen. Tätä väritystekniikkaa on käytetty laajasti valkosolujen erilaisten verisolujen suorittamiseen ja punasolujen, verihiutaleiden ja leukosyyttien morfologiaan ääreisveressä ja luuytimessä.

Sen käyttö on erittäin tärkeää, koska poikkeavuudet voidaan nähdä veren eri solulinjoissa, mikä helpottaa sairauksien, kuten leukemian tai bakteerien tai loisten infektioiden diagnoosia.

Ehkä nämä ovat yleisimmät sovellukset, joissa tätä tekniikkaa käytetään, mutta ne eivät ole ainoita. Se on hyödyllinen myös muissa näytteissä kuin veressä ja luuytimessä, kuten nenän erityksen näytteet, fekaali lima, yskö, iho, muun muassa.

Wrightin värjäytymisen perusta

Wrightin värjäys syntyi Romanowsky -tahrasta.

Wright -värjäyksessä käytettyjen väriaineiden seos aiheuttaa Romanowsky -nimisen vaikutuksen, toisin sanoen, se tarjoaa kauniin purppuran värin leukosyyttien ytimille ja neutrofiilisille rakeille, kun taas punasolut värjätään vaaleanpunaiseksi.

Komponentit, jotka vastaavat Wrightin värjäyksen tyypillisten värien antamisesta, ovat Blue B ja Eosina ja. Havaittu vaikutus riippuu väriaineiden yhteydestä kemiallisiin rakenteisiin ja sinisen B ja eosiinin ja eosiinin ja vuorovaikutuksista.

Happarakenteet, kuten nukleiinihappot, ydinproteiinit ja jonkin tyyppisten solujen epäkypsä reaktiivinen sytoplasma, asettavat sinisen B (emäksinen väritys).

Vaikka emäksiset rakenteet, kuten hemoglobiini, segmentoitujen eosinofiilien rakeet, muun muassa eosiini ja (happojen väritys), muissa solurakenteissa.

Värjäystulokseen voivat vaikuttaa erilaiset tekijät, kuten Wright -väriaineen pH, vaimennus- ja pesuratkaisu, samoin kuin värjäys- ja kiinnitysaika.

Siksi jokainen reagenssien valmistelun vaihe on ratkaisevan tärkeä ja se on tehtävä huolehtiminen kaikista yksityiskohdista.

Materiaalit

Wright -väriaine. 100 ml: lle se vaaditaan:

Paina 0.3 gramman väriainetta, mitat 97 ml metanolia ja 3 ml glyserolia.

Valmistautuminen

Aseta laastissa raskas määrä Wrightin väriainetta ja sisällyttää glyserolin vähitellen, kunnes pöly on täysin liuennut.

Myöhemmin metanolia lisätään, sekoitetaan ja kaadetaan keltaiseen pulloon.

Ennen käyttöä, liuosta, jossa on pehmeät liikkeet ja suodatin, on sekoitettava.

Voi palvella sinua: Suuntavalinta: Mikä on, määritelmä, esimerkit

Puskuroitu puskuriliuos

Litrassa tislattua vettä lisätään 3,76 g dinatriumhydrofosfaattia (Na NA₂HPO₄   2H₂0) Plus 2,1 g dihydrogeenista kaliumfosfaattia (KH₂Poikki₄-A.

Sekoita erittäin hyvin, kunnes liuotat kaikki sisällytetyt reagenssit. Säädä pH arvoon 7,2.  Kaada lasipurkkiin ja pidä huoneenlämpötilassa.

Värityksen suorittamiseen tarvittavat lisämateriaalit

Lisäksi vaaditaan muita materiaaleja väritekniikan toteuttamiseksi, nämä ovat: portaobjektit tai kattaa esineet, värisilta, vedellä tai puskurilla olevia nauhoja tai puskuria, sekuntikelloa, joka ottaa väriaikoja ja jonkin verran kuivausmateriaalia (absorboiva paperi, harja tai puuvilla -A.

Wright -värjäyskomponentit

Metanoli

Alkoholi (metanoli) toimii verenkierron kiinnittimenä liukumäelle.

Pohjimmiltaan se on pelkistävä reaktiivinen, kuivuma ja koagulantin kiinnitys. Siksi niiden tehtävänä on hyytyttää proteiinit ja tehdä niistä liukenemattomia, mutta ilman denaturointia.

Metanoli on eniten käytetty reagenssi, jotta voitaisiin korjata kaikki laboratoriot, koska se tarjoaa parempia tuloksia kuin etanolilla saadut. Ihanteellinen pitoisuus on 99%.

Iskunvaimennin

Iskunvaimennin (puskuroitu liuos) on säätämällä tai ylläpitää.

Kiinnittämisen kulku metanolidehydraattisoluilla ja iskunvaimentimella auttaa niitä nesteyttämään niitä.

Eosina (y)

Eosinalla on affiniteetti emäksisiin komponentteihin, koska se on happama väriaine. Kaksi tyyppiä eosiinia tunnetaan hyvin samankaltaisina kuin toistensa, niin paljon, mitä kumpaakin voidaan käyttää, saadaan sama tulos.

Yhtä kutsutaan eosiiniksi ja keltaiseksi eosiiniksi tai tetrabromofluoreseiiniksi, ja toinen, eosiini B, sinertävä e eritrosiini tai dibromodyitrofluoreseiini. Eosin ja se on kuitenkin yleisimmin.

Tämän väriaineen tärkein ominaisuus on sen negatiivinen napaisuus, tämä tekee siitä, että solurakenteet houkuttelevat positiivisella kuormalla.

Metyleenisininen

On perusväriaine. Sen pääominaisuus on metakromia, ts. Kaikkia rakenteita ei värjätä samasta väristä, se riippuu väritysrakenteiden kemiallisesta koostumuksesta.

Jotkut muuttuvat vaaleaksi tai tummansinisiksi, ja toisista tumman violetti tai vaalea lila.

Tekniikka

1. Tee laajennettu näyte siten, että on ohu.
2. Anna ilman kuivua noin 2 tuntia.
3. Aseta kuivahaju värisillaan tai värjäys kauhan pidennetyn näytteen ollessa.
4. Peitä arkki Wright -pudotuksella GOTA: lla peittääksesi koko pinnan. Jätä laki 5-8 minuuttia.
5. Väriaineen on peitettävä liuku kokonaan, vuotamatta reunojen läpi. Jos väriajan aikana se alkaa haihtua, lisäpisarat on asetettava.
6. Lisää myöhemmin yhtä suuri määrä iskunvaimennusta, puhalta hiukan, kunnes ominainen metallinen kirkkaus ilmestyy. Kesy 10-15 minuuttia.
7. Pese vesijohtovedellä, aseta pehmeä suihku, kunnes arkki näyttää vaaleanpunaiselta.
8. Alkoholilla kyllästetyllä sideharsolla eliminoi värjäyksen liukun takana.
9. Anna levityksen kuivua ennen upotusöljyn asettamista sen visualisoimiseksi mikroskooppiin.

Voi palvella sinua: taksonomiset tasot

Wright -värjäytymisen käyttö/sovellukset

Hematologia

Se on ihanteellinen perifeerisen veren värjäykseen.

Tämän väriaineen yhdistelmän kemiallisten ominaisuuksien vuoksi solurakenteet voidaan helposti tunnistaa, jotta ne voidaan erottaa läsnä olevat erityyppiset solut.

Vuotava nenä

Tämä tekniikka on erittäin hyödyllinen nenän erityssolujen (epiteelisolujen, segmentoitujen eosinofiilien, polymorfonukleaaristen) tunnistamiseksi allergisen nuhan diagnoosissa.

parasitologia

Tässä mielessä se on ollut hyödyllinen tutkimukselle Leishmania sp Ihon ihon solukudoksen histiosyytteissä ihon haavaumissa. Sitä käytetään myös leukosyyttien tunnistamiseen ulosteen näytteessä (fekaalinen leukogrammi).

Tässä tapauksessa lääkärin on kiinnostavaa tietää, onko uloste -leukosytoosi polymorfonukleaarisella vai mononukleaarilla. Tämä fekaalisen leukogrammin havainto opastaa vastaavasti bakteeri- tai virusinfektiota.

Toisaalta veressä kiertävät loiset voivat olla punasolujen sisällä tai vapaita plasmassa. Halutut loiset ovat Plasmodium spp, Trypanosoma cruzii ja filariat, ja eläinlääketieteellisessä on hyödyllinen etsinnässä Theilery ekninen ja Babesia Caballi, Syy -agentit vauvan, etenkin hevosissa.

Wrightin ja myös Giemsa väri sallii erottaa hemoparasiitit normaaleista solukomponenteista. Tätä varten voidaan käyttää kahta tyyppiä laajennettuja:

Hieno laajennettu

Veriä laajennetaan ohuena kalvona liukussa. Wright -värjäys, paljastaen ytimen ja sytoplasman ominaisuudet.

Paksu pudotus

Tätä metodologiaa käytetään tutkimaan loisten esiintymistä suuremmassa veressä.

Tätä varten liukumäelle asetetaan suuri veri. Kun siellä sinun on defibriini, tekemällä suurempia ja suurempia ympyröitä keskustasta, käyttämällä toisen liukumäen reunaa.

Lopuksi paksun hajun loisten tarkkailemiseksi punasolut on lueteltava vedellä.

Hengitystieinfektiot

Hengitysteoksella tämä tekniikka on myös hyödyllinen, koska ysköt näytteissä olevat solut, keuhkoputken tai keuhkoputkenpesu ovat tärkeitä diagnoosin määrittämiseksi.

Täällä voit erottaa polymorfonukleaariset solut ja mononukleaariset solut.

Bakteriologia

Tämän tekniikan käyttö bakteriologiassa on rajoitettua, koska bakteerien värjäys ei ole hyvä. Siksi niiden värjäytymistä varten käytetään muita erikoistuneita väritekniikoita.

Sitä on kuitenkin käytetty epiteelisolujen etsimiseen sisällyttämiskappaleista Klamydia trachomatis Virtsaputken tai endocervical Limakosan levityksessä, vaikka on tunnustettava, että se ei ole paras menetelmä.

Se voi palvella sinua: hemokianiinit

Punasolujen keskuudessa on myös mahdollista havaita, kuten spiraalibakteerit, kuten Borrelia burgdorferi Tartunnan saaneilla potilailla, samoin kuin morulat tai sisällytetyt ruumiit Ehrlichia sp Lymfosyyttien, monosyyttien tai neutrofiilien sytoplasmassa verenkierrossa.

Mykologia

Hän Histoplasma capsulatum Se on usein diagnosoitu patogeeninen sieni eri kudosnäytteiden mikroskooppisella havainnolla, värjäys Wright -värjäyksellä.

Kuinka Wrightin värjäytyminen havaitaan verinäytteen rakenteet?

Suositukset Sanguineous Srols -sovelluksen hemogrammin lukemiseen. Lähde: Retamales E, Mazo V. Kansanterveysinstituutti, Chilen hallitus

Suositukset hyvästä värjäyksestä

- Verinäytteiden pidennykset on kuivuttava spontaanisti. Lepotusten tulisi olla mahdollisimman ohuita, jotta saadaan parempaa kiinnitystä ja välttää päällekkäisyys.

- Korkealaatuiseen värjäytymiseen se on suositeltavaa. Toisaalta ihanteellinen näyte on kapillaariveri, ilman antikoagulanttia.

- Jos käytetään laskimoverta, sitä tulisi käyttää EDTA- ja ei -hepariinin antikoagulanttina, koska jälkimmäinen voi muodostaa muodonmuutoksen solurakenteet.

- Valmistetun väriaineen heikkenemisen välttämiseksi se on säilytettävä kuivissa paikoissa.

- Pesuprosessin aikana suositellaan veden käyttöä, joka on säädetty neutraaliin pH: ään.

- On suositeltavaa testata laboratoriossa käytettyjä värjäysmenetelmiä aika ajoin.

Tämä tehdään värjäytymisnäytteitä tai laajennetut kuviot, laadunvalvojana. Tämä vaihe on tärkeä, koska varmistetaan, että värjäys on oikein valmistettu ja väriajat ovat hyvin standardisoituja.

Jos kuviolomake on huonosti värillinen, niin on ratkaistava ongelmat.

Yleiset virheet Wrightin värissä

Hyvin vaalea värjäys

Hyvin vaaleat levitykset johtuvat yleensä hyvin lyhyestä värjäysajasta tai erittäin liioiteltuista pesusta. Se korjataan pidentämällä kosketusaika väriaineen kanssa tai vähentämällä pesuaikaa.

Väriaineen kellot

Väritysten esiintymisessä hajossa voi olla useita syitä. Yleisimmät ovat: Palauttamattoman väriaineen käyttö, väriaine epätasaisilla värisilloilla, kuluta likaisia ​​arkkeja, joissa on pölyä tai rasvaa, älä tee hyvää pesua, kun värjäys on valmis.

Hieraminen erittäin punertavalla tai sinisellä värillä

Iskunvaimennin on vastuussa väriaineen pH: sta. Värit, joiden pH on osoitettu (happo), johtavat hyvin punertavan hajujen saamiseen.

Jos väriaineen pH on yllä (alkali), saa erittäin sinertävän rasvan.

Tallennustila

Reagenssi on säilytettävä huoneenlämpötilassa.

Viitteet

1. López-Jácome, L., Hernández-durán, m., Colín-castro, c., Ortega-peña, s., Cerón-González, G., Franco-Cendejas, F. (2014). Perusvärjäys mikrobiologian laboratoriossa. Vammaisuustutkimus.
2. Calderón, a., Cardona, J., Vergara tai. (2013). Babesia spp -taajuus. Monterían hevosissa Córdoba (Kolumbia). Rev. Udcaactual disculg. tiedemies. 
3. Retamales, E., Mazo, v. Chilen kansanterveysinstituutti. Suositukset Sanguineous Srols -sovelluksen hemogrammin lukemiseen.