Agar -laskenta Standardi säätiö, valmistelu ja käyttö

Hän agar -standardi Se on vankka, ei -selektiivinen viljelyväliaine, joka on suunniteltu kuluttajavesien, jätevesien, meijereiden, meijerijuomien, aerobisen mikrobikuormituksen kvantifiointiin. Tämä väliaine tunnetaan myös nimellä PCA -agar) sen lyhenteelle englanninkielisessä levymäärän agarissa. Sen on luonut vuonna 1953 Buchbinder, Baris ja Goldstein.

Vakiotilin väliaine koostuu hiivauutetta, kolmoista, glukoosista, agarista ja tislatusta vedestä. Tämä formulaatio sisältää ravitsemuksellisia peruselementtejä, jotka sallivat nykyisen, YK: n vaativan aerobisen mikrobikuorman kehittymisen.

Desimaalimuodot UFC: n laskentastandardin määrästä. Lähde: Quentin Geissmann [CC BY-SA 3.0 (https: // creativecommons.Org/lisenssit/by-SA/3.0)]

Koska väliaine ei sisällä estäjiä, bakteerit voivat kehittyä ilman rajoituksia, joten se on ihanteellinen yleisille siirtokunnille. Plakin kvantifiointitekniikka ei kuitenkaan havaitse kaikkia läsnä olevia bakteereja, vaan vain ne, jotka kykenevät kasvamaan ympäristöolosuhteissa, joihin agaria altistuu.

Tässä mielessä plakin kvantifiointitekniikka määritetään yleensä aerobisten mesofiilityyppisten bakteerien määrällä, ts. Ne, jotka on kehitetty lämpötiloissa välillä 25 - 40 ° C, optimaalisen kasvulämpötilan ollessa 37 ° C: ssa.

Tämä bakteeriryhmä on erittäin tärkeä, koska ihmiselle on eniten patogeenisiä bakteereja.

On huomattava, että joskus korko kvantifioi elintarvikkeissa olevien psytrofiilisten bakteerien määrä. Nämä bakteerit ovat niitä, jotka kehittyvät alhaisissa lämpötiloissa (< 20°C) y son las responsables de que los alimentos se descompongan más rápido, aun estando en nevera.

Samoin termofiiliset bakteerit, jotka kehittyvät välillä 50 ° C: ssa 80 ° C: ssa, voivat olla tärkeitä tietyntyyppisissä elintarvikkeissa, kuten säilykkeissä.

Mikrobien kvantifiointi ilmenee paksusuolenmuotoiluyksiköissä (UFC) grammaa kohti tai näytteen millilitra.

[TOC]

Perusta

Vakiotili on suunniteltu sallimaan ei -tarvittavien aerobisten bakteerien tyydyttävä kehitys, koska hiivauute, tripaini ja glukoosi tarjoavat tarvittavat ravintoaineet hyvää mikrobikehitystä varten.

Se voi palvella sinua: Alizarina: Ominaisuudet, valmistelu, käyttö ja myrkyllisyys

Toisaalta väliaineella on vaalea väri ja läpinäkyvä ulkonäkö, joten se on ihanteellinen In -Depth -kylvyn kehittämien pesäkkeiden visualisointiin (levyn vuoto).

Se on myös mahdollista, että pesäkkeet lasketaan pintaistutetulla menetelmällä Drigalskin lastalla.

Kun mikrobikuormitus on korkea, tutkittavan näytteen desimaalin laimennot on tehtävä UFC -määrän suorittamiseksi.

On huomattava, että American Public Health Association (APHA) suosittelee tätä väline.

Valmistautuminen

Punnitse 23,5 g dehydratoitua väliainetta ja liukene litraan tislattua vettä. Seosta kokonaan liukenemiseksi on lämmitettävä heiluttamalla usein, kunnes se kiehuu. Seuraavat vaiheet riippuvat käytetystä istutetusta tekniikasta.

Levyn kaatotekniikkaa varten

Jakele antamalla 12-15 ml koeputkissa. Seuraavaksi steriloi autoklaavissa 121 ° C: ssa 15 minuutin ajan. Anna kiinteyttää pystysuunnassa tacon muodossa. Tallenna, kunnes käyttöön.

Sulata taco, kun sitä käytetään. Kun voit pitää sen Mariassa 44-47 ° C: seen, kun näytteet valmistetaan.

Pinnan kylvettyyn

Sterilisoi väliaine autoklaavessa 121 ° C: ssa ja jaa sitten 20 ml Petri -steriileillä levyillä. Anna jähmettyä, sijoittaa ja säästää jääkaappiin, kunnes käyttö.

Karkaisee levyt ennen käyttöä. Keskipitkän pH: n on oltava 7,0 ± 0,2.

Käyttää

Vakiotiliä käytetään aerobisessa mesofiilisessä laskentatekniikassa veden ja ruoan mikrobiologisen analyysin aikana. Aerobisen mesophilosin tili on välttämätöntä, koska se määrittelee tutkittavan näytteen terveyslaadun.

Tämän tekniikan käyttö (tätä väliainetta käyttämällä) mahdollistaa eristettyjen pesäkkeiden makroskooppisen visualisoinnin kvantifioimiseksi.

Levyn purkaustekniikka (kylvää syvyydellä)

-Menettely

Tekniikka koostuu seuraavista:

1) Homogeenisoi näyte läsnä olevien bakteerien uudelleen jakamiseksi.

2) Alkuperäinen suspensio suoritetaan steriilissä pullossa tai pussissa, kunnioittaen 10 gr: tä tai 10 ml: n suhdetta 90 ml: n laimennusaineena (10^-1-A.

Se voi palvella sinua: fikologia

3) Alkuperäisestä suspensiosta asiaankuuluvat desimaalimuodot tehdään näytteen tyypistä riippuen. Esim. (10^-2, 10^-3, 10^-4-A. Laimennot suoritetaan Peptonada -vedellä tai fosfaattipuskuriliuoksella.

Tätä varten^-2 ja niin edelleen.

4) 1 ml kutakin laimennusta otetaan ja asetetaan tyhjille steriileille petrie -levyille.

5) Lisää jokaiseen levyyn 12-15 ml agaria aikaisemmin sulan ja lepää 44 - 47 ° C: ssa.

6) Anna levyille pehmeät kiertoliikkeet ja levittää näytteen agarin viereen tasaisesti ja anna jähmettyä.

7) Sijoita levyt ja inkuboi 37 ° C: ssa aerobioosiin 24 - 48 tunnin ajan.

8) huipentunut aika etenee levyjen tutkimiseen ja laimennuksen siirtokuntien laskemiseen. Ne lautaset, joilla on välillä 30–300 UFC: tä, valitaan tilille.

Laske voidaan tehdä käsikirjasta tai voi käyttää siirtomaa -kirjanpitäjätiimiä.

ML: n sallimat arvot voivat vaihdella maasta toiseen sääntöjen mukaisesti, joilla niitä hallitaan.

-UFC -laskenta

Yleinen laskelma tehdään seuraavaa kaavaa käyttämällä:

Kaava UFC -kvantifioinnin yleiseen laskemiseen. Lähde: Kansallinen lääkehallinto ja lääketieteellinen tekniikka (ANMAT). Ruoan mikrobiologinen analyysi, virallinen analyyttinen menetelmä, indikaattorimikro -organismit. 2014 Volume 3. Saatavana osoitteessa: Anmat.Hallitus.AR

Ilmaise tulokset 1 tai 2 numeroa kertomalla sopivalla pohjalla 10. Esimerkki: Jos tulos on 16.545 on pyöristetty kolmannen numeron perusteella klo 17.000 ja ilmaistaan ​​seuraavasti: 1,7 x 10⁴. Nyt, jos tulos oli 16.436 on pyöristetty 16: een.000 ja ilmaisee 1.6 x 10⁴.

Pintakyvyn tekniikka

-Menettely

-Siirrä 0,1 ml suoraa näytettä, jos se on nestemäistä, alkuperäinen suspensio 10^-1 tai peräkkäiset laimennukset 10^-2, 10^-3 jne., vakiolevyn keskellä.

Voi palvella sinua: Tamaulipasin kasvisto ja eläimistö: edustavampi laji

-Jaa näyte Drigalski -lastalla tai lasitankolla L: n muodossa. Anna seistä 10 minuuttia.

-Sijoita levyt ja inkuboitu aerobioosiin 37 ° C: ssa 24 - 48 tuntia.

-Jatka laskemista pesäkkeitä, valitse ne levyt, jotka ovat välillä 20 - 250 UFC.

-UFC -laskenta

Laskelmaa varten laimennuskerroin käytetään, mikä on käänteinen. Luku 2 merkitsevään numeroon pyöristetään (pyöristäminen kolmannen numeron mukaan) ja ilmaistaan ​​pohjatehossa 10. Esimerkiksi, jos 224 UFC lasketaan näytteessä ilman laimennusta (10^-1), 22 x 10 ilmoitetaan¹  UFC, mutta jos luku oli 225, se on ilmoitettu 23 x 10¹ UFC.

Nyt, jos 199 UFC lasketaan laimennuksessa 10^-3, 20 x 10 ilmoitetaan⁴ UFC, mutta jos 153 UFC lasketaan samaan laimennukseen, ilmoitetaan 15 x 10⁴ UFC.

QA

Vakiotilin väliaine voidaan arvioida sertifioitujen tunnettujen kantojen avulla, kuten: Escherichia coli ATCC 8739, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Bacillus subtilis ATCC 6633, Lactobacillus fermentum ATCC 9338, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Shigella flexneri ATCC 12022.

Jos viljelyalusta on optimaalisissa olosuhteissa, tyydyttävää kasvua odotetaan kaikissa tapauksissa, lukuun ottamatta Lens. Fermentum jolla voi olla säännöllinen suorituskyky.

Viljelyalustan steriiliyden arvioimiseksi jokaisesta valmistetusta erästä yksi tai kaksi levyä (ilman inokulointia) 37 ° C: ssa aerobioosissa 24 tunnin ajan on inkuboitava. Tämän ajan jälkeen väliaineen kasvua tai värinmuutosta ei tulisi havaita.

Rajoitukset

-Älä sulaa agaria useammin kuin kerran.

-Valmistettu väliaine voi kestää jopa 3 kuukautta niin kauan kuin se pysyy jääkaapissa ja suojattu valolta.

-Tämä väline ei sovellu mikro -organismien tai anaerobien vaatimiseen.

Viitteet

1. Lääkkeiden kansallinen hallinto Elintarvikkeiden ja lääketieteellisen tekniikan (ANMAT) hallinto (ANMAT). Ruoan mikrobiologinen analyysi, virallinen analyyttinen menetelmä, indikaattorimikro -organismit. 2014 Volume 3. Saatavana osoitteessa: Anmat.Hallitus.AR
2. Diffco Laboratories Francisco Soria Melguizo, S.-Lla. Lautasluku agar. 2009. Saatavana osoitteessa: http: // f-aria.On
3. Conda pronadisa -laboratoriot. Agar standardimenetelmille (PCA) APHA: n ja ISO 4833: n mukaan. Saatavana osoitteessa: Condalab.com
4. Britannia Laboratories. Agar -levyn lukumäärä. 2015. Saatavana osoitteessa: Britanialab.com
5. Camacho A, Giles M, Ortegon A, Palao M, Serrano B ja Velázquez tai. 2009. Tekniikat elintarvikkeiden mikrobiologiseen analyysiin. 2. painos. Kemian tiedekunta, UNAM. Meksiko. Saatavana osoitteessa: DEPA.Fquim.Yksinäinen