Pitämällä mikä on, perusta, valmistelu, käyttää

Hän Endo -agar tai keskipitkän endo on vankka, differentiaalinen kulttuuri ja tietyllä selektiivisyydellä. Alkuperäinen kaava on luonut Endo vuonna 1904, jotta voidaan erottaa fermentoimattomat laktoosit. Alkukirjain Salmonella typhi, Mutta myöhemmin median tavoite kääntyi koliformien etsimiseen.

Endo -agarin alku on pysynyt, mutta sen formulaatio on kärsinyt lukemattomia muutoksia vuosien varrella. Tällä hetkellä väliaine koostuu eläinkudoksen peptistä, laktoosista, vetypukkista, natriumsulfiteista, emäksisestä futsiinista ja agarista ja agarista.

Elatusaineen pääasiallinen käyttö on liitetty Enterobacteriaceae -perheeseen ja muihin läheisiin perheisiin kuuluvien gram -negatiivisten bakteerien eristämiseen ja erilaistumiseen.

Sitä käytettiin pitkään koliformien havaitsemiseen vesinäytteissä, meijerissä ja ruoassa, mutta nykyään muut vastaavat toiminnot ovat siirtäneet tämän väliaineen käytön. Jotkut mikrobiologialaboratoriot käyttävät tätä agaria kuitenkin kliinisten näytteiden eristämiseen.

Perusta

Endo -agar sisältää peptoneja, jotka toimivat aminohappojen, typen, hiilen ja energian lähteenä, jotka ovat välttämättömiä vähän vaativien mikro -organismien kasvulle.

Toisaalta agarin hiukan selektiivinen luonne tarjoaa natriumsulfiitin ja emäksisen fuchsiinin aggregaatti; Molemmat komponentit estävät osittain tai kokonaan useimpien positiivisten grambakteerien kehittymistä.

Eroainetta annetaan käymiskyvyn hiilihydraatin läsnäololla, joka tässä tapauksessa on laktoosi ja perusfutsiini, joka toimii myös pH -indikaattorina.

Voi palvella sinua: taktismi

Gram -negatiiviset bakteerit, jotka kasvavat tässä agarissa ja kykenevät käymään laktoosia, muodostavat voimakkaita vaaleanpunaisia ​​pesäkkeitä; olla patognomoninen jstk Escherichia coli Tummanpunaisten pesäkkeiden muodostuminen vihertävällä metallisella kiiltolla. Tämä johtuu hiilihydraattien fermentoinnin korkeasta happotuotannosta.

On huomattava, että pesäkkeiden ympärillä oleva väliaine muuttuu myös vahvaksi vaaleanpunaiseksi. Kun taas gram -negatiiviset bacilli -fermentoimattomat laktoosit muodostavat vaaleanpunaisia ​​pesäkkeitä, jotka ovat samanlaisia ​​kuin keskimääräinen tai väritön.

Vety -dopotsiumfosfaatti tasapainottaa väliaineen pH: n ja agar on komponentti, joka tarjoaa kiinteän konsistenssin.

Valmistautuminen

Endo -agar

Punnitse 41,5 g dehydratoitua väliainetta ja liukene 1 litraan tislattua vettä. Kuumenna seosta sekoittaen usein, kunnes keskimääräinen liukeneminen on kokonais. Sterilisoi autoklaavissa 121 ° C: ssa, 15 lb painetta, 15 minuutin ajan.

Kun poistat autoklaavista, anna jäähtyä likimääräiseen lämpötilaan 45-50 ° C, ravista seos homogenisoidaksesi ennen tarjoilua. Kaada 20 ml Petri -steriileillä levyillä.

Anna vahvistaa levyt, sijoittaa ja säästää plakin tai kääri tummalla paperilla ennen jääkaapin säästämistä. On erittäin tärkeää suojata valmistettu ympäristö suoralta valolta. Suositeltava käytäntö on valmistella tarkka tarvittava määrä.

Jos lautaset säilytetään jääkaapissa, levyjen tulisi antaa malttinsa ennen käyttöä.

Mediumin pH: n on oltava välillä 7,2 - 7,6 ja valmistetun väliaineen väri on vaaleanpunainen väri.

M-endo-agentti

McCarthy-, Delaney- ja Grasso-kaavaa seuraavasta endo-agarista (M-endo) on toinen versio, joka sisältää enemmän yhdisteitä ja vaihtelee valmistuksen muodossa.

Se voi palvella sinua: Zygote: luokittelu, koulutus, kehittäminen ja segmentointi

Tämä variantti sisältää: laktoosi, triptoosi, sulatettu kaseiini -entsymaattinen, eläinkudoksen entsyymi, natriumkloridi, dibásic -kaliumfosfaatti, natriumsulfiitti, hiivauute, monobaasillinen kaliumfosfaatti, emäksinen fuchaini, natriumasuunta, laurilisulfaatti -natrium ja agar.

Tässä tapauksessa 51 g dehydratoitua väliainetta punnitsee ja suspendoituu 1 litrassa tislattua vettä, joka sisältää 20 ml etanolia.

Kuumenna hieman sekoittaen väliaineen liuottamiseksi kokonaan. Sen ei tulisi ylikuumentua ja kummassakin steriloitua autoklaavessa. Kun seos on homogeeninen, palvele Petri -steriileillä levyillä ja anna jähmettyä.

Käyttää

Joissakin maissa sitä käytetään edelleen kokonais- ja fekaalisten koliformien määrittämiseen Escherichia coli Fekaalisen saastumisen pääosan indikaattorina.

American Public Health Association (APHA) suosittelee M-endo-agaria jäteveden desinfiointi- ja hoito-ohjelmien seurantaa ja hallintaa sekä juomaveden laadun arvioinnissa.

Käytetty menetelmä on kalvojen suodatus, näytteen aikaisempi rikastuminen lauryylisulfaattiliemellä 2 - 4 tuntia.

Sitä voidaan käyttää myös EMB -agarin korvikkeena elintarvikkeiden ja veden mikrobiologisessa analyysissä todennäköisimmällä lukutekniikalla (NMP), erityisesti täydellisessä vahvistusvaiheessa JA. koli hämärästä EC -liemeistä.

QA

Arvioida valmistelun laatua päättyvä erä, tunnettu tai sertifioidut ohjaimet kylvetään.

Kantojen joukossa, joita voidaan käyttää tähän tarkoitukseen, ovat: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 11775, Enterobacter -viemäri ATCC 13047, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella flexneri ATCC 12022, Proteus mirabilis ATCC 14153 ja Enterococcus faecalis ATCC 11700.

Se voi palvella sinua: Andien alueen kasvisto ja eläimistö: edustavat lajit

Kannat kylvetään uupumuksen avulla ja inkuboitu 37 ° C: ssa 24 tunnin ajan aerobioosissa.

Odotetut tulokset ovat:

• Puolesta Escherichia coli: Vahvat punaiset pesäkkeet, metallisella kiiltolla.
• Puolesta JA. Cloacae ja K -k -. pneumoniae Pesäkkeiden on oltava vaaleanpunaisia ​​limoja.
• S: n tapauksessa. Sphimurium, s. Flexneri ja p. Mirabilis Pesäkkeet ovat yleensä vaaleanpunaisia ​​tai värittömiä.
• Lopuksi, JA. Faecalis Sen odotetaan olevan osittain estetty, joten sen kasvun on oltava huono hyvin pienten vaaleanpunaisten pesäkkeiden kanssa.

Rajoitukset

-Endo -väliaineella on selektiivinen voimassa, joten se voi kasvattaa joitain grampositiivisia mikro -organismeja, kuten Staphylococcus, Enterococcus ja jopa hiivat.

-Muut bacillit, jotka eivät kuulu enterobacteriaceae -perheeseen, voivat kehittyä tässä väliaineessa, kuten Pseudomonas sp ja Aeromonas sp. Näiden kantojen ominaisuudet ovat värittömiä epäsäännöllisiä pesäkkeitä.

-Tämä valmistettu väliaine on erittäin herkkä valolle, joten pitkäaikainen altistuminen tälle indikaattorijärjestelmän heikkenemiselle vahingoittaen ympäristöä peruuttamattomasti.

-Keskikokoisia komponentteja pidetään syöpää aiheuttavina, joten suoraa kosketusta on vältettävä.

-Dehydratoitu väliaine on erittäin hygroskooppinen ja se on pidettävä alkuperäisessä astiassaan huoneenlämpötilassa, hyvin suljettu ja kuivassa ympäristössä.

Viitteet

1. BD -laboratoriot. Endo -agar. Saatavana osoitteessa: BD.com
2. Neogen -laboratoriot. Olen agar. Saatavana osoitteessa: FoodSefety.Neogen.com