Dekstroosiperuna, valmistus ja käyttö

Hän Dekstroosi peruna -agar Se on kiinteä, ei -selektiivinen ravitsemusviljelyalusta. Siinä bakteeri- ja sienilajit voivat kasvaa, mutta sen käyttö on osoitettu erityisesti rihansuunien ja hiivojen eristämiseen. Sitä tunnetaan myös nimellä PDA -väliaine ilmaisulla Englannin perunadekstroosiagarissa.

Se on erityisen hyödyllinen fytopatogeenisten sienten eristämisessä, toisin sanoen ne, jotka vaikuttavat vihanneksiin. Näytteiden kylvää tartunnan saaneista vihanneksista, muita väliaineita, kuten Sabouraudia tai mallasagaria.

Aspergillus niger ja sinemas Dextrose -paavi -agarissa. Lähde: Alextrevelian 006 englanniksi Wikipedia [julkinen verkkotunnus]/Joselrojas [CC BY-Sa 4.0 (https: // creativecommons.Org/lisenssit/by-SA/4.0)]

Sitä käytetään myös sienipesäkkeiden laskemiseen kosmetiikan, lääketuotteiden ja joidenkin maitotuotteiden näytteissä. Se edistää myös kylvöä ihon kaavi -näytteitä etsiessään dermatofyyttejä, jotka kasvavat erittäin hyvin tässä väliaineessa, kehittämällä niiden ominaisia ​​pigmenttejä.

Keskipitkä dekstroosipaavi on hyvin yksinkertainen ja helppo väliaine valmistamaan laboratoriossa. Se sisältää, kuten nimestä viittaa, perunainfuusio, dekstroosi ja agar -agar. Lisäksi estäviä aineita voidaan lisätä bakteerien kasvun välttämiseksi ja sienilajien selektiivisyyden lisäämiseksi.

[TOC]

Perusta

Dextrose -paavi -agar on viljelyväliaine, joka tarjoaa tarvittavat ravitsemuselementit rihansuiden ja hiivojen kehittämiseksi.

Peruna -infuusion yhdistelmä glukoosilla tarjoaa täydellisen energialähteen siten, että sienten kasvu on tyydyttävä. Kun taas agar on se, joka tarjoaa johdonmukaisuuden ympäristölle.

Pelkästään väliaine ei estä bakteerien kasvua, joten se on ei -selektiivinen väliaine. Tätä varten selektiivinen tarvitsee estävien aineiden, kuten viinihappo- tai antibioottien, aggregaatin.

Valmistautuminen

-Kotitekoinen (ei -kaupallinen) papa dekstroosiagar

Petrilevyt

Se on valmistettu seuraavasti:

Ensinnäkin perunat pestään erittäin hyvin poistamalla heidän hallussaan olevan maan. Ne leikataan hienoiksi viipaleiksi kaikella ja kuorella. 200 grammaa perunaa punnitaan ja kiehutetaan litrassa tislattua vettä, puolen tunnin ajan.

Aika on valmis suodattimia tai rasittaa koko valmisteen sideharson kautta.

Saatu neste on valmis tislatulla vedellä, kunnes se saavuttaa litran. Infuusio lisätään 20 grammaa agar -agaria ja 20 g dekstroosia, sekoittuu hyvin ja autoklavan 121 ° C: ssa, 15 kiloa painetta 15 minuutin ajan.

Voi palvella sinua: Coevolution

Anna jäähtyä 50 ° C: seen ja tarjoile Petri -steriileillä levyillä. Valmistetut levyt pidetään jääkaapissa.

Kiilat

Voit myös valmistaa dekstroosi perunakiiloja.

Tässä tapauksessa ennen sterilointia autoklaavissa. Pelastaa jääkaapissa.

Väliaine on pH: ssa 5.6 ± 0.2, jotkut laboratoriot lisäävät kuitenkin 10 -prosenttista viinihapoa pH: n alentamiseksi arvoon 3,1 ± 0.1 bakteerien kasvun estämiseksi.

Tässä samassa mielessä muut laboratoriot mieluummin lisäävät antibiootteja tehdäkseen niin selektiivisiä sienten viljelyyn ja välttämään bakteerien kehitystä.

-Dextrose -paavi -agarin kaupallinen valmistelu

Punnitse 39 g kaupallisesti saatavaa kuivumista ja liukene litraan tislattua vettä. Lähteä 5 minuutiksi.

Seosta lämmitetään sekoittamalla usein sen kokonaisliukenemiseen asti. Myöhemmin se steriloidaan autoklaavessa 121 ° C: ssa 15 minuutin ajan.

Voit valmistaa levyjä tai kiiloja. Edellä kuvatulla tavalla.

PH on 5,6 ± 0,2. Jos toivotaan 3,1: n pH: n, 14 ml steraarista viinihappoa tulisi lisätä 20%: iin ennen levyjen tarjoilua.

Valmistamattoman väliaineen väri on beige ja valmistettu on kirkas keltainen, jolla on hieman pilvinen tai opalesoiva ulkonäkö.

Sovellukset

Prosessi kasvinäytteiden istuttamiseksi dekstroosiruukkuun

-Lehtiä, joissa on paikkoja

Lehdet leikataan paloiksi.

Aseta lehtien palat 50 cm3: lla, jossa on 50% alkoholia, pinnan desinfioida 20-30 sekuntia. Heitä alkoholi ja lisää natriumhypokloriitti 20% 40-50 sekuntia, jos ne ovat hienoja lehtiä ja lisää aikaa 80 sekuntiin, jos se on kuori ja runkoja.

Heitä natriumhypokloriitti ja ota desinfioidut palat steriilillä puristimella ja aseta ne keskipinnalle (korkeintaan 10 kappaletta). Aseta päivämäärä ja inkuboi 20 - 30 ° C.

-Hedelmiin ja mukuloihin

Jos hedelmät ovat lihavia, avaa sienen kärsimä hedelmät ja ota palat steriilillä skalpelilla, sekä sairaat että terveelliset osat ja aseta se agarin pintaan.

Jos hedelmä on sitrushedelmiä, kuten sitruuna tai oranssi, sen siemenet on avattava ja kylvää.

Voi palvella sinua: fosfatidyylinositoli: rakenne, harjoittelu, toiminnot

Kun hedelmien pinta vaikuttaa ja tarkkailua havaitaan, ihanne on käyttää raastettua menetelmää levyllä; Tämä koostuu sparoorin pelaamisesta steriloidulla ja jäähdytetyllä ”L” -muotoisella lastalla ja kylvää sitten siksakissa 2-3 kertaa agarissa.

-Jyvien

Ne desinfioivat saman kuin lehdissä kuvattu ja asetettu myöhemmin agariin.

-Oksille ja varsille

Suoritetaan aivokuoren rassi ja sitten terveen ja sairaan osan kappaleet otetaan ja kylvää suoraan agariin.

Istutettuja plakkeja inkubidaan aerobioosissa 20-30 ° C: ssa 72 tunnin ajan.

Prosessi iho -asteikkojen, hiusten tai kynsien istuttamiseksi dekstroosipaavi -agariin

Näyte tulisi suorittaa käyttämällä skalpel -arkkia nro 11 joko kärsimättömien hiusten, iho- tai kynsiasteikkojen leikkaamiseksi dermatofyyttien etsimiseksi. Ennen näytteen ottamista 70% alkoholilla on desinfioitava alue.

-Ihonäyte

Huijausvaurioissa loukkaantumisen reuna on raaputtava, koska sienen löytää todennäköisemmin sieniä.

Exudatiivisissa vaurioissa näyte otetaan kuivalla tai märällä tampon avulla. Kylvä heti paavin dekstroosin tai Sabouraud -agarin yli. Vältä kuljetusvälineitä.

Toinen näytteenottomenetelmä on Mariatin ja Ada Camposin maton neliön tekniikan kautta. Tässä tapauksessa kärsivällinen alue hankataan viisi kertaa steriilillä villalla seuraavaa satoa varten.

Näyte voidaan sijoittaa suoraan viljelyalustaan.

-Hiusnäyte

Patologiasta riippuen osa tai juuri alkaa leikata. Aseta näyte viljelyalustaan.

-Naulanäyte

Ne voidaan raaputtaa tai leikata tietty osa sairastuneesta kynsistä. Riippuu vamman tyypistä.

Leikkaa näyte 1 mm: n bitteiksi ennen kylvää sienen kosketuksen todennäköisyyden lisäämiseksi viljelyalustan kanssa.

Tunnistusmenettely

Levylle saadut pesäkkeet eristetään putkissa.

Mikroskooppinen tutkimus (rakenteiden havaitseminen ja niiden muodostuminen) voidaan tehdä mikrokulttuurilla tai suoralla tarkkailulla arkin ja lamellin väliseen mikroskooppiin.

Voi palvella sinua: histidiini: ominaisuudet, rakenne, toiminnot, ruoka

Pesäkkeet lasketaan

Tätä väliainetta voidaan käyttää myös kasvinäytteissä, ruoassa, kosmetiikassa tai lääkkeissä olevien sienten ja hiivojen kuormituksen määrittämiseen. Tätä varten käytetään perunan perunan täydennettyjä agaria antibiooteilla, kuten: (kloramfenikoli, klorotetrasykliini tai molemmat).

Kaada 1 ml näytettä - mieluiten laimennettu - steriilille ja tyhjälle Petri -levylle, sulaa sitten dekstroosiperunapistooli ja anna sen jäähtyä 45 ° C: ssa. Kaada Petri -levyn yli ja pyöri, kunnes homogenisoi. Jätä levossa, kunnes.

Inkuboi aerobioosissa 20-25 ° C: ssa (muotit) tai 30-32 ° C: ssa (hiivat) vähintään 5-7 päivää, riippuen haettavan sienten tyypistä ja näytetyypistä. Kaksi levyä voidaan käyttää molempien lämpötila -alueiden inkubointiin.

Sienipesäkkeiden professori ruuanäytteessä. Dekstroosi peruna -agar, jota on täydennetty antibiooteilla. Lähde: Pxhere.com valokuva/777267

Sienikantojen ylläpito

Dextrose -paavi -agaria voidaan käyttää elinkelpoisten sienikantojen ylläpitämiseen useita vuosia.

Tätä varten sieniä viljellään dekstroosiperunakiiloissa ja kun sieni on kasvatettu, se peitetään mineraaliöljyllä. Öljy on sterilooitava autoklaavessa 45 minuutin ajan, ja niiden viskositeetti on 300 - 330 Sayboltia. Öljyn on oltava yli 1 - 2 cm kehyksen kärjen.

QA

Jokaisesta valmistetusta erästä on otettava 1 tai 2 levyä ja inkuboitettava 25 ° C: ssa 48 tunnin tai 20 ° C 96 tunnin ajan. Hyvä steriiliyshallinta on sellainen, jossa pesäkkeiden kehitystä ei havaita.

Voit myös käyttää tunnettuja tai sertifioituja ohjauksia, kuten:

Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763, Candida albicans ATCC 10231, Aspergillus brasiliensis ATCC 16404, Trichophyton Mentagrophyyt ATCC 9533. Kaikissa tapauksissa odotetaan hyvää kasvua.

Viitteet

1. Britannia Laboratories. Glycosado -astia. 2015. Saatavana osoitteessa: Britanialab.com
2. Neogen -laboratoriot. Dekstroosiperuna. Saatavana osoitteessa: FoodSefety.Neogen.com
3. Laboratorio. Dekstroosi peruna -agar. Saatavana osoitteessa: Insusolab.Cl
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott -mikrobiologinen diagnoosi. 12 Ed. Pan -American toimitus.-Lla. Argentiina.
5. Talon talo G. Yleinen mykologia. 1994.  2. painos. Venezuelan keskusyliopisto, Library Editions. Venezuela caracas.
6. Aceituno m. Pharmacoea USP 2005: n mukaan mikrobiologisen laadun arviointi, kompakti pölytyyppi kansallisen tuotantolaboratorion mukaan. Opinnäytetyö farmaseuttisen kemian otsikon valitsemiseksi. San Carlosin yliopisto Guatemalasta.
7. Cuétara m. Pintanäytteiden käsittely. Ibero -American Mycology Magazine. 2007; pp. 1-12