TCBS Agar Mikä on, perusta, valmistelu, käyttö

Hän TCBS -agar Se on erittäin selektiivinen ja erilainen kiinteä viljely, jota käytetään Vibrio -suvun bakteerien eristämiseen ja viljelyyn, erityisesti Vibrio cholerae, V. Vulnificus ja V. parahaemolyticus Tämän genren pääpatogeeneinä.

Lyhenne TCB: t tarkoittavat tiosulfaatti sappisitraattia. Tätä agaria tunnetaan myös selektiivisenä väliaineena värähtelyille. Alkuperäisen kaavan on luonut Nakanishi ja myöhemmin Kobayashi.

Se koostuu hiivauutetta, lihan peptonia, tripeeniä, natriumsitraattia, natriumtiosulfaattia, härän sappia, sakkaroosia, natriumkloridia, rautasitraattia, bromoolin sinistä, tymolin sinistä ja agaria.

Tämä koostumus mahdollistaa Vibrium -lajien riittävän kehityksen veden, ruoan ja ulosteiden näytteistä; paitsi Vibrio Hollisae, Se ei kasva tässä väliaineessa. Lisäksi TCBS -väliaine pystyy estämään muiden mukana olevien bakteerien, erityisesti koliformien, kasvua.

Vakavien maha-suolikanavan ja internimation-ongelmien vuoksi, joita jotkut Vibrio-suvun lajit tuottavat, niiden diagnoosi on erittäin tärkeää. Ihminen on pääosin tartunnan saanut raaka- tai vähän keitetyn meren tai saastuneiden vesien kulutusta, mutta myös haavainfektioiden kautta.

Tämän vuoksi kliinisiin laboratorioihin on sisällytettävä TCBS -agar nestemäisten jakkaranäytteiden kopioiden tutkimiseen, etenkin riisiveden ulkonäön kanssa. Varsinkin jos potilas viittaa siihen, että hän on ollut yhteydessä meriveteen tai kuluttanut äyriäisiä tai kaloja.

Perusta

Hiivojen, lihan petotonit ja tripteína ovat tämän väliaineen ravitseva lähde. TCBS Agar on kuitenkin useimmille bakteereille.

Sen korkea selektiivisyys antaa natriumsitraatin ja härän sapen aggregaatilla; Molemmat ovat estäviä aineita, jotka tarjoavat myös alkalisen pH: n väliaineelle, rajoittaen mukana olevan kasvistoa ja suosimalla kasvua V. Kolerae, muun muassa. Erityisesti Vibrio cholerae on hyvin herkkä happamuudelle.

Natriumkloridi tasapainottaa puolestaan ​​ympäristön osmoottisesti tasapainoa. Lisäksi, koska sen pitoisuus on korkea, se toimii myös estäjänä, joka suosii halofiilibakteerien kasvua.

Tarcks on käyttävä sokeri, joka yhdessä sinisen bromotimolin sinisen ja sinisen pH -indikaattorien kanssa antavat keskipitkän differentiaalisen merkin. Tästä syystä tällä väliaineella on mahdollista erottaa fermentointikannat, jotka eivät ole fermentointia.

Sakkaroosin käyvien kantojen pesäkkeet kehittyvät väriltään ja muuttavat väliaineen vihreästä keltaiseksi tuottamalla happoja. Määräyttämättömät läpikuultavat kasvavat ja alkuperäisen värin (vihreä) väliaikainen jäännökset.

Samoin tämä väliaine sisältää natriumtiosulfaattia rikki- ja rautasitraatin lähteenä paljastavana aineena. Molemmat osoittavat bakteereja, jotka kykenevät tuottamaan rikkivety (väritön kaasu). H₂S muodostuu tiosulfaatista ja reagoi sitten ferrit sitraatin kanssa näkyvä musta sakka muodostuu.

Lopuksi agar on se, joka tarjoaa kiinteän konsistenssin ympäristölle.

Valmistautuminen

Punnitse 89 g dehydratoitua väliainetta ja liukene litralle tislattua vettä. Auta liukenemista usein lämmitykseen ja levottomuuteen. Seosta voidaan keittää jopa 2 minuuttia.

Tämä väliaine ei autoklava. Liuoksensa jälkeen se tarjoillaan suoraan steriileillä levyillä. Kiinteyttämällä ne tilataan käänteisesti verihiutaleissa ja ne varastoidaan jääkaapissa (2-8 ° C), kunnes käyttö.

Väliaineen jälkeen valmistetun väliaineen on oltava pH: ssa 8,6 ± 0,2.

Dehydratoidun väliaineen väri on vaalea beige tai beige-vihreä, ja median väri on vihreä metsä tai sininen vihreä.

On tärkeää antaa levyjen malttinsa ennen näytteiden kylvää.

Käyttää

Yleisin näyte ulottuvan eristyksen suhteen on ripulin uloste.

Jakkaranäytteitä ei voida kylvää heti valikoivaan ympäristöön, ne on kuljetettava Cary Blairin keskellä.

Sadon herkkyyden lisäämiseksi Peptonada -vesi voidaan siirtää ulosteet 8,4: een rikastusvälineeksi 8 tunnin ajan, sieltä se on subjektiivinen TCBS -väliaineeseen.

On myös syytä pitää mielessä, että jotkut ulottuvat kannat voivat aiheuttaa septikemiaa immunosuppressoiduilla potilailla, joten ne voidaan eristää veriviljelmistä. Samoin meren näytteitä ja ruokia voidaan analysoida, kun kolerataudin epidemia on puhkeamista.

Kylvää

Tutkittavan näytteen ymppäyksen on oltava näkyvää, kylvö suoritetaan uupumuksen kiinnitysmenetelmällä. Levyjä inkuboidaan 37 ° C: ssa 24 tunnin ajan aerobioosissa.

Oletetut siirtokunnat Vibrio cholerae Ne ovat keskipitkiä, sileitä, läpinäkymättömiä, ohuita ja keltaisia ​​reunoja, koska ne käyvät sakkaroosia.

Vastaavasti kasvattaa lajeja V. Alginolyticus, V. joki, V. Hareyi, V. Cincinnatensis, v. Furnissii, v. Metschnikovii ja hieman V. Vulnificus. Muut kliinisesti tärkeät lajit, kuten V. parahaemolyticus Ne eivät käy sakkaroosia, kehittyen oliivinvihreinä pesäkkeinä.

Toisaalta on pidettävä mielessä, että jotkut aeromonien ja plesiomonien kannat, jotka ovat oksidaasi (+), voivat kasvaa tässä väliaineessa, kehittäen keltaisia ​​pesäkkeitä, jotka voivat sekoittaa kliinisen lääkärin. Vaikka jotkut pseudomonaskannat myös oksidaasi (+) kasvavat vihreinä pesäkkeinä sekä V. parahaemolyticus.

Rajoitus

Vibrio -suvun positiivista oksidaasitestiä ei saa koskaan suorittaa TCBS -agarista saatuista pesäkkeistä, koska saatu tulos on väärä negatiivinen. Väliaineen yhdisteet häiritsevät voimakkaasti tässä testissä. Siksi se on tehtävä veriagarissa.

QA

Todistaa, että väliaine on hyvässä kunnossa, se on suositeltavaa.

Tätä varten voit käyttää kantoja:

-Vibrio cholerae - Tyydyttävä kasvu (keltaiset pesäkkeet, läpikuultava reuna).

-Vibrio parahaemolyticus - Tyydyttävä kasvu (siirtomaa vihreällä keskuksella ja läpikuultavalla reunalla).

-Vibrio Alginolyticus ATCC 17749 - Tyydyttävä kasvu (keltaiset pesäkkeet, joissa on samanväriset halot pesäkkeen ympärillä).

-Enterococcus faecalis ATCC 29212 - Kokonais- tai osittainen estäminen (pieni keltainen tai läpikuultavat pesäkkeet).

-Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853- Osittainen tai kokonais estäminen (siniset pesäkkeet).

-Escherichia coli ATCC 25922 - täysin estetty.

-Proteus mirabilis ATCC 43071 - kokonais- tai osittainen esto. (Pienet pesäkkeet vihreän reunan läpikuultava reuna).

Väliaineen inkubointi ilman inokulointia ei pitäisi olla muutosta.

Viitteet

1. BD -laboratorio. Bd. TCBS -agar. Saatavana osoitteessa: BD.com
2. Britannia Laboratories. Keskipitkä TCBS. Saatavana osoitteessa: Britanialab.com