Agar si mikä on, perusta, valmistelu, käyttää

Hän Tsi -agar o Kolminkertainen sokerirauta -agar on kiinteä viljelyalusta, joka toimii biokemiallisena testinä gram -negatiivisten bacillien alkuperäisen tunnistamisen ohjaamiseksi. Se perustuu todisteisiin.

Sen koostumus ja perusta ovat hyvin samankaltaisia ​​kuin Kigler Hierro -testi, erolla, että jälkimmäinen sisältää vain glukoosia ja laktoosia. Toisaalta - Nimi osoittaa - Kolminkertainen sokerirauta -agar sisältää kolme käymiskelpoista hiilihydraattia: glukoosi, laktoosi ja sakkaroosi.

Lisäksi TSI -elatusaineessa on neljä proteiinijohdannaista, jotka tekevät siitä erittäin ravitsevan agarin: hiivauutetta, lihauutetta, peptoni- ja peptoniproteiinia. Se sisältää myös rauta -ammoniumsulfaattia, natriumtiosulfaattia, natriumkloridia, fenolipunaista ja agaria.

Mikro -organismin kyvyttömyys käymään ympäristössä läsnä olevan glukoosin käymisessä välittömästi pois kuulumisesta Enterobacteriaceae -perheelle. Siksi tämä testi on välttämätöntä, jotta voidaan päättää, mikä tunnistusreiti on kuljetettava sukupuolen ja lajien määrittämiseksi.

Jokainen laboratorio päättää, toimiiko se TSI -agarin vai Kligler Hierron kanssa.

Perusta

Jokainen yhdistetty täyttää toiminnon väliaineen sisällä.

Natrium- ja agarikloridi

Natriumkloridi on välttämätön väliaineen osmoottisen tasapainon ylläpitämiseksi. Vaikka agar antaa sinulle vankan konsistenssin.

PH -indikaattori (fenoli punainen)

Valmistettu väliaineen pH on tasapainossa 7,3: lla ja pH -indikaattori (fenoli punainen) muuttuu keltaiseksi alle 6,8. Tämä tarkoittaa, että sokerien käymisellä tuottamat pienet määrät happoja muuttavat punaisen oranssin keltaiseksi väliaineeksi.

Jos sitä ei tapahdu.

Proteiinijohdannaiset (hiivauute, lihauute, peptoni ja peptoniproteiini)

Kun bakteerit metaboloivat TSI -agarissa läsnä olevia proteiineja, tuotetaan amiinia, jotka alkaloivat väliaineen (lähinnä kehon tasolla), koska reaktio tarvitsee happea. Amiinit kääntävät kehyksen voimakkaaseen punaiseen.

Mutta tämä riippuu fermentointibakteerien tai ei hiilihydraattien kyvystä.

Hiilihydraattien käyminen (glukoosi, laktoosi ja sakkaroosi)

Sokerien käyminen voi antaa useita kuvia ja jokainen tulkitaan eri tavalla. Testin tulkinta jakaa mikro -organismit kolmeen luokkaan: ei -glukoosikuljettajat, ei -lactoos -fermenterit ja laktoosi/sakkaroosifermenterit.

On huomattava, että glukoosin määrä keskellä on rajoitettu, kun taas laktoosin ja sakkaroosin pitoisuus on 10 kertaa korkeampi.

Enterobacteriaceae -perheen ja muiden glukoosin käyvien mikro -organismien bakteerit alkavat käydä tätä sokeria, koska yksinkertaisin hiilihydraatti on energian saamiseksi energian saamiseksi energian saamiseksi.

Voi palvella sinua: isotoninen ratkaisu: komponentit, valmistelu, esimerkit

Toisaalta laktoosi ja sakkaroosi ovat monimutkaisia ​​hiilihydraatteja, jotka on hajotettava ja muuttuvat glukoosiksi, jotta ne voivat päästä Embden-Meyerhof-sykliin.

-Ei -fermenttiset mikro -organismit

Kun inokuloitu mikro -organisme ei kykene käymään glukoosia, paljon vähemmän voi käydä muita hiilihydraatteja. Siksi happoja ei muodosteta tässä, mutta kehyksessa on amiinimuodostumista peptonien käytöstä johtuen.

Tässä tapauksessa viiste muuttuu vahvaksi.

Tulkinta: k / k tarkoittaa alkaliviettä / emäksistä tai neutraalia tausta

Katso artikkelin alussa löydetty kuva putken d kuva.

Tämä tulos osoittaa, että mikro -organisismi ei kuulu Enterobacteriaceae -perheelle.

-Laktoosin/sakkaroosin ei -fermenttiset mikro -organismit

Jos bakteerit kykenevät käymään glukoosia, mutta ei laktoosia tai sakkaroosia, seuraava tapahtuu:

Bakteerit kuluttavat kaikki noin 6–8 tunnin kuluttua läsnä olevat glukoosit kyvyn happamaan sekä kehon että tacon; toisin sanoen agar on täysin muuttunut keltaiseksi. Mutta kun glukoosi on käytetty loppuun ja ottaen huomioon laktoosin ja sakkaroosin käytön mahdottomuuden, bakteerit alkavat proteiinien aineenvaihduntaa.

Tämä reaktio tarvitsee happea, joten peptonas hajoaminen tapahtuu pinnalla (kehys). Amiinit tuottivat alkleinisoivan viiste käämitys keltaiseen punaiseen. Tämä reaktio näkyy 18–24 tunnin inkubaatiossa.

Tulkinta: k/a tarkoittaa alkalista kehä- ja happotaco.

Artikkelin alussa löydetyssä kuvassa katso putken B kuva.

-Fermentary/sakkaroosin fermentointi mikro -organismit

Mikro -organismit, jotka kykenevät käymään laktoosia ja sakkaroosia. Sen jälkeen kun väliaineessa esiintyvä glukoosin määrä on käytetty, muodostettu pyruvaatti alkaa metabolisoida happojen muodostamiseksi Krebs -aerobisen syklin läpi, ja 8–12 tunnin ajan koko väliaine on keltainen.

Jos bakteerit kykenevät avaamaan laktoosin tai sakkaroosin, happoja tuotetaan edelleen ja 18–24 tunnin kuluttua koko putki -bisel ja taco- jatkavat keltaista.

On huomattava, että glukoosin käyttö vie.

Tulkinta: A/ A tarkoittaa happoviettä/ happotausta. Voi esitellä kaasua vai ei.

Artikkelin alussa löydetyssä kuvassa katso putken a kuva a.

Voi palvella sinua: sytosiini: rakenne, toiminnot, ominaisuudet, synteesi

Kaasuntuotanto

Jotkut mikro -organismit kykenevät tuottamaan kaasua sokerien käymisen aikana. Kaasu näkyy putkessa, koska se kohdistaa agarin sisällä. Paine aiheuttaa kuplien muodostumisen tai agarin siirtymisen. Joskus kaasun muodostuminen voi murtua ympäristöön.

On tärkeää, että kylvää TSI -väliainetta, puhkaisu tehdään puhtaasti agarin keskustan läpi, kunnes se on päässyt pohjaan. Jos puhkaisu poikkeaa putken seinämiin, se voi aiheuttaa vääriä positiivisia kaasuntuotannossa, koska se poistuu kanavasta muodostettuna virheellisesti.

Kaasun tuotanto sekä agar -viisteessä tapahtuvat reaktiot tarvitsevat happea, siksi on suositeltavaa, että putki peitetään puuvillakorkilla, ja jos käytetään baqueliittiä kannetta, sitä ei pidä säätää kokonaan.

Kaasuntuotannon ilmoitetaan positiivisena (+) tai negatiivisena (-).

Natriumitiosulfaatti ja rauta -ammoniumsulfaatti (rikkivetytuotanto)

Bakteerit, jotka kykenevät tuottamaan rikkivety (väritön kaasu), ottavat natriumtiosulfaatin rikki, joka on läsnä väliaineessa. Kun H on muodostettu₂S reagoi rauta -ammoniumsulfaatin kanssa, tuottaen rautasulfidia (selvästi näkyvä musta sakka).

H₂S ilmoitetaan positiivisena (+) tai negatiivisena (-).

Artikkelin alussa löydetyssä kuvassa katso putken C kuva.

Valmistautuminen

Punnitse 62,5 g puoliarvoa, joka on sukula -rauta -agar (TSI) kuivunut ja liukenee litrassa tislattua vettä.

Kuuma agarin liuottamiseksi. Kiehua. Jakele 4 ml väliainetta 13/100 testiputkissa puuvillakansilla.

Steriloi autoklaavissa 121 ° C: ssa 15 minuutin ajan. Poista autoklaavista ja anna olla kalteva. On huolehdittava siitä, että sekä pohjalla että viistolla on sama etäisyys.

Säilytä 2-8 ° C-jääkaapissa. Anna malttin ennen kylvää bakteerikanta.

Dehydratoidun väliaineen väri on kevyt beige ja valmistettu väliaine on punainen oranssi

Valmistetun väliaineen lopullinen pH on 7,3 ± 0,2.

Sovellukset

TSI -testiä käytetään laajasti mikrobiologian laboratoriotasolla. Tämä testi on välttämätön ohjaamaan testityyppiä, jota on käytettävä suvun ja lajien tunnistamiseen. Hyvä suorituksesi ja tulkintasi voivat säästää materiaalia ja toimia.

Jos tulos on TSI K/K K ja sytokromioksidaasitesti antaa positiivisen, testejä olisi käytettävä ei -fermentoimattomien gram -negatiivisten bacillien, kuten pseudomonien, alkalisten, Achromobacterin, burkholderien tunnistamiseen, muun muassa genrejä. Jos se on negatiivinen oksidaasi, se on suunnattu acinetobacteriin, stenotrophomonasiin jne.

Se voi palvella sinua: TOTIPOTENNENTYYS: Historia, ominaisuudet ja merkitys

Toisaalta, jos saadaan TSI A/A tai K/A ja sytokromioksidaasitesti on negatiivinen, ne vähentävät nitriittejä nitriiteiksi, olemme varmoja siitä, että se on enterobacteriace -perheeseen kuuluva mikro -organismi. Tässä tapauksessa tunnistusreitti on suunnattu tämän bakteeriryhmän erityisiin testeihin.

Toisaalta, jos saadaan kuva K/A tai A/A ja sytokromioksidaasitesti on positiivinen, lisäkokeet kohdistetaan fermentointikantojen tunnistamiseen, jotka eivät kuulu Enterobacteriaceae -perheeseen, kuten: Aeromonas , Plesiomonas, Vibrio ja Pasteurella.

TSI, jossa on rikkivety, negatiivinen oksidaasi, ohjaa seuraavia Enterobakteeriae -perheen tyylilajeja: Proteus, Citrobacter, Edwardsiella, Leminorella, Pragia, Trabusiella tai Salmonella.

TSI, jossa on niukasti tai kohtalainen rikkivety, joka on alkalisella pohjalla ja positiivisella oksidaasilla, ohjaa testejä ei -fermentoimattomien GRAM -negatiivisten bakteerien tuottavien tuottajien tunnistamiseksi H: n tunnistamiseksi₂S, kuten Shewanella putrefaciens.

Lopuksi, TSI: tä voidaan käyttää rikkivetytuotannon tutkimiseen grampositiivisissa bakteereissa, etenkin kun epäillään Erysipelothrix rhusipathiae.

Kylvää

TSI -elatusaine on siirrostettava puhtailla pesäkkeillä, eristetty primaarisissa tai selektiivisissä viljelykasveissa. Jos pesäke on otettu selektiivisistä keinoista, jotka kylvettiin näytteillä, joilla on sekoitettu kasvisto, on otettava varovainen vain pinnalta, koska pesäkkeen alaosassa voi olla elinkelpoisia kantoja, jotka ovat estettyjä kyseisessä väliaineessa.

Siksi kahvan ei tulisi koskaan jäähtyä selektiivisessä väliaineessa ja ottaa sitten pesäke ja siirrä TSI -väliaine.

Kylvö tehdään suoralla tai neulalla. Syytös suoritetaan, huolehtiminen siitä, että se on keskikohdan läpi, kunnes se saavuttaa pohjan, ja sitten kylvö on valmis inokuloimalla siksak -muotoinen pinta. Älä tee kahta puhkaisua.

Inkuboi 37 ° C: ssa aerobioosissa 18–24 tunnin ajan. Tulkitse tällä hetkellä, ei ennen.

Rajoitukset

TSI -testi olisi luettava 18–24 tuntia inkubaatiota. Lukeminen ennen tätä aikaa voi antaa väärän käymisen a/a. Kun taas tämän ajan kuluttua lukeminen voi johtaa väärään negatiiviseen kuvaan ei -fermenteristä, johtuen peptonien kulutuksesta, joka Alkalisoi median.

Viitteet

1. Britannia Laboratories. TSI -agar (kolminkertainen sokeriraudan agar). 2015. Saatavana osoitteessa: Britanialab.com
2. BD -laboratoriot. Kolminkertainen sokerirauta -agar (TSI Agar). 2003. Saatavana osoitteessa: BD.com