Urea liemi mikä on, perusta, valmistelu, käyttää

Hän Urealiemi Se on nestemäinen viljelyalusta, jota käytetään osoittamaan ureasan entsyymin esiintyminen tietyissä mikro -organismeissa. UreasA on mikrobien entsyymi, joka tapahtuu konstitutiivisesti, ts. Se syntetisoidaan riippumatta siitä, että se on substraatti, jolla se toimii.

Ureasan toiminta liittyy orgaanisten yhdisteiden hajoamiseen. Kaikki mikro -organismit eivät kykene syntetisoimaan tätä entsyymiä, joten sen määrittäminen laboratoriossa antaa sinun tunnistaa tietyt bakteerikannot ja jopa erottaa saman sukupuolen lajit.

Urea -testiä on kahta tyyppiä: Stuart ja Christensen. Ne eroavat koostumuksestaan ​​ja herkkyydestään. Ensimmäinen on erityinen, että proteiinien lajien tuottama suuri määrä ureasua on suuri määrä ureasua.

Toinen on herkempi ja voi havaita pienet määrät Ureasea viime aikoina muiden bakteerigenrejen, kuten Klebsiella, Enterobacter, Staphylococcus, Brucella, Bordetella, Bacillus, Micrococcus, Helicobacter ja Mycobacterium.

Stuartin urea -liemi koostuu ureasta, natriumkloridista, dipotassumfosfista.

Vaikka Christensenin lieme tai urea-kahva koostuu peptonoista, natriumkloridista, monopotásic-fosfaatista, glukoosista, ureasta, fenolipunaisesta, tislattua vettä ja agar-gutaatiota. Jälkimmäinen vain, jos se on kiinteä väliaine.

Perusta

Ureasa -entsyymi hydrolysoi ureaa hiilihydridin, veden ja kahden ammoniakkimolekyylin muodostamiseksi. Nämä yhdisteet reagoivat lopullisen tuotteen muodostamiseksi, nimeltään ammoniumkarbonaatti.

Urea de stuart -liemi

Stuartin urea -liemi on puskuroimpi pH: lla 6,8. Siksi mikro -organismin on kyettävä muodostamaan suuria määriä ammoniumia fenolin punaisen kääntämiseksi. PH: n on nouseva yli 8.

Siksi Stuartin urealiemi on selektiivinen Proteus -lajeille, mikä antaa positiivisia tuloksia 24 - 48 tunnissa inkubaatiossa, eikä se ole tehokas bakteereille, jotka tuottavat muutamia määriä ureasia tai jotka hitaasti hydrolysoivat ureaa.

Tämä johtuu siitä, että Proteus -lajit pystyvät käyttämään ureaa typen lähteenä. Toisaalta muut bakteereja tuottavat Ureasat tarvitsevat ylimääräisen lähteen.

Se voi palvella sinua: sukkinaattidehydrogenaasi: rakenne, toiminta, säätely, sairaudet

Pérez et ai. (2002) totesivat, että Stuartin urealiemi oli yhtä tehokas kuin Christensenin urea -agar, määrittääkseen Ureasan valikoiman hiivakannoilla.

Tutkimuksen kirjoittajat väittävät saavuttaneensa 100% sattumaa sekä median (Stuart että Christensen) kanssa inkuboimalla 24 ja 48 tuntia; Poikkeuksen tekeminen siitä, että kantoja, jotka onnistuivat kääntämään median voimakkaaseen vaaleanpunaiseksi fucsia -väriksi, olivat positiivisia.

Tämä selitys on välttämätöntä, koska Lodder (1970) sanoi, että melkein kaikki hiivat onnistuvat sijoittamaan urean kehyksen Christensen ureaan vaalealle rosadolle. Tämä johtuu siitä, että ne voivat hydrolysoi ureaa minimaalisesti määrinä ja amiinien muodostumiseen pinta -aminohappojen oksidatiivisella dekarboksylaatiolla. Tätä ei pidä tulkita positiiviseksi.

Christensenin urealiemi tai agar

Christensenin urealiemi tai agar on vähemmän puskuroitu, kykenevä havaitsemaan pienet määrät ammoniumia. Lisäksi tämä väliaine on rikastettu peptonoilla ja glukoosilla. Nämä yhdisteet tekevät muista ureasista tuottavan mikro -organismeja, jotka eivät kasva Stuart -liemessä.

Samoin Christensenin ureakoe tarjoaa nopeampia tuloksia, etenkin Proteukselle, kyky antaa voimakkaasti positiivista vain 30 minuutissa vähimmäismääränä ja enintään 6 tunnina maksimiaikana.

Loput Ureasan tuottavat mikro -organismit onnistuvat kääntämään ympäristön värin hieman 6 tunnin kuluttua ja voimakkaasti 24, 48, 72 tuntia tai enemmän, ja jopa jotkut kannat voivat antaa heikkoja reaktioita 5 tai 6 päivän kuluttua.

Sekä median tulkinta (Stuart että Christensen)

Medium on alun perin kelta-oranssi ja positiivinen reaktio muuttaa värin keskipitkästä vaaleanpunaiseksi. Värin voimakkuus on suoraan verrannollinen tuotetun ammoniumin määrään.

Negatiivinen reaktio jättää alkuperäisen värin lukuun ottamatta hiivoja, jotka voivat antaa vaaleanpunaisen Christensenin Urea -medialla.

Valmistautuminen

Urea de stuart -liemi

Punnitse tarvittavat grammat kaupallisen talon viitteiden mukaan. Liuota mieluiten steriiliin tislattua vettä.  Älä käytä lämpöä liukenemiseen, koska urea on lämpöherkkä.

Voi palvella sinua: monosakkaridit

Kalvojen suodatusmenetelmän steriloimiseksi käytetään. Tätä varten käytetään Millipors -suodatinta, jonka huokoset ovat 0,45 µ. Älä käytä autoklaavia. Kun liuos on suodatettu, se on jaettu steriileihin putkiin. Luotettavien tulosten saamiseksi välillä 1,5 ml on siirrettävä vähimmäismääränä 3 ml: n enimmäismääränä putkea kohden.

Pidä jääkaapissa ja malttinsa ennen käyttöä.

Jos suodatusmenetelmää ei ole saatavana, väliainetta on käytettävä välittömästi luotettavien tulosten saamiseksi.

Toinen tapa valmistaa Stuartin urealieme on seuraava:

Jotkut kaupalliset talot myyvät ureakokeen perusväliaineen, lukuun ottamatta ureaa.

Kaupallisen talon ilmoittama määrä punnitaan. Se liukenee tislatussa vedessä ja steriloidaan autoklaavessa 121 ° C: ssa 15 minuutin ajan. Anna seistä vähän ja kun väliaine on lämmin 100 ml 20%: n valmistettua urealiuosta ja suodatus suodatetaan.

Se on jaettu steriileihin putkiin, kuten yllä on kuvattu.

Christensenin urealiemi tai agar

-Urea liuoksen valmistelu

Punnitse 29 g dehydratoitua ureaa ja liukene 100 ml: aan tislattua vettä. Käytä suodatusmenetelmää steriloidaksesi. Ei autoklaatiota.

-Urea -pohja agar

Liuota 24 g dehydratoitua emästä 950 ml: aan tislattua vettä. Steriloi autoklaavissa 121 ° C: ssa 15 minuutin ajan. Anna seistä, kunnes se saavuttaa lämpötilan 50 ° C ja lisää urea, joka on aiemmin valmistettu aseptisella tavalla.

Kaada 4-5 ml steriiliin putkiin ja kallistuu, kunnes ne jähmettyy. Pitkän huilun huipun on oltava.

Tämä väliaine voidaan myös valmistaa nestemäisessä muodossa.

Sovellukset

Urea -testi on erittäin tehokas erottamaan proteus -genre muista Enterobacteriaceae -perheen genreistä, kun otetaan huomioon Proteuksen tarjoama nopea reaktio.

Jos käytetään Christensenin koostumusta, testi auttaa erottamaan lajit samasta suvusta. Esimerkiksi, S. Hemolyticus ja s. Warneri SPÄÄLLÄ Staphylococcus negatiivinen ja beetahemolyyttinen koagulaasi, Mutta ne eroavat siitä, mitä S. Hemolyticus Se on negatiivinen ja S. Warneri Se on positiivinen urea.

Voi palvella sinua: Entinen hermosto

Toisaalta McNulty käytti menestyksekkäästi 2% Christensenin urealiemiä tutkiakseen Helicobacter pylori Biopsianäytteissä, jotka on otettu mahalaukun limakalvosta (Antraal -alue).

Läsnäolo H. pylori Se käy ilmi positiivisella ureakokeella. Tulosten tarkkailun kesto on suoraan verrannollinen läsnä olevien mikro -organismien määrään.

Kuten voidaan nähdä, se on yksinkertainen menetelmä diagnoosille Helicobacter pylori Mahalaukun biopsioissa.

Lopuksi, tämä testi on hyödyllinen myös lajien erottamiseksi genreistä Brucella, Bordetella, Bacillus, Micrococcus ja Mycobakteerit.

Ureakoe kylvetty

Nämä kaksi menetelmää vaativat vahvan mikrobien siirroksen tulosten optimoimiseksi. Bakteeripesäkkeet otetaan mieluiten Sabouraud -agarin veriagarista ja hiivoista, lukuun ottamatta joitain poikkeuksia. Inokulum on emulgoitu nestemäisessä ympäristössä.

Stuartin urealiemelle 37 ºC inkuboituu 24 - 48 tuntia tietäen, että se etsii vain proteiinien kantoja, kun kanta on bakteeri. Hiivoille voit inkuboida 37 ° C: ssa tai huoneenlämpötilassa 24 - 48 tuntia inkubointia.

Christensenin urealiemeessä 37 ºC inkuboituu 24 tuntia. Jos testi on negatiivinen, sitä voidaan inkuboida jopa 6 päivän ajan. Jos testi antaa positiivisen ennen klo 6, se osoittaa, että se on proteiinigenren kanta.

Christensenin urea -agarin tapauksessa agarin kehys on voimakkaasti ympätä, ilman puhkeamista. Liemi on inkuba ja tulkitsee samalla tavalla.

QA

Väliaineen testaamiseksi voit käyttää säätimien säätimiä, kuten Proteus mirabilis ATCC 43071, Klebsiella pneumoniae  ATCC 7006003, Escherichia coli ATCC 25922 ja Salmonella typhimurium.  Kahden ensimmäisen on annettava positiivisia tuloksia ja kaksi viimeistä negatiivista tulosta.

Viitteet

1. Britannia Laboratories. Christensen Media (Urea Base Agar). Saatavana osoitteessa: Britanialab.com