Fosfaattipuskurin (PBS) -säätiö, valmistelu ja käyttö

Hän fosfaattipuskuri, BPS tai suolaliuosfosfaattipuskuri Se on puskuri ja isotoninen ratkaisu, jonka tehtävänä on ylläpitää pH: ta ja osmoottista painetta lähinnä luonnollista (fysiologista) ympäristöympäristöä. Lyhenne PBS tarkoittaa fosfaattipuskuroitua suolaliuosta.

PH ja osmolaarisuus ovat kaksi erittäin tärkeää näkökohtaa, joita on valvottava tietyissä laboratorioprotokollissa. PH: n tapauksessa on välttämätöntä, että sitä hallitaan, etenkin biokemiallisissa reaktioissa, koska ne voivat vaihdella tai ei suorita, jos reagenssit ovat sopimattomassa pH: ssa.

Puskurin salino PBS -fosfaatti kahdessa eri pH: ssa. Lähde: Pixinio.com

Osmolaarisuuden hallinta on välttämätöntä etenkin kun työskentelet elävien solujen kanssa, koska solujen plasmamembraanit reagoivat liuenneiden aineiden pitoisuuden mukaan, joissa niitä löytyy.

Jos solut siirretään hypertoniseen väliaineeseen, ne dehydraatit, koska vesigradientti kuljetetaan sivulle, jossa liuenneita aineita on suurempi pitoisuus. Jos päinvastoin, solut sijoitetaan hypotoniseen väliaineeseen, solut imevät nestettä valehteluun asti.

Siksi käytetään laboratorioprotokollia, jotka vaativat solujen ylläpitoa In vitro, Tällä tavoin solut eivät vaurioitu.

PBS koostuu suolojen yhdistelmästä, kuten natriumkloridi, natriumfosfaatti, kaliumkloridi ja kaliumfosfaatti. PBS -koostumus voi vaihdella protokollasta riippuen.

[TOC]

Perusta

Periaatteessa suolaliuosfosfaattipuskurin tehtävänä on ylläpitää vakio fysiologista pH: ta elektrolyyttisen pitoisuuden vieressä, joka on samanlainen kuin organismin sisällä.

Tässä ympäristössä solut kykenevät pysymään vakaana, koska fysiologiset olosuhteet simuloivat niin paljon kuin mahdollista.

Alkuperäiseen PBS -formulaatioon voidaan lisätä muita tarvittavia yhdisteitä, esimerkiksi EDTA: n lisääminen puskuriin on hyödyllinen punasolujen pesulle ristin yhteensopimattomuudessa.

EDTA estää seerumissa läsnä olevan komplementin C1 osuuden, jakautuvan ja rikkoutumisen punasoluihin, ts. Vältä vääriä tuloksia yhteensopimattomuudesta. Lisäksi EDTA auttaa dissosioitumaan soluja.

Voi palvella sinua: fylogeneettinen puu: tyypit ja niiden ominaisuudet, esimerkit

Valmistautuminen

Suolan fosfaatti -PBS: n kehittämiselle on punnittava suolojen määrä riippuu valmistukseen tarvittavasta määrästä:

-Liuosliuospuskuri salino -phfosfaatti (PBS 10x)

Litrasta ratkaisua:

Punnita:

80,6 g NaCl,

2,2 g kclia,

11,5 g NA: ta₂HPO₄,

2,0 g kh₂HPO₄

Valmistustekniikka

Aseta dekantterilasiin raskaat suolat, lisää tarpeeksi vettä (80%) ja sekoita sekoituslevy magneettiseen tankoon, kunnes suolat liukenevat.

PBS . Lähde: Käyttäjä: Ruhrfisch, Wikipedia. com

Suodatin purkautuneiden hiukkasten poistamiseksi. Käytä suodattimia, joissa on 0,45 um huokoset. Autoklaavi sterilice ja jakautuu aseptisesti laminaarivirtauskello lasipurkkeihin kannen kanssa.

10x -liuokseen (väkevöity) ei säädä pH: ta. Säätö tehdään laimennettuna puskurin PBS 1x -konsentraatioon (laimennus 1:10).

-Suolaliuosfosfaattipuskuri (PBS 1x)

PBS 1x voidaan valmistaa suoraan, punnitsemalla vastaavat määrät kunkin suolan tai voi valmistaa äidin liuoksen (1:10) laimentamisen steriilillä tislatulla vedellä.

-Valmistella litran suolaliuosfosfaatti PBS 1x -pelissä: pahoillani:

8,06 g NaCl,

0,22 g KCL: tä,

1,15 g NA: ta₂HPO₄,

0,20 g kh₂HPO₄

Valmistustekniikka

Jatka väkevässä liuoksessa selitettynä. Myöhemmin pH on säädettävä. Tätä varten mittaa pH ja tuloksesta riippuen käytä happoa (HCL) tai emästä (NaOH) pienentääksesi tai ladata pH: n vastaavasti tarvittaessa, kunnes se on 7,4.

Happo tai emäs lisätään pudottamalla pudottamalla samalla kun seurataan liuoksen pH-arvoa käyttämällä pH-mittaria. Suodatin, autoklaavin sterilice ja jakautuu aseptisesti kartiomaisiin putkiin tai pulloihin tarvittaessa.

-PBS 1x: n valmistaminen 10x äiti -liuoksesta:

Tee laimennus 1:10. Esimerkiksi 1 litran PBS 1x: n valmistamiseksi mitat 100 ml äiti -liuosta ja lisää 700 ml steriiliä tislattua vettä. Säädä pH ja täytä veden määrä, kunnes se saavuttaa 1000 ml.

Voi palvella sinua: Suuntavalinta: Mikä on, määritelmä, esimerkit

Valmistettu PBS -puskuri on väritön ja läpinäkyvä.

Päivittäinen käyttö PBS voidaan varastoida huoneenlämpötilassa ja loput jääkaapissa.

.Ratkaisut pH -asetukseen

HCL

100 ml HCl: n (suolahappo) 1 molaariseksi.

Mittaa 91 ml tislattua vettä ja aseta se 250 ml: n kapasiteetin sakkaastialle.

Mittaa 8,62 ml vääntynyttä HCL: tä ja lisää se hitaasti vettä sisältävään dekantteriin (ei koskaan se ylösalaisin). Suorita asiaankuuluvat bioturvallisuustoimenpiteet vahvojen happojen käsittelyssä (erittäin syövyttävät aine).

Sekoita 5 minuuttia sekoittamalla levyä, jossa magneettinen tanko lasin sisällä. Mene 100 ml: n palloon ja huuhtele 100 ml: n lämpötilassa H: n kanssa₂Tai tislattu.

Naoh

100 ml: lle NaOH: ta (natriumhydroksidi) 10 molaarista.

Mittaa 40 ml tislattua vettä ja aseta se 250 ml: n kapasiteettiin dekantterilasi. Mittaa 40 g NaOH: ta ja lisää veteen. Sekoita sekoittamalla levyllä, jossa magneettinen palkki lasin sisällä.

Siirry 100 ml: n aggridipallot ja huuhtele tislatulla vedellä. Noudata bioturvallisuusstandardeja, koska tämä reaktio on eksoterminen (vapauttaa energiaa lämmön muodossa).

Jos haluat valmistaa muita määriä suolaliuosfosfaattiratkaisua, voit kuulla seuraavaa taulukkoa:

Lähde: "Virus- ja ihmisen genomiikkalaboratorio, UASLP: n lääketieteellinen korkeakoulu"

Sovellukset

Pääasiassa sitä käytetään solubiologian laboratorioissa, immunologiassa, immunohistokemiassa, bakteriologiassa, virologiassa ja tutkimuksessa.

On ihanteellista tehdä solujen pesu sentrifugaation (punasolut), solujen monokapat pestiin, spektroskooppisissa ellipsometriatekniikoissa bakteerien biofilmien kvantifioinnissa, virusten solujen ylläpitämisessä, pesulaitteena epäsuoran tekniikassa immunofluoresenssi ja tekniikoissa monoklonaalisten vasta -aineiden karakterisoimiseksi.

Se myös kuljettaa soluja tai kudoksia, laimennelmina solujen laskemiseksi, soluentsyymien (tripsin) valmistelu biomolekyylien kuivumismenetelmän laimenneksi ja muiden reagenssien valmistelemiseksi.

Voi palvella sinua: Heterotroph Nutrition: Ominaisuudet, vaiheet, tyypit, esimerkit

Toisaalta Martin ja yhteistyökumppanit vuonna 2006 osoittivat, että PBS on hyödyllinen oikeuslääketieteellisissä laboratorioissa, erityisesti siittiöiden palautumisessa emättimen levityksestä tai peniksen emättimen solujen palautumisessa. Tällä tavalla se voidaan luoda, jos seksuaalista suhdetta on ollut.

Rajoitukset

-Jotkut PBS -puskurin tuo säilöntäaineeksi, jota kutsutaan natrium -atsidiksi. Tämä yhdiste voi tuottaa räjähtäviä aineita, jos se joutuu kosketuksiin lyijyn tai kuparin kanssa. Tästä syystä on otettava erityistä varovaisuutta, kun tämä viemäröinti hylätä tämä reagenssi. Jos tällä reitillä hylätään, on lisättävä runsaasti vettä laimentamaan maksimiarvoa.

-Fosfaattipuskuria ei tule lisätä sinkkiä, koska se saostaa joitain suoloja.

-Wangen ja yhteistyökumppanit vuonna 2018 päättivät, että PBS: n käyttö ei ollut sopiva perifeerisestä verestä uutetun primaarisen akuutin myeloidileukemian (AML) pesemiseen, koska monet solut menettävät hajotuksen, ja proteiinimateriaalin väheneminen suurella vähenemällä suurella vähenemällä proteiinimateriaalia suurella tasolla.

Siksi he määrittelivät, että AML -primaarisolut eivät pidä pestä PBS: llä varastoinnin jälkeen nestemäisessä typessä.

Viitteet

1. Coll j. (1993). Virologian diagnostiset tekniikat. Ed Díaz de Santos. 360 pg
2. Rodríguez M, Ortiz T. Soluviljelmä. Keskipitkän muutos. Sevillan normaalin ja patologisen histologian histologian laitos. Saatavana henkilöstössä.meille.On
3. Fosfaattipuskuroidut suolaliuoksen (PBS) valmiste. (2008). Standardi toimintamenettelyt (SOPS) Virus- ja ihmisen genomiikan laboratoriotieteellinen tiedekunta UASLP. Saatavana osoitteessa: genomiikka.Uaslp.MX
4. "Suolaliuosfosfaatti -harrastaja." Wikipedia, ilmainen tietosanakirja. Huhtikuu 2019, 19:36 UTC. Huhtikuu 2019, 02:57 on.Wikipedia.org.
5. Pietrasanta L, von-bilderling c.Molekyylibiofysiikan aiheet. Saatavana osoitteessa: käyttäjät.Df.Uba.AR
6. Redari-. Manuaalinen. PBS+EDTA. Saatavana osoitteessa: Felsan.com.AR
7. Martin NC, Pirie AA, Ford LV, Callaghan CL, McTurbate K, Lucy D, Scrimger DG. Fosfaattipuskuroidun suolaliuoksen käyttö solujen ja siittiöiden talteenottamiseen. SCI -oikeudenmukaisuus. 2006; 46 (3): 179-84. Saatavana: NCBI.Nlm.NIH.Hallitus
8. Wangen R, Aasebø E, Treeni A, et al. Suojelumenetelmä ja fosfaattipuskuroima suolaliuospesu Akuutti myeloidileukemiaproteomi. Int J Mol Sci. 2018; 19 (1): 296. Saatavana: NCBI.Nlm.NIH.Hallitus
9. Martínez R, Gragera R.  (2008). Histokemian teoreettiset ja käytännölliset perusteet. Tieteellisten tutkimusten ylempi neuvosto. Madridi. Saatavana osoitteessa: Kirjat.Google.yhteistyö.mennä