Puolet siitä, mikä on, perusta, valmistelu, käyttää

Hän Puoliskoni Se on biokemiallinen testi, jota käytetään Enterobacteriace -perheelle kuuluvien bakteerilajien tunnistamiseen. Se on melko ravitseva ja koostuu glukoosista, hiivauutetta, peptonista, kolmoista, l -oornitiinihydrokloridista, bromocreshistä ja agarista violetista.

Sen lyhenteen (MIN) merkitys kuvaa jokaista parametriä, joita voidaan havaita tässä väliaineessa; Liikkuvuus, indoli ja orniini. Motiliteetti on mikro -organismin kyky liikkua flagellan läsnäolon ympärillä. Tämän ominaisuuden havaitsemiseksi väliaineen konsistenssin on oltava puoliksi lempeitä, joten valmisteilla on vähemmän määrää agaria.

Tulosten tulkintakaavio keskikaivoksessa. Lähde: Kirjailijan MSC: n valmistelu. Marielsa gil

Indolin tuotanto todistaa tryptofaanin aminohappojen entsyymin triptofanasa.

Lopuksi ornitiini määrittelee, pystyykö bakteerit dekarboxillaariin.

Perusta

Peptoni, hiivauute ja tripteiini

Nämä elementit edistävät tämän väliaineen ravitsemusvoimaa. Ne toimivat välttämättömien ravintoaineiden ja aminohappojen lähteenä bakteerien kehitykseen.

Lisäksi Triptein on tryptofaanin lähde osoittaa triptofaanin entsyymin esiintymisen triptofanasa.

Indoli on väritön, siksi sen läsnäolo paljastetaan lisäämällä viisi tippaa Ehrlich- tai Kovacs-reagenssia, molemmat p-dimetyyliaminobentsaldehydillä.

Tämän yhdisteen aldehydiryhmä reagoi indolin kanssa tuottaen fuksia punaisen muotoisen tuotteen agarin pinnalle.

Mahdollista värivirhettä olisi pidettävä positiivisena testinä. Testi on luettava heti, koska väri hajoaa.

Toisaalta tämä testi on paljastettava sen jälkeen, kun se on huomannut ornitiinin liikkuvuuden ja dekarboksylaation tulokset.

Voi palvella sinua: Kompakti luu: Ominaisuudet, rakenne, toiminnot

Tulkinta

Positiivinen testi: Fuksia -punaisen renkaan muodostuminen Kovacs -reagenssia lisäämällä.

Negatiivinen testi: Renkaan muodostumista ei ole.

Liikkuvuus

Liikkumiskapasiteetti on todiste.

Negatiivinen liikkuvuustesti todistetaan tarkkailemalla ohutta kasvulinjaa, ja kaikki ympärillä on ilman kasvua.

On tärkeää, että liikkuvuus luetaan ennen paljastamista.

Liikkuvissa bakteereissa, mutta hitaasti kasvua on vaikea osoittaa sen liikkuvuutta tällä väliaineella. Tässä tapauksessa on suositeltavaa käyttää muita testejä tai menetelmiä, kuten keskipitkää liikkuvuutta tai vireillä olevaa pudotusmenetelmää.

Glukoosi

Glukoosi on käymiskelpoinen hiilihydraatti.

Glukoosin käymisen tulisi aina tapahtua periaatteen perusteella, että kaikki Enterobacteriaceae -perheeseen kuuluvat bakteerit käyvät glukoosissa.

L -ornitin

Jos bakteerit tuottavat ornitiinin dekarboksylaasin entsyymi -ornitiini -dekarboksylaasia, se voi toimia heti, kun väliaine on happamassa glukoosin käymisellä.

Entsyymi ornitiinidekarboksylaasi toimii aminohapon karboksyyliryhmään, joka tuottaa amiinia, nimeltään putresina.

Tätä testiä tulisi lukea 24 tunnin inkubaation jälkeen, koska jos yrität lukea ennen kuin voit ymmärtää testin väärin väärällä negatiivisella.

Muista, että ensimmäinen reaktio on glukoosin käyminen, joten väliaine muuttuu keltaiseksi alkuvaiheessa (ensimmäiset 10 - 12 tuntia). Jos ornitiinin dekarboksylointi tapahtuu myöhemmin, väliaine muuttuu violetiksi.

On tärkeää tulkita ornitiinin dekarboksylaatiotesti ennen indolin paljastamista, koska KOVACS -reagenssin aggregaatti muuttaa väliaineen väriä.

Voi palvella sinua: luonnon valtakunnat ja sen ominaisuudet

Tulkinta

Negatiivinen testi: keltainen tai keltainen väliaine.

Positiivinen testi: Täysin violetti puoli.

PH -indikaattori

Tässä tapauksessa käytetään bromokresolia violettia; Henkilö, joka vastaa paljastamisesta, kun pH: n muutokset ovat keskellä. Happamana, indikaattori muuttuu keltaiseksi, ja kun alkaliinit hän muuttuu violetiksi.

Kylvetty ja paljasti tekniikka

Kylvää kaivoksen väliainetta käytetään suoraa tai neulaa ja osa tutkittavasta siirtokunnasta on kerätty sen kanssa.

Syvä puhkaisu tehdään keskellä suorassa linjassa. Se ei ole suositeltavaa.

Inkuboi 24 - 48 tuntia 37 ° C: ssa aerobioosissa. Tarkkaile tuloksia tässä järjestyksessä: ornitiinin liikkuvuus, dekarboksylointi ja paljasta lopulta indoli.

On suositeltavaa viedä 2 ml väliaineeseen, siirtää se steriiliin putkeen ja suorittaa indolitesti siellä, joten jos se antaa negatiivisen, loput alkuperäistä putkea voidaan inkuboida 24 tuntia enemmän, paljastaakseen indolin uudelleen.

Indolin kehitys tehdään seuraavasti: 3–5 tippaa Kovacs -reagenssia lisätään ympäristöön ja sekoitetaan voimakkaasti. Havaitaan, ilmestyykö fuksian punainen rengas vai ei.

Valmistautuminen

Puoliskoni

Punnitse 31 g ympäristöäni ja liukene litraan tislattua vettä.

Kuumenna, kunnes seos kiehuu minuutin ajan, sekoittaen usein, kunnes liuennat kokonaan agarin. Jakele 4 ml väliainetta 13/100 testiputkissa puuvillakansilla.

Steriloi autoklaavissa 121 ° C: ssa 15 minuutin ajan. Poista autoklaavista ja anna seistä suoraan shokissa, niin että muodostuu puolipistevä taco.

Säilytä 2-8 ° C-jääkaapissa. Anna malttin ennen kylvää bakteerikanta.

Dehydratoidun väliaineen väri on beige ja väliaineen väri valmistettu violetti hieman opalesoiva.

Se voi palvella sinua: Divergent Evolution: Syyt ja esimerkit

Valmistetun väliaineen lopullinen pH on 6,5 ± 0.2

Elatusaine muuttuu keltaiseksi happaman pH: n kanssa ja se on violetti alkalista pH: een.

Kovacs Reactive (Indol Test -kehittäjä)

Tämä reagenssi valmistetaan seuraavasti:

150 ml amyyyli-, isoamyyli- tai butyylialkoholia mitataan (mikä tahansa kolmesta). 10 g gr p-dimetyyliaminobentsaldehydi liukene siihen. Seuraavaksi lisätään 50 ml konsentroitua suolahappoa hitaasti.

Valmistettu reagenssi on väritön tai kirkas keltainen. Se on säilytettävä keltaiseen pulloon ja säilytettävä jääkaapissa. Tummanruskea väri osoittaa sen huonontumisen.

Myös Kovacs -reagenssi voidaan korvata Ehrlichin reagenssilla. Jälkimmäinen, koska se on herkempi, on mieluummin paljastaa indolin bakteereissa, jotka tuottavat sitä minimaalisesti, kuten joissakin ei -fermentoimattomissa negatiivisissa bakteereissa ja tietyissä anaerobeissa.

Käyttää

Tämä väliaine on testi, joka täydentää biokemiallisia testejä Enterobacteriace -perheelle kuuluvien bakteerien tunnistamiseksi.

Ornitiinin dekarboksylointitiedot erottuu Shigella Sonnei, Se antaa positiivista, Shigella Boydii, Shigella Flexneri ja S. Dysenterieae, Ne antavat negatiivisia.

Se erottaa myös Enterobacter -suvun Klebsiella -suvun, jossa suurin osa sen lajeista antaa positiivisen.

Lähde: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologinen diagnoosi. 5. ed. Pan -American toimitus.-Lla. Argentiina.

QA

Joka kerta kun puolet minun on valmis, ohjaustesti voidaan suorittaa. Tätä varten tunnettuja tai sertifioituja kantoja käytetään tarkkailemaan väliaineen käyttäytymistä.

Kannat, joita voidaan käyttää Escherichia coli, Morganella morganii, Klebsiella pneumoniae, Enterobacter Aerogenes ja Proteus mirabilis.

Odotetut tulokset ovat JA. coli ja m. Morgaani. Dan M: +, i: + ja o: +.

Klebsiella pneumoniae Anna kaikki negatiivinen (M:-, i:-, o :-). Proteus mirabilis ja Enterobacter Aerogenes Dan M:+ I:- ja O: +.

Viitteet

1. Mac Faddin J. (2003). Biokemialliset testit kliinisen merkityksen bakteerien tunnistamiseksi. 3. ed. Pan -american toimitus. Buenos Aires. Argentiina.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott -mikrobiologinen diagnoosi. 12 Ed. Pan -American toimitus.-Lla. Argentiina.