Puolet perustasta, valmistelusta, käytöstä ja rajoituksista

Hän Puolet tai glukoosin käyminen on puoliksi kiinteää agaria.

Sen ovat luoneet Hugh ja Leifson; Nämä tutkijat tajusivat, että tavanomaiset väliaineet hiilihydraattien happotuotannon tutkimiseksi eivät olleet sopivia tähän erityiseen bakteeriryhmään.

-Lla. Basal -kaupan keskellä. B -. Putket, joissa on puolet kylvetyistä. Lähde: A- ja B -valokuvat, jotka tekijän MSC on ottanut. Marielsa gil.

Tämä johtuu siitä, että ei -enteriset negatiiviset bakteerit tuottavat yleensä pieniä määriä happoja, toisin kuin enterobakteerit.

Tässä mielessä väliaineella on erityispiirteitä, jotka voivat havaita pienet happamäärät, sekä oksidatiivisella että käymisellä. Nämä erot liittyvät peptonien, hiilihydraattien ja agarin määrään.

Tämä väliaine sisältää vähemmän peptonoja ja hiilihydraattien suurempaa pitoisuutta, tällä tavoin, jotka alhaisemat väliainetta alhaiset vähenevät proteiinien aineenvaihdunnan seurauksena, ja happojen tuotanto lisääntyy hiilihydraattien avulla.

Toisaalta agarin määrän lasku suosii koko väliaineen tuottaman hapon leviämistä liikkuvuuden tarkkailun lisäksi.

Elatusaine koostuu peptonista, natriumkloridista, bromotimolin sinisestä, dipotsiomfosfaatista, agarista ja hiilihydraatista. Yleisin hiilihydraatti on glukoosi, mutta muita voidaan käyttää muun muassa oppia, kuten laktoosi, maltoosi, ksyloosi.

[TOC]

Perusta

Kuten mikä tahansa viljelytapa, ympäristön on sisällettävä ravitsemuksellisia aineita, jotka takaavat bakteerien kasvun; Nämä aineet ovat peptonia.

Hiilihydraatti puolestaan ​​tarjoaa energiaa ja samalla sitä voidaan tutkia sitä vastaan ​​olevan mikro -organismin käyttäytymistä, ts. Se mahdollistaa bakteerien luokittelun oksidatiivisiksi, fermentoiduiksi tai ei -sakraaliksi organismiksi.

Keskipiiri sisältää peptoni/hiilihydraattisuhteen 1: 5 toisin kuin tavanomaiset väliaineet 2: 1. Tämä takaa, että peptonien hajoamisesta muodostettujen alkalisten amiinien määrä ei neutraloi heikkojen happojen muodostumista.

Voi palvella sinua: Sphingomyeline: Mikä on, rakenne, toiminnot, synteesi

Toisaalta väliaine sisältää natriumkloridia ja dipotassumfosfaattia. Nämä yhdisteet stabiloivat osmoottisesti keskellä ja säätelevät vastaavasti pH: ta. Bromootimolin sininen on pH -indikaattori, joka tekee keltaisen vihreän värin hapon tuotannolla.

Jotkut mikro -organismit voivat käyttää hiilihydraatteja oksidatiivisesti tai fermentatiivisella reitillä, kun taas toiset eivät ota kumpaakaan tapaa.

Tämä riippuu kunkin mikro -organismin ominaisuudesta. Esimerkiksi jotkut tiukat aerobiset mikro -organismit voivat hapettua tiettyjä hiilihydraatteja, ja valinnaiset anaerobit voivat hapettaa ja käydä niitä ympäröivästä ympäristöstä riippuen, kun taas toiset eivät hapettele tai käyvät hiilihydraatteja (askarolitiikkaa).

Lopuksi CDC: n suositusväline modifikaatiota, joka sisältää erityisen pohjan punaisella fenolilla indikaattorina.

Hapetusprosessi

Glukoosin hapettumisprosessi ei vaadi glukoosifosforylaatiota, kuten käymisprosessissa tapahtuu. Tässä tapauksessa aldehydiryhmä hapettuu karboksyyliryhmään, mikä johtaa glukonihapoon. Tämä puolestaan ​​hapettuu 2-Zo-glyconiksi.

Jälkimmäinen tai kaksi pyruvihapon molekyyliä kertyy tai hajoaa. Tämä järjestelmä tarvitsee hapen tai epäorgaanisen yhdisteen esiintymisen lopullisena elektronia vastaanottajana.

Happojen tuotanto tällä reitillä on heikompi kuin fermentatiivisella reitillä.

Käymisprosessi

Jotta minkä tahansa käytettävissä olevan tien, jotta glukoosin käyminen on ensin fosforyloitua, siitä tulee glukoosi-6-fosfaatti.

Glukoosin käyminen voi viedä useita teitä, tärkein on pentoosin hajoamisen Embden-meyerhof-parna.

Valittu polku riippuu entsymaattisesta järjestelmästä, jolla on mikro -organismeja.

Via de Embden-meyerhof-parna

Embden-Meyerhof-Parna -sovelluksen glukoosin käymisessä. Sieltä välittäjäaine on peräisin pyruvihaposta.

Voi palvella sinua: Photoperiod

Sieltä muodostuu erityyppisiä sekoitettuja happoja, jotka voivat vaihdella lajista toiseen.

Tämä järjestelmä esiintyy ilman happea ja tarvitsee orgaanisen yhdisteen lopullisena elektronia vastaanottajana.

Kotelotie

Glukoosin käymisessä Intner-Doucoroff-reitillä glukoosi 6-fosfaatti menee glucone-ᵼ-laktoni-6-fosfaattiin ja sieltä se hapettuu 6-fosfogluvatoituneeksi ja 2-Zo-3-Dedexi-6 -fosfoglukonaatille, muodostaa lopulta pyruvihapon. Tämä tarvitsee happea siten, että glykolyysiä on.

Reitti pentoosi- tai Warburg-Dikens-monofosfaattimonofosfaatin hajoamiseen

Tämä reitti on hybridi edellisestä 2. Se alkaa samanlaisen kuin entner-doudoroff-reitti, mutta myöhemmin glyseraldehydi-3-fosfaatti muodostetaan pyruvihapon esiastina, kuten myös Embden-meyerhof-parnan tiellä.

Valmistautuminen

Punnita:

2 g grpetonia

5 g natriumkloridia

10 grammaa d-glukosaa (tai hiilihydraattia, joka on valmistettu)

0,03 g bromotimolin sinistä

3 gr agaria

0,30 g dipotaasista fosfaattia

1 litraa tislattua vettä.

Sekoita kaikki yhdisteet paitsi hiilihydraatti ja liukene 1 litraan tislattua vettä. Kuumenna ja sekoita, kunnes liukenee kokonaisuudessaan.

Kun jäähdytetään 50 ° C: ssa, 100 ml glukoosia lisätään 10%: iin (suodatettu).

Aseptisesti jakautuu 5 ml elatusainetta testiputkilla puuvillakansilla ja autoklavatti 121 ° C: ssa, 15 kiloa painetta 15 minuutin ajan.

Antaa pystysuoraan asentoon.

Keskipitkän pH: n on oltava 7, 1. Valmistetun väliaineen väri on vihreä.

Pysyä jääkaapissa.

Sovellukset

Väliaine on erityinen keino määrittää mikro -organismin metabolinen käyttäytyminen hiilihydraattia vastaan. Etenkin niille, jotka muodostavat niukan, heikon tai nolla -tavan hapot.

Kylvää

Jokaiselle mikro -organismille tarvitaan 2 putkea, molemmat on siirrettävä mikro -organismien kanssa tutkiakseen. Kolonia otetaan suoralla kahvalla ja puhkaisu tehdään putken keskelle saavuttamatta pohjaa; Voit tehdä useita puhkaisuja, kunhan et ole kiinnostunut tarkkailemaan liikkuvuutta.

Voi palvella sinua: Alaniini: Ominaisuudet, rakenne, toiminnot, biosynteesi

Yhdelle putkista lisätään kerros steriiliä nestemäisiä vaseliinia tai steriiliä sulaa parafiinia (noin 1 - 2 ml) ja se on merkitty kirjaimella "F". Toinen putki jätetään alkuperäinen ja merkitty kirjaimella "o". Molempia putkia inkubidaan 35 ° C: ssa ja niitä havaitaan päivittäin 3 - 4 päivään.

Tulkinta

Kaasun aineenvaihdunta ja tuotanto

Taulukko: Mikro -organismien luokittelu heidän käyttäytymisensä mukaan avoimissa (oksidatiivisissa) ja suljetuissa (fermentotiivisissa) putkissa (käyttävä)

Lähde: MSC: n tekijä. Marielsa gil

Kaasua havaitaan kuplien muodostumisella tai agarin siirtymällä.

On huomattava, että organismi, joka vain hapettaa glukoosia, mutta ei fermenttiä, ei voi fermentoida muita hiilihydraatteja, se vain hapettaa sen vain. Siksi tässä tilanteessa suljettu putki jätetään pois muiden hiilihydraattien tutkimiseksi.

Liikkuvuus

Lisäksi liikkuvuuden keskellä näkyy.

Positiivinen liikkuvuus: Kasvu, joka ei rajoitu rokotusvyöhykkeeseen. Putken sivuja kohti on kasvua.

Negatiivinen liikkuvuus: Kasvu vain alkuperäisessä siirrossa.

QA

Laadunvalvontana voit käyttää seuraavia kantoja: Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa ja Moraxella sp. Odotetut tulokset ovat:

1. koli: Glukoosin fermenter (sekä keltaiset että kaasuputket).
2. aeruginosa: Glukoosiopettaja (keltainen avoin putki ja vihreä tai sininen tiiviste).
3. Moraxella sp: Ei -removal (vihreä tai sininen avoin putki, vihreä tiivistysputki).

Rajoitukset

-Jotkut mikro -organismit eivät voi kasvaa ympäristössä. Näissä tapauksissa testi toistetaan, mutta väliaineeseen 2% seerumia tai 0,1% hiivauutetta.

-Hapetusreaktioita havaitaan usein lähellä pintaa, ja loput väliaine voi olla vihreää, samalla tavalla kuin positiivisena.

Viitteet

1. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologinen diagnoosi. 5. ed. Pan -American toimitus.-Lla. Argentiina.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott -mikrobiologinen diagnoosi. 12 Ed. Pan -American toimitus.-Lla. Argentiina.
3. Mac Faddin J. (2003). Biokemialliset testit kliinisen merkityksen bakteerien tunnistamiseksi. 3. ed. Pan -american toimitus. Buenos Aires. Argentiina.
4. Laboratoriot Francisco Soria Melguizo. 2009. Glukoosin väliaine. Saatavana osoitteessa: http: // f-aria.On
5. Conda pronadisa -laboratoriot. Glukoosin keskellä. Saatavana osoitteessa: Condalab.com
6. BD -laboratoriot. 2007. Perusväliaine. Saatavana osoitteessa: BD.com