Katalaasitestisäätiö, tekniikka ja käyttötarkoitukset

Se katalaasi Se on metodologia, jota käytetään bakteriologialaboratorioissa korostamaan entsyymikatalaasin esiintymistä niissä bakteereissa, joilla on se. Gramin värityksen vieressä ovat tärkeimmät testit, jotka tulisi suorittaa vasta eristetyille mikro -organismeille. Nämä testit ohjaavat mikrobiologia seuraavien mikro -organismien lopullista tunnistamista varten.

Yleensä sytokromia sisältävillä bakteereilla on katlaasientsyymi, toisin sanoen aerobisilla ja valinnaisilla anaerobisilla bakteereilla. On kuitenkin poikkeuksia, kuten Streptococcus, joilla on valinnaisia ​​anaerobisia mikro -organismeja huolimatta katalaasientsyymistä.

Katalaasitestin suorittaminen, joka osoittaa positiivisen reaktion. Lähde: Ei konetta luettavissa olevaa kirjailijaa. Nase oletettu (perustuen tekijänoikeusvaatimuksiin). [CC BY-SA 3.0 (http: // creativecommons.Org/lisenssit/by-SA/3.0/]]

Siksi katalaasitestiä käytetään pääasiassa Streptocacae -perheen (negatiivinen katalaasi) (negatiivinen katalaasi) stafylocacaee- ja mikrokokoceae (molemmat positiivinen katalaasi) erottamiseen (negatiivinen katalaasi).

Samoin Bacillus -suku (positiivinen katalaasi) erotetaan mm. Clostridium -suvusta (negatiivinen katalaasi).

[TOC]

Perusta

Katalaasi on hydroperoksidaasiksi luokiteltu entsyymi, tämä tarkoittaa, että he käyttävät vetyperoksidia substraattina (H₂JOMPIKUMPI₂-A.

Sitä pidetään myös oksidoreduktaasina, koska reaktiossa on elementti, joka toimii elektronien luovuttajana (vähentävä aine) ja toinen elektronien vastaanottimena (hapettava aine).

Katalaasi on proteiini, joka sisältää prostorisen ryhmän, jolla on neljä kolmiulotista rautatomia (usko⁺⁺⁺), siksi se on homoproteiini. Rauta -ioni pysyy hapettuneena reaktion aikana.

Voidaan sanoa, että katalaasi on vieroitusentsyymi, koska sen tehtävänä on eliminoida bakteereille myrkyllisiä bakteerien aineenvaihduntaa koskevia aineita. Näiden aineiden joukossa on vetyperoksidi.

Vetyperoksidi muodostuu sokerien hajoamisesta aerobicilla. Tämä prosessi tapahtuu seuraavasti:

Superoksidi -ioni (tai₂^-) (Vapaa radikaali) on muodostettu lopputuotteena glukoosin assimilaatiosta aerobisella tiellä. Tämä on myrkyllistä ja eliminoi entsyymi -superoksididysmutaasi, joka muuttaa sen kaasumaiseksi happeksi ja vetyperoksidiksi.

Se voi palvella sinua: Holdridge Life -vyöhykkeet: Mikä on Latinalaisessa Amerikassa

Vetyperoksidi on myös myrkyllistä bakteereille ja se on eliminoida. Katalaasientsyymi avaa vetyperoksidin vedessä ja happea.

Katalaasi voi toimia muihin muihin substraateihin kuin vetyperoksidiin, kuten alkoholiin, aldehydeihin, hapoihin, aromaattisiin amiiniin ja fenoleihin. Katalaasi voi kuitenkin käyttää vetyperoksidia myös muiden myrkyllisten yhdisteiden, kuten metyyli- ja etyylialkoholin hapettamiseksi.

Samoin katalaasia on läsnä fagosyyttisissä soluissa, suojaamalla sitä vetyperoksidin myrkylliseltä vaikutukselta.

Rutiinitekniikka katalaasitestiin

-Menetelmä diossa

Materiaalit

3% vetyperoksidia (10 osaa).

Kannettava lamina

Kertakäyttöinen muovikahva tai puinen sauva.

Menettely

Ota tarpeeksi määrä siirtokasta opiskelemaan koskettamatta agaria, josta se tulee. Kolonian on oltava tuoretta, ts. 18 - 24 tunnin sato.

Aseta pesäke kuivalle pidikkeelle ja lisää siihen tippa 3 -prosenttista vetyperoksidia (voit myös käyttää H: tä₂JOMPIKUMPI₂ 30%: lla). Tarkkaile heti, jos kuplat ovat irrotettuja tai eivät.

Tulkinta

Positiivinen reaktio: Kaasu -irrottaminen, mikä käy ilmi kuplien muodostuessa (vahva kupla).

Negatiivinen reaktio: Kuplan muodostumista ei ole.

-Suora menetelmä puhtaassa kulttuurissa

Aseta 1 ml h₂JOMPIKUMPI₂ 3% puhtaalla sato levyillä tai kiiloilla, jotka eivät sisällä verta (mieluiten ravitsevaa otetta). Tarkkaile, onko kuplamuodostelma välittömästi. Voit myös käyttää h₂JOMPIKUMPI₂ 30%.

Se tulkitaan aivan kuten objektinhaltijamenetelmä.

-Menetelmä kapillaarilla tai fungilla ja Petrishko -putkella

Täytä 67 mm kapillaariputki 20 mm: n korkeudella 3% vetyperoksidilla kapillaarisuutta kohti.

Kosketa eristettyä pesäkettä, jota haluat opiskella kapillaarilla täynnä h₂JOMPIKUMPI₂ 3%_. Tarkkaile, onko kapillaari täynnä kuplia noin 10 sekunnissa. Tämä menetelmä mahdollistaa reaktion puoliksi kvalifioida ristit:

Ilman risteyksiä ei ole kuplia (negatiivinen reaktio).

Voi palvella sinua: Falklandin saarten kasvisto ja eläimistö: Erinomainen laji

+ --Niukasti kuplia (heikko tai viivästynyt reaktio).

++ -Runsas kuplat (kohtalainen reaktio).

+++ -Kuplat saavuttavat vastakkaisen pään (energinen reaktio).

-Taylor- ja Achanzar -menetelmä katalaasitesteille, jotka antavat epäilyksiä

Aseta puhtaassa ja kuivassa liukumäessä eristetyn pesäkkeen, aseta sitten tippa H₂JOMPIKUMPI₂ 0,5% ja kansi kansi. Tarkkaile, onko vangittuja kuplia muodostettu vai ei.

Tulkinta: Kuplien läsnäolo osoittaa positiivisen reaktion. Ilman kuplia, se tulkitaan negatiivisena reaktiona.

Katalaasitesti Mycobacterium -lajeille

Tämä tekniikka on tehtävä säätelemällä pH ja lämpötila. Se on toteutettava laminaarivirtakellossa, koska Mycobacteriumin eri lajien manipulointi on vaarallista.

-Materiaalit

30% tai 110 tilavuusvetyperoksidia (superoksaali).

Fosfaattipuskuri pH 7

80-10%

Mycobacterium -kulttuuri kiilassa 3 - 4 viikkoa

-Valmistautuminen - reagenssit

Fosfaattipuskuri pH 7

Punnita:

1 361 g (kh₂Poikki₄) Anhydra.

1 420 g (Na2HPO3) dysodista fosfaattia vedetty.

Liuota molemmat suolat pieneen steriiliin tislatuun veteen ja täydellisesti veden kanssa jopa 1000 ml.

80-10%

Suorita laimennus 1:10 80: een, joka tulee kaupallisesti keskittyneeksi, jotta tämä etenee seuraavasti:

Ota 1 ml 80: n Tween -.

Lopullinen reagenssi

Sekoita määrä fosfaattipuskuria, jonka määrä on tween 80-10% (yhtä suurina osissa). Määritä laboratoriossa, kuinka paljon haluat valmistaa.

-Menettely

Aseta 5 ml fosfaattipuskuria steriiliin koeputkeen kierteellä kansi (Baquelita).

Ota inokulaatiokahva, ota riittävästi siirtomaa Mycobacteriumin kasvusta kiilassa ja liukene fosfaattipuskuriin.

Peitä putki kiristämättä lankaa. Aseta kylpyhuoneeseen 68 ° C: ssa 20-30 minuuttia. Ota pois ja jäähdytä 22-25 ° C: ssa

Mittaa 0,5 ml lopullista reagenssia (seos) ja lisää se putkeen kylmällä liuoksella. Tarkkaile tai ei kuplan muodostumista.

Se tulkitaan samoin kuin aiemmat tekniikat.

Käyttää

Kun siirtokuntien kasvu rikastetuissa väliaineissa saadaan, grammavärjäys ja katalaasitesti on suoritettava saatuihin pesäkkeisiin. Tämä opastaa mikrobiologia suoritettavista menettelyistä lopullista tunnistamista varten.

Voi palvella sinua: Yksinkertainen litteä epiteeli: Ominaisuudet, toiminnot ja tyypit Lähde: Kirjailijan MSC: n valmistelu. Marielsa gil

 QA

Vetyperoksidireagenssin asianmukaisen toiminnan arvioimiseksi käyttämällä vasta viljeltyjä kontrolleja, kuten Staphylococcus aureus positiivisena kontrollina ja Streptococcus sp negatiivisena kontrollina.

Toinen vaihtoehto, joka toimii positiivisena kontrollina, on sijoittaa tippa vetyperoksidia veriagariin, erytrosyytteillä on katalaasi, siksi kupliva, jos reagenssi on hyvässä kunnossa.

Voit käyttää suklaa -agaria negatiivisena kontrollina, tässä punasolut on jo lueteltu ja testi antaa negatiivisesti.

Rajoitukset

-Älä käytä vanhoja satoja testiin, koska tämä voi aiheuttaa vääriä negatiivisia.

-Vältä siirtokuntien ottamista veren agarin viljelykasveista, jos olet varovainen, ettet kosketa agaria; Tämä toimenpide voi aiheuttaa vääriä positiivisia, koska punasolut sisältävät katalaasia.

-Jos otat pesäkkeen platinakahvalla, älä sijoita menettelyn järjestystä, koska tämä voi tuottaa vääriä positiivisia asioita. Tämä johtuu siitä, että platina kykenee reagoimaan vetyperoksidin kanssa, joka on peräisin kuplasta.

-Älä käytä vetyperoksidireagenssia, jos se on hyvin vanha, koska reagenssi on erittäin epävakaa ja pyrkii hajoamaan ajan myötä.

-Pidä valolta ja jäähdytykseltä suojattu vetyperoksidin reagenssi vaurioiden estämiseksi.

-Suorita laadunvalvonta vetyperoksidireagenssille joka kerta, kun sitä käytetään.

-Ota huomioon, että jos H: tä käytetään₂JOMPIKUMPI₂ 30%: lla reaktiot ovat voimakkaampia kuin H: llä suoritetut₂JOMPIKUMPI₂ 3%.

Viitteet

1. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologinen diagnoosi. 5. ed. Pan -American toimitus.-Lla. Argentiina.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott -mikrobiologinen diagnoosi. 12 Ed. Pan -American toimitus.-Lla. Argentiina.
3. Mac Faddin J. (2003). Biokemialliset testit kliinisen merkityksen bakteerien tunnistamiseksi. 3. ed. Pan -american toimitus. Buenos Aires. Argentiina.
4. BD -laboratoriot. Katalaasireagenssi. Saatavana osoitteessa: http: // winklerltda.Cl
5. Vadequímica -laboratoriot. Vetyperoksidi. Vastaavuus tilavuuksien ja prosentuaalisen välillä. Saatavana osoitteessa: Vadequimica.com