Giemsa -värjäys

Giemsan värjäys on yleinen menetelmä erilaisten kudosten ja verinäytteiden tutkimiseksi

Mikä on Giemsa värjäys?

Se Giemsa -värjäys Se on eräänlainen kliiniset näytteet (kudokset, veri), joka perustuu happoseokseen ja emäksisiä väriaineita. Se loi Gustav Giemsa, saksalainen kemisti ja bakteriologi, joka paransi Romanowskyn työtä lisäämällä glyserolia yhdisteiden stabiloimiseksi.

Alkuperäiseen Romanowsky -tekniikkaan syntyneet muutokset, jotka saivat parantaa merkittävästi mikroskooppisia havaintoja, siis tekniikka kastettiin nimellä Giemsa -värjäys.

Koska se on yksinkertainen suoritettu tekniikka, erittäin toiminnallisuus ja taloudellinen, sitä käytetään tällä hetkellä laajasti kliinisessä laboratoriossa hematologisen hajun, luuytimenäytteiden ja kudosleikkausten suhteen.

Giemsan värjäystekniikka on erittäin hyödyllinen sytologisissa tutkimuksissa, koska se mahdollistaa tiettyjen solurakenteiden havainnon. Tämä tekniikka värjää sytoplasmeja, ytimiä, nukleoloja, tyhjiöitä ja solurakeita, jopa erottaen hienot kromatiinit.

Lisäksi ytimen koon, muodon tai värin merkittäviä muutoksia voidaan havaita, missä se on mahdollista.

Giemsan värjäytymisen perusta

Romanowsky -tyyppisillä väriaineilla on peruskontrasti hapon ja emäksisten väriaineiden välillä, vastaavasti emäksisten ja happamien rakenteiden tappamiseksi. Kuten voidaan nähdä, perusrakenteiden väriaineen happamat väriaineet ja päinvastoin.

Käytetty emäksinen väriaine on metyleenisininen ja sen ruosteiset johdannaiset (Azure A ja Azure B), kun taas happama väriaine on eosiini.

Solujen happamat rakenteet ovat nukleiinihappoja, mm. Basofiilisen segmentoitujen rakeita. Siksi ne värjätään metyleenisillä.

Tässä mielessä solujen perusrakenteet ovat hemoglobiini ja jotkut rakeet, kuten segmentoitujen eosinofiilien sisältö. Nämä värjätään eosinalla.

Toisaalta, koska metyleeni ja Azure Blue on ominaista metakromaattisista väriaineista, ne voivat tarjota muuttuvan sävyn eri rakenteille, niiden hallussaan olevien polyianioiden kuormituksen mukaan.

Näin emäksisten ja happamien väriaineiden strateginen yhdistelmä onnistuu kehittämään laajan värispektrin kunkin rakenteen biokemiallisten ominaisuuksien mukaan kävelemällä vaaleansinisen, tummansinisen, lilan ja violetin sinisen sävyn läpi, happahapon rakenteiden tapauksessa happea happarakenteet.

Eosinan tarjoama väri on vakaampi, tuottaen värejä punertavan, oranssin ja lohen välillä.

Materiaalit

Äiti -liuoksen valmistelu

Äiti -liuoksen valmistus vaatii 600 mg Giemsa -pölyä, jonka mitat ovat 500 cm3 asetonin vapaata metalolista alkoholia ja 50 cm3: ta neutraaleja glyseriiniä.

Valmistelutapa

Aseta raskas giessa -pöly laastille. Jos niukkoja on, ne on jauhettava. Lisää myöhemmin huomattava määrä mitatusta glyseriinistä ja sekoita erittäin hyvin. Saatu seos kaadetaan erittäin puhtaaseen keltaiseen pulloon.

Loput glyseriinistä asetetaan laastiin. Sekoita uudelleen puhdistamaan loput väriaineesta, joka on ollut kiinni laastin seinissä ja heittää sama pullo.

Voi palvella sinua: conidia

Pullo on peitetty ja kestää 2 tuntia vesihauteessa 55 ° C: ssa. Niin kauan kuin.

Myöhemmin seoksen annetaan jäähtyä alkoholin sijoittamiseksi. Aikaisemmin osa mitatusta alkoholista asetetaan laastiin värityksen pesemiseksi, ja sitten se lisätään seokseen, muun alkoholin viereen.

Tämän valmisteen tulisi antaa kypsyä vähintään 2 viikon ajan. Äiti -liuoksesta käytetty osa on suodatettava.

Valmistuksen saastumisen välttämiseksi suositellaan siirtämään osa, jota käytetään jatkuvasti pieneen keltaiseen pulloon, jossa on tippuja. Reracharge joka kerta, kun reagenssi on uupunut.

Puskurin liuoksen valmistelu

Toisaalta 7,2 pH -puskuriliuos valmistetaan seuraavasti:

6,77 g natriumfosfaattia (vedetön) (Nahpo punnitaan₄), 2,59 g kaliumidihydrogeenin fosfaattia (KH₂Poikki₄) ja tislattu vesi jopa 1.000 cm3.

Viimeinen väritys

Lopullisen värjäysliuoksen valmistelua varten mitataan 2 cm3: n 2 cm3: tä ja sekoitetaan puskuriliuoksen 6 cm3: n kanssa. Seosta sekoitetaan.

Asiaankuuluva tosiasia, joka on otettava huomioon, on, että väriaineen valmistustekniikat voivat muuttua kaupallisen talon mukaan.

Värityksen suorittamiseen tarvittavat lisämateriaalit

Kuvattujen materiaalien, värisiltojen, veden tai puskurin kulutuspinnan lisäksi pesua varten, liu'uviipaleita tai peitettä, sekuntikelloa, sekuntikelloa väritysaikojen ja kuivauspaperin tai jonkin materiaalin hallitsemiseksi (sideharso tai puuvilla (sidehuoneen tai puuvillan).

Tekniikka

Värjäysprosessi

1. Ennen väritystä puhtaassa liukumäessä olevan pidennetyn näytteen tulisi olla valmis.

Näytteet voivat olla veri, luuydin, histologiset kudokset tai kohdunkaulan ja vaginaalinäytteet. On suositeltavaa, että pidennetyt ovat hienoja ja niiden kuivuminen on 1 tai 2 tuntia ennen niiden värittämistä.

2. Värisilta sijoitetaan kaikki arkit, jotka ovat värillisiä. Se toimii aina samassa järjestyksessä ja jokainen arkki tunnistetaan hyvin.

3. Aseta muutama tippa 100% (metanolia) metallialkoholia hajulle ja jätä 3–5 minuuttia näytteen kiinnittämiseksi ja kuivattamiseksi.

4. Hävitä arkissa oleva metanoli ja anna kuivua ilmassa.

5. Kun olet kuiva, aseta lopullinen värjäysliuos tippaalla, kunnes se kattaa koko arkin. Jätä laki 15 minuuttia. Jotkut kirjoittajat suosittelevat jopa 25 minuuttia. Se riippuu kaupallisesta talosta.

6. Tyhjennä väriaine ja pese hankaaminen tislatulla vedellä tai 7,2 -puskuriliuoksella.

7. Anna kuivauspaperilla kuivua kuivua, järjestetty pystysuoraan tuen avulla.

Voi palvella sinua: Renina: rakenne, tuotanto, eritys, toiminnot

8. Puhdista liukumäki sideharsolla tai puuvillalla, joka on kostutettu alkoholiin muusta väriaineesta.

Käyttää/sovelluksia Giemsan värjäyksestä

Giemsan värjäystekniikkaa käytetään eri alueilla: hematologiassa, mykologiassa, bakteriologiassa, parasitologiassa, sytologiassa ja sytogenetiikassa.

Hematologia

Tälle värjäytymiselle annetaan yleisimmin käyttö. Sen kanssa tunnistetaan jokainen luuytimenäytteissä tai perifeerisessä veressä läsnä oleva solu. Sen lisäksi, että se laskee kunkin sarjan lukumäärän, kyky havaita leukosytoosi tai leukopenia, trombosytopenia jne.

Koska se on herkkä epäkypsien solujen tunnistamiseksi, se on merkityksellinen akuutin tai kroonisen leukemian diagnoosissa. On myös mahdollista tehdä muun muassa anemioiden diagnoosi, kuten drepanosyyttinen, falciform anemia.

Mykologia

Tällä alueella sen käyttö on yleistä etsinnässä Histoplasma capsulatum (solunsisäinen dimorfinen sieni) kudosnäytteissä.

Bakteriologia

Giemsalla värjättyessä hematologisessa levityksessä on mahdollista havaita Borrelias sp Potilailla, jotka tutkivat toistuvan kuumetta nimeltä tautia. Spiroketteja havaitaan runsaasti punasolujen keskuudessa, kuumeen huipulla otetuissa näytteissä.

On myös mahdollista visualisoida solunsisäiset bakteerit, kuten Rickettsias sp ja Klamydia trachomatis Tartunnan saaneissa soluissa.

parasitologia

Parasitologian alalla Giemsan värjäys on mahdollistanut loisairauksien, kuten malarian, chagasin ja leishmaniaasin, diagnoosin.

Kahdessa ensimmäisessä loiset Plasmodium SP ja Cruzi Tripaosoma, vastaavasti ne voidaan visualisoida tartunnan saaneiden potilaiden perifeerisessä veressä. Niitä löytyy eri vaiheista sen vaiheen mukaan.

Veren loisten etsimisen parantamiseksi on suositeltavaa.

Samoin ihon leishmaniaasi voidaan diagnosoida arvioitaessa Giemsalla värjättyjen nahkabiopsioiden näytteitä, missä loinen löytyy.

Sytologia

Giemsan värjäystä käytetään myös endokerervikaalisten näytteiden sytologiseen tutkimukseen, vaikka se ei ole tekniikka, jota käytetään yleisimmin tähän tarkoitukseen.

Mutta resurssien niukkuuden tapauksissa sitä voidaan käyttää, sillä Pap -järven tarjoama toiminto on samanlainen ja alhaisemmat kustannukset. Se vaatii kuitenkin tutkijan asiantuntemusta.

Sytogenetiikka

Giemsan värjäytymisen merkityksellinen ominaisuus on sen kyky liittyä voimakkaasti adeniinien ja Timinan alueille DNA: n alueille. Tämä mahdollistaa DNA: n visualisoinnin soluitoosin aikana, eri kondensaatiotilastoissa.

Nämä tutkimukset ovat välttämättömiä kromaattisten poikkeavuuksien, kuten kromosomien eri alueiden, diplikaatioiden, deleetioiden tai siirtymien havaitsemiseksi.

Giemsa -värjäys. Lähde: Panreac Applichem ITW Reagents. Versio 2: JMBJUL17 CEIVD10ES. Castellar del Vallés, Espanja.

Suositukset hyvästä värjäyksestä

- Arkkien kuivaamista ei pidä kiihdyttää. Sen kuivumisen varovainen aika on odotettavissa ulkona. Noin 2 tuntia.

Voi palvella sinua: Timina

- Väritys heti 2 tunnin kuluttua parempia tuloksia.

- Jotta hajut kiinnittäisivät ja värjäytyvät paremmin, näyte on jaettava arkkiin siten, että on ohut ja tasainen kerros.

- Edullinen verinäyte on kapillaari, koska smere.

- Jos käytetään laskimoverta, EDTA: ta tulisi käyttää antikoagulanttina eikä hepariinina, koska jälkimmäinen yleensä muodonmuutos solut.

Yleiset virheet Giemsan värissä

Tämän värityksen käytännössä voit tehdä virheitä. Ne osoittavat rakenteiden äkilliset muutokset.

Erittäin sininen väri

Se voi johtua:

- Erittäin paksu.

- Ylittää värjäysajan.

- Riittämättä pese.

- Reagenssien käyttö selvästi neutraalin pH: n yläpuolella (alkali).

Näissä olosuhteissa seuraavien rakenteiden värit ovat vääristyneet siten, että erytrosyyttit ruusun suolan värjäytymisen sijasta n on vihreä, eosinofiilien rakeista, jotka on värjättävä punaisella tiilellä Harmaa, ja niin päällä on poikkeamia tavanomaisissa sävyissä.

Liian vaaleanpunainen väri

Se voi johtua:

- Riittämätön värjäysaika.

- Pitkittynyt tai liiallinen pesu.

- Huonosti kuivuminen.

- Erittäin happamien reagenssien käyttö.

Tässä nimenomaisessa tapauksessa rakenteet, jotka normaalisti värjäytetään sinisellä.

Esimerkki: punasolut vievät voimakkaan kirkkaan tai oranssin punaisen värin, ydinkromatiini näyttää vaaleanpunaiselta ja eosinofiiliset rakeet värjätään kirkkaan punaisesta kirkkaasta.

Saostumien läsnäolo levityksessä

Syyt voivat olla:

- Käytä likaisia ​​tai huonoja viipaleita.

- Älä anna levityksen kuivua.

- Jätä kiinnitysratkaisu liian kauan.

- Riittämätön pesu värjäyksen lopussa.

- Käytetyn väriaineen riittämätön suodatus tai ei -sulkeminen.

Morfologisten esineiden läsnäolo

Laskeissa voi esiintyä morfologisia esineitä, jotka estävät läsnä olevien rakenteiden visualisointia ja tulkintaa. Tämä johtuu siitä, että:

- Käytetyn antikoagulantin tyyppi, kuten hepariini.

- Likaisten, heikentyneiden tai rasvaisten arkkien käyttö.

Tallennustila

Valmistuksen jälkeen väriaine on ylläpidettävä huoneenlämpötilassa (15-25 ° C), jotta väriainetta voidaan estää saostumasta. Se on säilytettävä hyvin suljetussa keltaisessa astiassa.

Viitteet

1. Cannova, D., Brito, E. Ja Simons, m. (2016). Väritystekniikoiden arviointi ihon leishmaniaasin diagnoosiksi. Salus. 
2. Panreac Applichem ITW Reagnts. Giemsa -värjäys. Versio 2: JMBJUL17 CEIVD10ES. Castellar del Vallés, Espanja.
3. Clark, G. Värjäysmenettelyt (1981). Williams & Willkins.