Hematoxylin-eosin staining characteristics, uses, techniques

Se Hematoksyliinin värjäys - eosiini Se on väritekniikka, joka käyttää hematoksyliini- ja eosiinivärien yhdistelmää. Tämä väriainesarja tekee täydellisen duon, koska hematoksylin toimii emäksisenä väriaineena ja eosiinina on happama väriaine.

Perus- tai happamien väriaineiden nimeäminen ei viittaa niiden saamiin pH: e.

Sylinterimäinen epiteeli, joka on värjätty hematoksyliinillä - eosiini (He) -lähde: Todd Straus ja Vladimir Osipov [CC 3: lla.0 (https: // creativecommons.Org/lisenssit/by/3.0)]

Tässä mielessä hematoksyliiniä pidetään emäksisenä (kationisena) väriaineena, ja siksi sillä on affiniteetti happarakenteisiin, kuten solujen ytimeen. Vaikka eosiini on happama (anioninen) väriaine, on affiniteetti alkali- tai emäksisiin rakenteisiin, kuten solusytoplasma.

Tästä syystä tätä väriaineyhdistelmää käytetään laajasti tahroin. Ytimet ovat värjätty tummansinisinä tai violetissa ja vaaleanpunaisessa sytoplasmassa.

Hematoksyliini-eosiinivärjäys on yksi histologian ja sytologian eniten käytetyistä väritystekniikoista sen helpon käsittelyn ja alhaisten kustannusten vuoksi. Sitä käytetään solujen, paksujen hermokuitujen visualisointiin ja tiettyjen kudoksen mikro -organismien läsnäoloon, kuten: loiset, sienet ja bakteerit, muun muassa.

[TOC]

Ominaisuudet

Hematoksyliini

Hematoksyliini on neutraali väriaine. Komponentti, joka tarjoaa väriä (kromoforia), sijaitsee kuitenkin molekyylin kationisessa tai emäksisessä keskuksessa. Siksi sen affiniteetti happamiin rakenteisiin. Sen kemiallinen kaava on c₁₆H₁₄JOMPIKUMPI₆ ja hänen tieteellinen nimensä 7.11b-dihydroindeno [2,1-c] Chromene-3, 4,6A, 9,10 (6H) -Pentol.

Pidä solujen keskukset pääasiassa, koska nämä ovat erittäin rikkaita nukleiinihappoja. Voit myös värjätä virusperäisiä sytoplasmisia sulkeumia.

Niin, että hematoksyliini voi väriaineen on oltava hapettuneessa tilassa ja kiinnitetty metalliin. Jälkimmäinen aikoo katsoa kangasta, ts. Se toimii petoksena.

Kun hematoksyliini hapettuu, hematiinia kutsutaan. Hapetus saavutetaan altistumalla reagenssin happea (ikääntymiselle) tai sen hapettumista auttavilla aineilla (kemiallinen hapettuminen).

Se voi palvella sinua: Heterogeenisten seosten erottamismenetelmät

Eosina

Eosina on väriaine punainen tai vaaleanpunainen. Se on liukenematon veteen, vaikkakin hydrosilmoiva versio on. Yleensä Eosina valmistaa alkoholin liuottamista (etanoli 95).

Värjät sytoplasmat, lihaskuidut, sytoplasmiset organelit ja kollageeni, mutta älä värjätä solukeskuksia. Tämä johtuu siitä, että se on negatiivisesti varautunut, siksi sillä on affiniteetti positiivisesti ladattuihin rakenteisiin.

Eosina on kahta tyyppiä "Y" ja "B". Eosina "Y" tunnetaan keltaisena eosina. Sen tieteellinen nimi on tetrabromi fl uoreseiini ja sen kemiallinen kaava on c_{kaksikymmentä}H₈Br₄JOMPIKUMPI₅.

Toisaalta eosiini "B" kutsutaan joskus sinertäväksi erytrosiiniksi B. Sen tieteellinen nimi on dibromodinitro fl uoreseiini ja kaava on C_{kaksikymmentä}H₈Br₂N₂JOMPIKUMPI₉. Molemmat ovat hyvin samankaltaisia, ja eron tai toisen käytön ero ei ole oikeasti havaittavissa. Suosituin on kuitenkin Eosina "Y".

Eosiinilla on ominaisuus erottaa elävä ja kuollut solu, koska se pystyy ylittämään kalvon vain värjätäkseen sytoplasman, kun solut ovat kuolleet, jättäen väritön solun sytoplasman, jos se pysyy elossa.

Sovellukset

Hermostunut kuituvärjäys

Hematoksyliini-eosiinilla paksut hermokuidut voidaan värjätä ja tunnistaa. Ei ole hyödyllistä värittää ohuita hermokuituja, koska viimeksi mainitun visualisoimiseksi tarvitaan hopeaväriä.

Histologisen ihon leikkaukset

Ihon sarveiskalvon kerroksen tahroissa, jotka käyttävät väriainetta, on eosiini, koska tällä tasolla soluilla ei ole ydintä.

Ihon granuloosakerroksessa hematoksyliini tahraa voimakkaasti keraihialiinirakeisiin, joita löytyy rakeisolujen sisällä. Päinvastoin, ihon hankula.

Eosiini värjää kaikkien solujen sytoplasman ja värin voimakkuuden voi vaihdella yhden kerroksen ja toisen välillä.

Värjäysvärjäys hematoksyliini-eosiinilla

Gómez ja yhteistyökumppanit, vuonna 2005 he osoittivat, että hematoksyliini -eosiinin värjäytyminen oli tehokkaampaa tunnistamaan amibiaasin tapauksia Entamoeba histolytica ja Entamoeba erilainen että tuore visualisointimenetelmä (suolaliuos ja Lugol -liuos) potilailla, joilla on akuutti ripulia.

Voi palvella sinua: Toissijainen alkoholi: Mikä on, rakenne, ominaisuudet, käyttötarkoitukset

Osoitettiin myös, että sillä on suuri herkkyys erytrophagosytoosin havaitsemiseksi (amoebat, joilla on fagosyyttien erytrosyyttejä).

Histologisten leikkausten värjäys tartunnan diagnosoimiseksi

Walwyn ja yhteistyökumppanit, vuonna 2004 he ehdottivat histologisen värjäyksen käyttöä infektioiden aiheuttamien mikro -organismien havaitsemiseksi.

Käyttämällä hematoksyliini-eosiinin väriä onnistui visualisoimaan infektiot Clostridium, Actinomyces, Spiraali tai Kandisti. He onnistuivat myös tarkkailemaan loisen läsnäoloa Sarcoptes Escabiei Nahkaleikkauksissa ja viruksen sulkeumissa sytomegaloviruksen ja herpesin avulla eri kudosten leikkauksissa.

Tekniikat

Histologisten näytteiden suhteen

Histologisten leikkausten värjäys käy läpi sarjan askelia. Ensimmäinen on saada histologinen leikkaus. Tämä on palautettava ja hanki sitten leikkaukset (ultra-etä) mikrotomilla. Tekniikka koostuu seuraavista vaiheista:

1-malmainti ylimääräisestä parafiinista: Xilol tai Hemo -D voidaan käyttää, upota 3-5 minuuttia.

Näytteen 2 helpotus: Tämä saavutetaan upottamalla näyte erilaisiin alkoholipitoisuuksiin (etanoli) laskevassa järjestyksessä (100 °, 90 °, 70 °). Kaikissa tapauksissa 7 minuuttia.

Ylimääräisen alkoholin 3-eliminointi: Tätä varten se upotetaan veteen 7 minuutin ajan.

4-keräys hematoksyliinillä: Näyte on upotettu 6-10 minuuttia lokeroon, joka sisältää hematoksyliiniä. Altistusaika riippuu näytteen koosta ja paksuudesta.

Ylimääräisen hematoksyliinin 5-eliminointi: Vesi pestiin 5 minuutin ajan ja sitten nopea kulku (10-20 sekuntia) valmistetaan happama alkoholilla. Pestiin myöhemmin vedellä uudelleen 5 minuutin ajan. Sitten upotettu etanoliin lämpötilassa 96 ° 1 minuutissa.

6-värillinen Eosinan kanssa: Tätä varten näyte 5 minuutin ajan eosina -tarjotin on upotettu.

Näytteen 7 desyydraatio: Tätä varten alkoholialustat (etanoli) ohitetaan uudelleen, mutta tällä kertaa nousevassa järjestyksessä. (70 °, 90 °, 100 °). (5 sekuntia, 5 sekuntia, 1 minuutti).

8-näytteen selvennys: Tämä altistetaan ksylolille 5-10 minuutin ajan ja kuivuu pysyvästi sinetöimään Kanadan balsamia tai muuta vastaavaa materiaalia.

Jakkaranäytteille etsimään JA. histolytica

Lamellassa pidennetty potilaan uloste ja se on kiinnitetty 80% alkoholilla 5 minuutin ajan. Arkki on upotettu hematoksyliiniin 5 minuutin ajan ja pestään heti vedellä.

Voi palvella sinua: Kemian panokset lääketieteelle

Myöhemmin se upotetaan nopeasti happoalkoholiin ja sitten ammoniakkiseen veteen. Pestä vedellä. Se on värillinen 5 minuutin ajan Eosinassa. Näyte on kuivunut edellisessä tekniikassa selitetyllä tavalla ja lopulta selkeytetään Xilenolla.

Reagenssin valmistelu

- Hematoksyliini

Litrassa tislattua vettä liuottaa 50 grammaa kalium- tai ammoniumalumiinisulfaattia. Kun olet täysin liuennut, lisää 1 gramma kiteytettyä hematoksyliiniä. Kun liukenee kokonaisuudessaan, se lisätään 1 g sitruunahappoa yhdessä 50 g.

Seosta keitetään 5 minuutin ajan, sitten sen annetaan jäähtyä ja suodattaa jäljellä olevien kiinteiden hiukkasten poistamiseksi. Siten valmistettua reagenssia voidaan käyttää välittömästi.

- Eosina

Se voidaan valmistaa alkoholisti tai vesipitoisella pohjalla.

Alkoholijuoma

100 ml: ssa etanolia 95 °: ssa liuottaa 0,5 grammaa eosinaa "y". Lisää sitten muutama tippa jääetikkahappoa.

2% vesipitoinen eosiini

Kohdassa 1250 ml tislattua vettä liuottaa 25 grammaa eosiinia "y" -hydrosilmoitusta. Lisää sitten muutama tippa jääetikkahappoa.

Happo alkoholi

Mittaa 0,5 ml konsentroitua suolahappoa ja täydellinen 100 ml absoluuttisella alkoholilla.

Ammoniakkinen vesi

Mitta 0.5 ml konsentroitua ammoniakkia ja täydellinen 100 ml tislatulla vedellä.

Viitteet

1. Navarrete, g. Ihon histologia. Rev Fac Med Unam 2003; 46 (4): 130-133. Saatavana osoitteessa: medigrafinen.com
2. Gómez-Rivera N, Molina A, García M, Castillo J, Castillo J, García R, Fonseca I, Valenzuela tai.
3. Tunnistaminen Entamoeba histolytica/e. erilainen Tuoretta Amiba-tekniikkaa verrattuna sen värjäytymiseen hematoksiini-eosiinilla akuutissa ripulissa. Rev Mex Pediatr 2005; 72 (3); 109-112. Saatavana osoitteessa: medigrafinen.com
4. Walwyn V, Iglesias M, Almarales M, Acosta N, Mera A, Cabrejas M. Histologisten tekniikoiden hyödyllisyys infektion diagnoosissa anatomisissa kappaleissa. Rev Cub Med Mil, 2004; 33 (2). Saatavana osoitteessa: Scielo.SLD
5. Panreac Applichem ITW Reagnts. Hematoksyliini-eosiinivärjäys. 2017, Espanja. Saatavana osoitteessa: itwreagnts.com
6. ”Eosina." Wikipedia, ilmainen tietosanakirja. 7. marraskuuta 2018, 08:18 UTC. 4. 2019, 22:13 on.Wikipedia.org
7. "Hematoksylin." Wikipedia, ilmainen tietosanakirja. Toukokuu 2019, 11:23 UTC. 4. 2019, 22:48 Wikipedia.org