Agar m.R -.Mikä on, perusta, valmistelu, käyttää

Hän Agar m.R -.S. Se on selektiivinen kiinteä viljelyväliaine, jota käytetään maitohappobakteerien eristämiseen ja laskemiseen, erityisesti Lactobacillus -suvusta. Tämän agarin loi vuonna 1960 ihminen, Rogosa ja Sharpe, kantaen väliainetta saman nimen, mutta monimutkaisuuden vuoksi lyhennettä m käytetään usein.R -.S.

Se koostuu peptoniproteiinista, lihauudusta, hiivauutteesta, glukoosista, sorbitan -monoleatosta, dipbotsiumfosfaatista, natriumasetaatista, ammoniumitraatista, magnesiumsulfaatista, mangaanisulfaatista ja agarista.

Han ja Sharpe Man Agar (M.R -.S.) kylvetty Lactobacillus sp: llä. Lähde: Lahjoitettu valokuva tähän kirjoittajien artikkeliin: Báez E, González G, Hernández G, López E, Mega M. Tutkimuksen aikana otettu valokuva: Maitohappobakteerien ja bifidobakteerien arviointi probioottipotentiaalilla rintamaitoon ja lapsen ulosteisiin.

Tämä koostumus mahdollistaa maitohappobakteerien hyvän kehittymisen kliinisistä näytteistä, kuten uloste, emättimen eritys, suun näytteet ja rintamaito sekä meijerituotteet ja liharuoat.

Sitä ei käytetä rutiininomaisesti kliinisissä laboratorioissa, koska maitohappobakteerit ovat harvoin mukana patologisissa prosesseissa. Elintarvikkeiden mikrobiologian alueella agar M: n käyttö on kuitenkin yleisempiä.R -.S.

Toisaalta tätä väliainetta käyttävät jotkut tutkimuskeskukset, joiden tavoitteena on maitohappobakteerien tutkimus.

Perusta

Mies, Rogosa ja Sharpe on melko monimutkainen koostumus. Repimällä funktio, jonka jokainen sen komponentti täyttää, voit selittää sen perustan.

Peptoniproteiini, lihauute, hiivauute ja glukoosi ovat ravintoaineita, jotka tarjoavat hiilen, typen, vitamiinien ja mineraalien lähteen bakteerien kasvulle. Lisäksi glukoosi on universaali energialähde, jota käytetään useimmissa viljelyvälineissä.

Toisaalta maitohappobakteerien kasvun suosimiseksi välttämättömien kofaktorien (kationien) läsnäolo on välttämätöntä Lactobacilluksen ja siihen liittyvien bakteerien aineenvaihdunnassa; Nämä yhdisteet ovat natrium-, magnesium- ja mangaanisuoloja.

Se voi palvella sinua: Opsonisaatio: Mikä on, tyypit, toiminnot, molekyylit

Samoin sorbitani- tai polysorbaatti -monoleoaatti 80 ovat tärkeä rasvahappojen lähde absorboituna ravintoaineiksi.

Lisäksi sorbitan -monoleoaatti- ja ammoniumsitraattia koskeva laki estävät mukana olevan kasvistoa, erityisesti gram -negatiivisia bakteereja, tarjoamalla tämän agarin selektiivisen luonteen.

Lopuksi, agar -agar on se, joka tarjoaa kiinteän konsistenssin ympäristölle.

Rogosa Sharpe -agarissa on myös muita muunnelmia; Yksi niistä on täydennetty kysteiinillä (M.R -.S.c), erittäin hyödyllinen bifidobakteerien eristämisessä muun muassa mikro -organismit. Toisaalta, MRS: ää on täydennetty neomysiinillä, paromomysiinillä, takahapolla ja litiumkloridilla, erityinen maitotuotteiden bifidobakteerien selektiiviselle lukumäärälle.

Valmistautuminen

Punnitse 68,25 grammaa kuivunut väliaine ja liukene litraan tislattua vettä. Anna seistä 5 minuuttia. Liukeneminen kokonaisuudessaan johtaa lämmönlähteen heiluttamiseen usein ja keittää 1-2 minuuttia. Steriloi autoklaavissa 121 ° C: ssa 15 minuutin ajan.

Kun poistut autoklaavista, anna seistä muutaman minuutin ja jaa edelleen kuuma Petri -steriilillä levyillä.

Anna vahvistaa ja sijoittaa levyt, tilata verihiutaleissa ja säästää jääkaapissa, kunnes käyttö. Anna lautaset ottaa huoneenlämpötilaa ennen niiden käyttöä.

Keskipitkän pH: n on oltava 6,4 ± 0,2. Jotkut kaupalliset talot suosittelevat pH: n välillä 5,5 - 5,9.

Dehydratoitu väliaine on beige ja valmistettu on tumma keltainen.

Sekä kuivatut väliaineet että valmistetut levyt on säilytettävä 2 - 8 ° C.

Sovellukset

Agar -levyt.R -.S. Ne voidaan kylvää pinnalle (uupumus tai Drigalskin lastalla). Sitä voidaan myös kylvää syvyyden mukaan. Levyjä on inkuboitava 37 ° C: ssa mikroaerofiliassa (4% tai₂ ja 5-10% CO₂) 24 - 72 tuntia.

Voi palvella sinua: amensalismi: ominaisuudet, esimerkit, erot ruokailun kanssa

Kylty menetelmä valitaan harjoitetun tarkoituksen mukaisesti (eristäminen tai lukumäärä).

Pesäkkeiden ominaisuudet

Lactobacilluksen oletetut pesäkkeet kasvavat valkeahkojen värien kasvaessa ja niillä on limakalvo tai kermainen ulkonäkö tässä agarissa. Myöhemmin heidän on tunnistettava.

Maitohappobakteerien eristäminen

Tätä varten käytetään pinnan kylvöä. Haasteena olevat näytteet vaativat aikaisempaa menettelyä. 

Rintamaitonäytteiden tapauksessa suositellaan sentrifugoida 1 ml näytettä 14 -vuotiaana.000 RMP 10 minuutin ajan rasvakerroksen poistamiseksi. 900 ui hylätään, ja jäljellä olevassa 100 ui: ssa sedimentti suspendoituu ja agarin pinta M.R -.S. Sitten sinun on levitettävä tasaisesti Drigalskin lastalla.

Jakkaranäytteiden tapauksessa yhden (1) gramman ulosteet punnitaan ja 9 ml steriiliä petoned -vettä 0,1%homogenisoidaan, mikä vastaa laimennusta 1/10. Sitten sarjalaimennot suoritetaan, kunnes lopullinen laimennus 10^-4.

Lopuksi otetaan 100 μl laimennoksia 10^-2, 10^-3 ja 10^-4 Ja jokainen laimennus kylvötään rouva Agariin, jakaen tasaisesti Drigalski -lastalla.

Maitohappobakteerit laskevat

Tässä tapauksessa kylvö tehdään syvyydellä.

Rintamaitonäytteitä varten otetaan 1 ml ja asetetaan steriiliin kartiomaiseen muoviputkeen. Agar MRS: tä lisätään likimääräisessä lämpötilassa 40 ° C lopulliseen tilavuuteen 25 ml, saaden homogeenisen seoksen. Myöhemmin se kaadetaan steriiliin petriin.

Jakkaranäytteille laimennot suoritetaan, kuten yllä on kuvattu. 1 ml kutakin laimennusta otetaan ja muoviputket steriili. Mashed Agar MRS lisätään 25 ml: n tilavuuteen.

Voi palvella sinua: Vesibiomit: Ominaisuudet, tyypit, kasvisto, eläimistö, esimerkit

Kunkin laimennuksen seos kaadetaan tasaisesti Petri -steriileille levyille. Anna lopuksi seistä polymeroitumiseen asti.

Pesäkkeet luottavat ihmiseen ja Sharpe -agariin (M.R -.S.-A. Lähde: Lahjoitettu valokuva tähän artikkeliin. Kirjailijat: Báez E, González G, Hernández G, López E, Mega M. Tutkimuksen aikana otettu valokuva: Maitohappobakteerien ja bifidobakteerien arviointi probioottipotentiaalilla rintamaitoon ja lapsen ulosteisiin.

Tutkimustasolla

Joka päivä maitohappobakteerien tutkimuksesta tulee enemmän kiinnostusta; Erityisesti tutkijat pyrkivät tuntemaan uusia kantoja ja niiden potentiaalia maitotuotteiden valmistuksen standardisoinnin aloitteina, muun muassa.

Tässä mielessä Alvarado et ai. (2007) käytti agar m.R -.S. Suorittaa tutkimus, jossa he eristettiin, tunnistivat ja karakterisoivat maitohappobakteereja, jotka ovat läsnä Ahumado Andien käsityöläisjuustossa.

Juustossa he havaitsivat genrejen bakteerien läsnäolon Lactococcus ja Lactobacillus, ja päättelivät, että eristettyjen kantojen seokset ovat riittäviä aloittavien kantojen valmistuksessa juustojen valmistuksessa pastöroidusta maidosta.

Toisaalta Sánchez y cols. (2017) käytti agar m.R -.S. Maitohappobakteerien läsnäolon tutkimiseksi porsasten ruuansulatuksessa, jotta ne voidaan käyttää natiivien probioottina, jotka lisäävät terveiden sikojen tuottavuutta.

Tällä väliaineella he onnistuivat eristämään neljä lajia: Lactobacillus Johnsonii, Lactobacillus brevis, Enterococcus Hirae ja Pediococcus pentosaceus.

Samoin Báez et ai. (2019) käytti ikääntymistä m.R -.S. Maitohappobakteerien (BAL) ja bifidobakteerien arvioimiseksi probioottisen potentiaalin kanssa rintamaitoon ja lapsen ulosteisiin.

He onnistuivat eristämään 11 ​​bal ja 3 Bifidobakteerit SP Rintamaitossa ja 8 BAL ja 2 Bifidobakteerit SP. Ulosteessa. Kaikki täyttivät tiettyjä parametreja, jotka akkreditoivat ne bakteereiksi probioottisella aktiivisuudella.

Kirjoittajat päättelivät, että sekä rintamaito että imettävien pikkulasten ulosteet toimivat yksinomaan probioottisten bakteerien luonnollisina lähteinä.

QA

Arvioida agarin laatua.R -.S. Hallintalaitteet, kuten:

Lactobacillus fermentum ATCC 9338, Lactobacillus caseei ATCC 393, Bifidobacterium bifidum ATCC 11863, Lactobacillus plantarum MKTA 8014, Lactobacillus lactis Mkta 19435, Pediococcus damnosus MKTA 29358, Escherichia coli ja Bacillus cereus.

Odotetut tulokset ovat tyydyttävä kasvu 6 ensimmäiselle bakteerille, kun taas JA. koli ja Bacillus cereus on estettävä kokonaisuudessaan.

Viitteet

1. Britannian laboratorio. M.R -.S -agar. Saatavana osoitteessa: Britanialab.com