Veriagari

Verenetelmä. Lisenssillä

Mikä on veriagar?

Hän Veriagari Se on rikastettu kiinteä viljelyalusta, jota käytetään monenlaisten mikro -organismien palautumiseen ja kasvuun kliinisistä tai subjektiivisista näytteistä.

Tämä viljelyalusta koostuu pohjimmiltaan rikastetusta perusagarista ja 5% lammasverestä. Agar -emäs voi vaihdella tarpeiden mukaan, mutta pääasiassa koostuu muun muassa peptonasista, aminohapoista, vitamiineista, lihauudusta, natriumkloridista, agarista,. Veren suhteen ihmisen verta käytetään joskus.

Verenkeruu voidaan valmistaa laboratoriossa tai sitä voidaan jo ostaa yrityksiltä, ​​jotka ovat sille omistettuja. Tämän väliaineen valmistelu on erittäin herkkä, mikä tahansa sen kehittämisen huolimattomuus johtaa saastuneeseen erään.

Siksi kaikki mahdolliset varotoimenpiteet on toteutettava ja lopulta suoritettava laadunvalvonta, joka inkuboi 37 ° C 1 -levyn 100: ta kohti, jotka on valmistettu.

Perusta

Staphylococcus aureus, joka on kasvatettu veriagarissa. Lähde: Nathan Reading flickr Nathan r. Twitterissä, Wikimedia Commons

Veriagar on rikastettu, differentiaalinen ja ei -selektiivinen väliaine. 

• Se on rikastettu väliaine, koska se kantaa pääadilisäainetta 5-10% veri agar-pohjalla. Molemmat yhdisteet sisältävät monia ravintoaineita, jotka sallivat useimpien viljelijöiden bakteerien kasvaa siinä.
• Että kasvu tapahtuu ilman rajoituksia, joten se ei ole selektiivinen. Jos lisätään yhdisteitä, jotka estävät joidenkin mikro -organismien kasvua ja suositaan muiden kasvua, siitä tulee selektiivinen. Esimerkiksi, jos lisätään tietyntyyppisiä antibiootteja tai sienilääkkeitä.
• Se on erilainen, koska se mahdollistaa kolmen bakteerin tyypin erottamisen: beeta-hemolyyttinen, alfa-hemoliittinen ja gamma-hemolyyttinen.
• Beeta-hemolyyttiset ovat niitä, joilla on kyky lisaria tai täydellistä. Esimerkkejä ß-hemolyyttisistä bakteereista on Streptococcus pyogenes ja Streptococcus agalactiae.
• Alfa-hemolyyttiset ovat niitä, jotka suorittavat osittaisen hemolyysin, jossa hemoglobiini hapetetaan methemoglobiiniksi, mikä tuottaa vihertävän väriä pesäkkeiden ympärillä. Tämä ilmiö tunnetaan nimellä a tai a-hemolyysi hemolyysi, ja bakteerit luokitellaan a-hemolyyttisiksi. Esimerkki a-hemolyyttisistä bakteereista on Streptococcus pneumoniae ja Streptokokki ryhmän Viridans.
• Gamma-hemolyyttiset tai ei-hemolyyttiset bakteerit kasvavat agarin yli tuottamatta muutoksia siinä, γ-hemolyysinä tunnetuksi vaikutus ja mikro-organismeja ovat γ-hemoliittinen. Esimerkki γ-hemolyyttisistä bakteereista: jotkut kannat Streptokokki ryhmä D (Streptococcus bovis ja enterococcus faecalis-A.

Sovellukset

• Tämä viljelyalusta on yksi yleisimmin käytettyjen mikrobiologian laboratoriossa. Tässä väliaineessa kykenevien mikro -organismien joukossa ovat: tiukat, valinnaiset, mikroaerofiiliset, anaerobiset, grampositiiviset tai gram -negatiiviset bakteerit, nopea kasvubakteerit tai hidas kasvu tai hidas kasvu.
• Jotkut vaativat tai ärsyttävät bakteerit kasvavat myös ravitsemuksellisesta näkökulmasta, samoin kuin sienet ja hiivat. Se on hyödyllinen subjektiivisille tai uudelleenaktivoivalle kannoille, jotka ovat metabolisesti erittäin heikkoja.

Voi palvella sinua: CyclopentanoperhydropenantReno: rakenne ja merkitys

Veri- ja perustoimiston valinta vaihtelee kuitenkin riippuen siitä, että mikro -organismit todennäköisesti toipuvat ja levylle (viljely tai antibiogrammi) käytetystä käytöstä (viljely tai antibiogrammi).

Veriryhmän valinta

Veri voi olla karitsan, kanin, hevosen tai ihmisen.

Suositeltavin on lampaanveri, lukuun ottamatta joitain poikkeuksia. Esimerkiksi eristää lajien lajeja Haemophilus, Jos suositeltu veri on hevosta tai kani, koska lampaanveressä on entsyymejä, jotka estävät tekijää V.

Vähiten suositeltava on ihminen, vaikka se on eniten käytetty, ehkä siksi, että se on helpointa hankkia. 

Veri on defibroitava, saatu ilman lisäainetta ja terveistä eläimistä. Ihmisen veren käytölle on pidettävä mielessä useita tekijöitä:

• Jos veri tulee henkilöiltä, ​​jotka ovat kärsineet bakteeri -infektioista, heillä on erityiset vasta -aineet. Näissä olosuhteissa on todennäköistä, että joidenkin bakteerien kasvu estetään.
• Jos se saadaan veripankista, se sisältää sitraattia ja on mahdollista, että tietyt bakteerit eivät kehitty sen läsnäolossa.
• Jos veri tulee potilailta, jotka käyttävät antibiootteja, herkkien bakteerien kasvu voidaan estää.
• Ja jos veri on diabeetikosta, ylimääräinen glukoosi häiritsee oikein kehittyviä hemolyysikuvioita.

Peruskoron valinta

Veren agar -valmistukseen käytetty pohja -agar voi olla erittäin leveä. Heidän joukossaan ovat: ravintoaine, cerebro -sydämen infuusio, triptych -soijapavut, Müeller Hinton, Thayer Martin, Columbia Agar, Brucella Agar, Campylobacter Agar jne.

Veriagarin käyttö valmistukseen käytetyn pohjaväliaineen mukaan

Ravintoaine

Tätä pohjaa on käytetty vähiten, koska ne kasvavat pääasiassa ei -tarvittavia bakteereja, kuten enteerisiä bakteereja, Pseudomonas sp, S. aureus, Bacillus sp, muiden joukossa. Sitä ei suositella eristämään Streptokokki.

Cerebro -sydämen infuusio (BHI)

Se on yksi useimpien bakteerien kasvulle, se on yksi useimpien bakteerien kasvulle, se on yksi eniten käytettyjä pohja Streptococcus sp ja muut vaativat bakteerit. Vaikka hemolyysikuvioita ei ole tarkoituksenmukaista.

Tällä pohjalla käytetään lampaan verta.

Voit myös valmistaa veriagar -variantteja, joissa muita yhdisteitä lisätään eristämään tiettyjä mikro -organismeja. Esimerkiksi infuusio -aivo -sydän, jota on täydennetty kanin verellä, kystiinillä ja glukoosilla, eristää Francisella tularensis.

Kun taas Cistina Teluriton kanssa on hyödyllistä eristää Corynebacterium dighteriae. Ihmisen tai karitsan verta voidaan käyttää.

Voi palvella sinua: bioottinen potentiaali

Ensimmäisen kanssa beeta-trimolyysi nähdään kapeana halo, kun taas toisen kanssa halo on paljon laajempi.

Sukupuoleen eristämiseen käytetään tätä pohjaa yhdessä bakitratsiinin, maissitärkkelyn, hevosen veren ja muiden rikastuslisäaineiden (isovalex) kanssa Hemophilus sp Hengitysteistä.

Jos hevosen veren kanssa lisätään kloramfenikoli-gentamysiinin tai penisilliini-stuffyin-antibioottien yhdistelmää, se eristää vaativat patogeeniset sienet, jopa paremmalla suorituskyvyllä Sabouraud-glukoosiagarille. Erityisesti on hyödyllistä erikseen Histoplasma capsulatum.

Triptyse -soija -agar

Tämä emäs on suositeltavin hemolyysikuvion ja diagnostisten testien, kuten Opto -Corner- ja Bacitracine -verojen, havaitsemiseksi paremmin. Se on klassinen veriagar, jota rutiini käyttää.

Tämän pohjan avulla voit myös valmistaa erityisen veriagarin Corynebacterium dighteriae, Telurito Cistina ja lampaanveri.

Tämän agarin veren, enemmän kanamysiini-vanncomysiinin yhdistelmä on ihanteellinen anaerobiseen kasvuun, erityisesti Bakteroides sp.

Müeller Hinton Agar

Tätä verta täydennettyyn emäkseen käytetään suorittamaan vaativien mikro -organismien, kuten Streptococcus sp. Se on hyödyllinen myös bakteerien, kuten Legionel pneumophila.

Thayer Martin Agar

Tämä väliaine on ihanteellinen veriagarin perustana, kun epäilyjä suvusta Neisseria, erityisesti Neisseria meningitidis, olettaen että N. gonorrhoeae Se ei kasva veriagarissa. Se myös suorittaa herkkyystestejä Neisseria meningitidis.

Columbia Agar

Tämä pohja on erinomainen näytteiden kylvyttämiseen mahalaukun biopsioista etsimään Helicobacter pylori.

Elatusaine valmistelee 7% defibroituneesta lampaanverestä antibiooteilla (vankomysiini, trialtoprimi, amfoterisiini B ja kefsulodiini) rajoittaakseen läsnä olevien muun tyyppisten bakteerien kasvua.

Sama emäs, jota on täydennetty ihmisen tai karitsan verellä, nalidíxico ja kolistiinihappo on hyödyllinen eristämiselle Gardnerella vaginalis. On myös ihanteellista arvioida antimikrobisia herkkyyttä saman mikro -organismin antibiooteille.

Lisäksi se palvelee veriagarin valmistelua anaerobista viljelyä varten lisäämällä aminoglykosideja ja vankomysiiniä. Tämän emäksen avulla voimme tarkkailla hemolyysikuvioita oikein.

Brucella -agar

Tätä väliainetta käytetty veritoimiston perustana yhdessä K -vitamiinin lisäämisen kanssa on ihanteellinen anaerobisten bakteerien viljelyyn. Tässä tapauksessa suositellaan lampaanveren käyttöä.

Voi palvella sinua: Ihon hengitys: Eläimien ominaisuudet ja esimerkit

Campylobacter -agar

Campylobacter -agar, jota on täydennetty 5 -prosenttisella RAM -verellä ja 5 antibiootilla (kefalotiini, amfoterisiini B, triMeToprim Campylobacter jejuni Ulostenäytteissä.

Valmistautuminen

Jokainen kaupallinen talo tuo pakkauksen kääntöön indikaatiot litran viljelyväliaineesta. Vastaavat laskelmat voidaan tehdä halutun määrän valmistelemiseksi valitun perusagarin mukaan.

Punnita ja liuottaa

Pohja -agar on dehydratoitu (pölyssä), joten se on liuotettava tislatuun veteen, joka on säädetty pH: n 7,3: een.

Valitun pohja -agarin osoittama määrä punnitaan ja liuotetaan vastaavassa vesimäärässä Fixolassa, sitten se lämmitetään kohtalaisella lämmöllä ja sekoittuu kiertoliikkeisiin, kunnes koko pöly.

Steriloida

Kun se on liuennut, steriloi autoklaavissa 121 ° C: ssa 20 minuutin ajan.

Veren kokonais

Autoklaavasta poistuessaan fixola jäähdytetään, kunnes lämpötila vaihtelee välillä 40-50 ° C. Se on lämpötila, joka tukee ihmisen ihoa, ja samalla agar ei ole vielä jähmettynyt.

Tätä varten Fixolaa kosketetaan kädellä ja jos lämpö on siedettävä, se on ihanteellinen lämpötila lisäämään vastaavan defibroituneen veren (50 ml / litraa agaria). Sekoittaa.

Veren aggregaatin kulku on ratkaisevan tärkeää, koska jos se tehdään, kun väliaine on erittäin kuuma, punasolut rikkoutuvat ja väliaine ei auta tarkkailemaan hemolyysiä.

Jos se lisätään liian kylmäksi, muodostuu kokkarit ja väliaineen pinta ei ole sileä voidakseen tehdä striatumista kunnolla.

Kaada Petrin levyihin

Tarjoile steriileissä petrilevyissä heti veren homogenisoinnin jälkeen. Jokaisessa Petri -levyssä kaadetaan noin 20 ml. Tämä toimenpide suoritetaan laminaarivirtauskellossa tai lähellä kevyempää.

Petrin levyillä veren tarjoiluhetkellä ilmakuplia ei pidä jättää plakin pinnalle. Jos näin tapahtuu, Bunsenin sytyttimen liekki ohitetaan nopeasti lautaselle niiden poistamiseksi.

Levyjen annetaan jähmettyä ja ne varastoidaan jääkaapissa (2-8 ° C) käänteisiä, kunnes käyttö. Ennen veriagarilevyjen käyttöä, niiden on oltava karkaisuja kylvääkseen.

Valmistettujen levyjen kesto on likimääräinen 1 viikko.

Viitteet

1. Bayona, m. Mikrobiologiset olosuhteet Helicobacter pylorin viljelyyn. Rev. Kaali. Gastroenteroli. 
2. Forbes, B, Sahm, D., Weissfeld, a. Bailey & Scott -mikrobiologinen diagnoosi. Pan -American toimitus.-Lla.